LRRC10基因促进肺癌细胞的凋亡

为证实心脏中存在一系列特异性表达基因,对细胞增殖发挥着禁锢作用,依据细胞的全能性,这些基因存在抑制癌细胞增殖的可能,将心脏特异性高表达基因LRRC10作为肺癌中的候选因子,首先利用COSMIC网站对LRRC10基因进行生物信息学、生物统计学分析,其次采用细胞流式分析LRRC10基因过表达A549后细胞的周期和凋亡情况.结果显示:LRRC10基因在多个肺癌病人中存有错义突变、拷贝数增加和表达上调的现象.A549细胞中过表达LRRC10基因后,基本不影响细胞周期,但表现出促进A549细胞凋亡的趋势.结果提示心脏特异性基因LRRC10的上调可能通过调节癌细胞凋亡参与肺癌的发生.这为心脏特异性基因在肺癌细胞凋亡中的作用提供了实验证据.     

FHL2基因异位表达对肺癌细胞的影响

依据细胞的全能性,心肌细胞中的高表达基因可能对细胞增殖具有一定的抑制作用。FHL2作为心脏高表达的基因,为证实其对癌细胞增殖具有一定的抑制作用,通过COSMIC网站对FHL2基因进行生物信息学、统计学分析,发现其与肺癌的发生有一定的相关性;采用流式细胞术检测过表达FHL2基因的A549细胞的表型,并进一步通过蛋白免疫印迹检测相关的周期蛋白调控因子,结果表明,在A549细胞中过表达FHL2基因会使细胞周期阻滞,伴随着G_1/S检验点的相关蛋白因子的表达变化。因此,心脏高表达基因FHL2可能是通过调节细胞周期蛋白阻碍A549细胞的增殖,从而达到对肺癌的发生发展的阻碍作用。     

黄芪甲苷对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡相关蛋白表达的影响

观察不同剂量的黄芪甲苷(As-Ⅳ)在体外对非小细胞肺癌(A549)细胞的生长、凋亡等方面的影响,探讨黄芪甲苷抑制A549细胞增殖、促进凋亡的可能分子机制。实验结果表明,As-Ⅳ作用24 h后,肺癌细胞A549的增殖明显受到抑制,具有剂量依赖性。A549细胞中的E-cadherin蛋白表达呈药物浓度依赖性上调,Vimentin蛋白表达下调。经As-Ⅳ作用24 h后的A549细胞,其胞质蛋白Bax/Bcl2表达水平高于对照组,同时As-Ⅳ也促使Caspase-3裂解为cleaved Caspase-3。黄芪甲苷在体外能抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能是通过抑制NEDD4/PTEN通路而激活并促进Bax表达的实现。该发现为临床上治疗非小细胞肺癌提供了有意义的实验依据。     

仙人掌多糖对人肺癌A549细胞形态结构的影响

以人肺癌A549细胞为研究对象,探讨仙人掌多糖组分OP1对人肺癌A549细胞生长抑制,以及对其形态、结构的影响.采用台盼蓝拒染法测定人肺癌A549细胞生长抑制曲线,通过倒置显微镜观察不同质量浓度的仙人掌多糖组分OP1作用于人肺癌A549细胞引发的形态变化.结果表明,仙人掌多糖组分OP1能抑制人肺癌A549细胞增殖,诱导人肺癌A549细胞凋亡,在一定范围内,呈时间、剂量依赖性,作用48h的IC50为(597.55±28.97)μg/mL.经仙人掌多糖组分OP1诱导后,人肺癌A549细胞形态结构出现典型的凋亡特征.     

Erastin对肺癌细胞MACC1基因表达的影响

利用不同浓度的Erastin处理人肺癌A549和A549/DDP细胞,以探究其对MACC1基因表达的影响.采用qRT-PCR,Western Blot检测MACC1 mRNA和蛋白在A549,A549/DDP细胞中表达的差异性,以及不同浓度的Erastin对MACC1基因表达的影响.结果表明,不同浓度的Erastin处理人肺癌A549和A549/DDP细胞48 h后,2种细胞的生长均被明显抑制,与对照组相比终浓度为5,40μmol/L的Erastin处理组其MACC1 mRNA和蛋白表达水平显著降低.在0～40 mg/L终浓度范围内,Erastin能显著降低A549/DDP细胞内MACC1 mRNA和蛋白的表达.     

跨界基因沉默菌株的快速构建及对靶标基因干扰能力的检测

"跨界基因沉默"是一种利用大肠杆菌在哺乳动物细胞中传递小干扰RNA并引起基因沉默的新颖技术,具有实用、稳定和低成本等优点.该技术通过构建一种能转录出短发夹RNA(shRNA)的大肠杆菌,而这种大肠杆菌产生的shRNA能靶向哺乳动物细胞中的特定基因,从而引发RNA干扰(RNAi).本文用RecA同源重组的方法将跨界基因沉默质粒的工作元件快速地整合到大肠杆菌的染色体DNA上,构建了跨界基因沉默菌株.通过吖啶橙染色实验证明了跨界基因沉默菌株能够入侵哺乳动物细胞,最后Western blot结果表明跨界基因沉默菌株可以对靶标基因产生干扰作用.该技术的完善将进一步促进工程菌的研发和利用.     

DR5上调在5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的:观察5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素(AFMC))是否协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡.并探讨其机制是否涉及死亡受体5(DR5)的上调.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞和人胚肺WI-38细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带;Western Blotting检测DR5蛋白表达.结果:单独用亚毒性浓度的AFMC(1.0μmol/L)或TRAIL(30μg/L)处理A549细胞,细胞凋亡率不超过5%.AFMC(1.0μmol/L)联合TRAIL(30μg/L)的A549细胞凋亡率增高(37.80%,P0.01);而WI-38细胞仅有极少量的细胞凋亡(P0.05).DNA琼脂糖凝胶电泳显示:两者合用A549细胞呈现典型的DNA梯形条带图谱,而WI-38细胞未出现DNA梯形条带;Western Blotting分析发现:AFMC呈浓度和时间依赖性上调A549细胞DR5的表达,DR5特异性抑制剂DR5/Fc嵌合蛋白能有效降低两者合用诱导的A549细胞凋亡率(P0.05).然而,AFMC对WI-38细胞DR5表达无明显影响.结论:亚毒性浓度的AFMC选择性增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡.其机制可能与其上调DR5表达有关.     

转染沉默IGFBP-2基因抑制食管癌细胞系TE-1增殖、转移的影响

研究转染沉默IGFBP-2抑制食管癌细胞系TE-1增殖、转移的影响。通过构建好的IGFBP-2的SiRNA绿色荧光载体转染到人食管癌细胞系TE-1中,于荧光显微镜下观测转染效率,通过Western-blot证实基因沉默的效果,并通过CCK8,Transwell和流式来分别评估IGFBP-2-SiRNA对细胞增殖,侵袭和凋亡的影响。结果显示:Western-blot法证实IGFBP-2能有效地被SiRNA沉默,而且IGFBP-2-SiRNA能抑制食管癌细胞系TE-1的增殖、侵袭和诱导凋亡。实验结果表明IGFBP-2在食管癌的发病机理中可能有着重要的作用。IGFBP-2也许能成为食管癌治疗的一个靶向基因。     

复方苦参联合5-氟尿嘧啶调控细胞周期蛋白D1抑制乳腺癌生长作用的研究

为了解苦参联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡及对Cyclin D1表达的影响,采用流式细胞术观察联合用药组(复方苦参+5-Fu)和对照组(二甲基亚砜DMSO+5-Fu)处理后MCF-7细胞凋亡的情况;采用免疫印迹法(Western Blot)观察两组MCF-7细胞Cyclin D1的表达;采用CCK-8细胞增殖实验观察两组MCF-7细胞增殖情况;采用RT-PCR观察两组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA的表达;建立裸鼠荷瘤模型,并观察两组肿瘤组织中Cyclin D1的表达.结果联合用药组处理的MCF-7细胞凋亡(12.7%)高于对照组(6.2%),差异显著.联合用药组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的蛋白表达均低于对照组;联合用药组MCF-7细胞的增殖能力低于对照组(P0.05);裸鼠荷瘤后,联合用药组的直径为(79.8±10.3)mm,明显小于对照组的直径(176.7±26.2)mm(P0.05).说明苦参可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中Cyclin D1的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖,加速MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与抑制Cyclin D1的表达有关.     

功能化石墨烯载hTERTsiRNA的制备及其对宫颈癌Hela细胞的影响

以氧化石墨烯(GrapheneOxide,GO)为基质,制备了氧化石墨烯-聚乙二醇-叶酸(GO-PEG-FA)纳米载体,借助于通过π-π相互作用负载在GO表面的胺甲基芘盐酸盐(PyNH2),介导人端粒酶反转录酶siRNA(hTERTsiRNA)转染入宫颈癌Hela细胞.GO-PEG-FA-PyNH2-hTERTsiRNA纳米基因复合物被成功制备,并通过红外光谱和紫外光谱进行表征.荧光显微镜观察该纳米载体的转染效率明显优于裸siRNA组,Western blot实验检测Hela细胞hTERT蛋白表达显著降低,MTT实验观察该载体对细胞无毒,其共载hTERTsiRNA和抗肿瘤药阿霉素后对Hela细胞生长的抑制具有协同作用.因而该功能化氧化石墨烯可以作为靶向基因载体,有效传递siRNA及化疗药物进入肿瘤细胞发挥作用.     

miR-127-5p下调PTEN的表达促进非小细胞肺癌细胞自我更新和侵袭

为探讨miR-127-5p对非小细胞肺癌球形成细胞自我更新和侵袭的影响及机制,通过miR-127-5p模拟物或抑制剂分别转染H358和A549细胞,采用球形成实验检测H358和A549细胞的自我更新能力,transwell小室侵袭实验检测H358和A549细胞的侵袭能力,蛋白质印记检测PTEN和PCNA的表达,荧光素酶...     

二氢丹参酮Ⅰ对人肺癌A549和H1299细胞自噬的影响

以人肺癌A549和H1299细胞为研究对象，探究二氢丹参酮Ⅰ对其自噬的影响．采用qRT-PCR检测不同浓度二氢丹参酮Ⅰ作用人肺癌A549和H1299细胞48 h后自噬相关基因LC3,Beclin-1 mRNA的表达；采用Western Blot检测不同浓度二氢丹参酮Ⅰ作用人肺癌A549和H1299细胞48h后自噬相关基因LC3,Beclin-1蛋白的表达；免疫荧光法检测人肺癌A549和H1299细胞自噬泡．结果表明，经二氢丹参酮Ⅰ处理后，LC3和Beclin-1表达明显高于未加药处理组（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值增加（P<0.05,P<0.01,P<0.001）；免疫荧光结果显示，经二氢丹参酮Ⅰ处理细胞后，细胞核周围出现集聚的绿色荧光，LC3蛋白集聚形成了自噬泡，表明一定浓度的二氢丹参酮Ⅰ可诱导人肺癌A549和H1299细胞发生自噬．     

TNFAIP1对肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响

为了深入探讨肝癌的发生机制并寻找肝癌的潜在治疗手段,研究了TNFAIP1基因对肝癌细胞HepG2的细胞增殖及细胞凋亡产生的影响.MTT实验发现过表达TNFAIP1基因或干扰TNFAIP1的表达可以显著地抑制或促进HepG2细胞的生长,这表明TNFAIP1基因对肝癌细胞的增殖具有抑制作用.而流式细胞技术则证实过表达TNFAIP1能显著地促进肝癌细胞HepG2的细胞凋亡.     

HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.     

建立可诱导表达TNFAIP1的稳定细胞系

利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞系,扩大培养后在荧光显微镜下观察克隆的诱导效率,得到了低背景,高效诱导表达GFP-TNFAIP1的稳定细胞系,便于研究TNFAIP1在细胞生长、细胞周期和细胞信号通路等方面的作用.     

基因沉默抑制子HC-Pro表达载体的构建

RNA沉默广泛存在于植物等大多数真核生物中,能够防御外源基因的入侵和调控基因表达等.然而,基因沉默抑制子HC-Pro蛋白的具体功能的研究并不十分清楚.本文重点介绍了基因沉默抑制子HC-Pro的表达载体pBI121-HC-Pro的构建及HC-Pro基因在烟草(Nicotiana benthamiana)中的稳定表达.并利用半定量RT-PCR技术检测了目的基因HC-Pro的表达,检测结果表明我们获得了HC-Pro基因稳定表达的转基因烟草株系,为进一步深入研究基因沉默抑制子HC-Pro的功能奠定了实验基础.     

长链非编码RNA SLC7A11-AS1对顺铂耐药人肺癌细胞耐药性的影响

在人肺癌H460及H460/DDP细胞中,通过干扰长链非编码RNA SLC7A11-AS1来探究其对细胞耐药的影响.通过大数据库分析SLC7A11-AS1与肺癌患者生存期的关系,利用实时定量PCR检测SLC7A11-AS1在人肺癌细胞H460和顺铂耐药细胞株H460/DDP中的表达.在H460/DDP细胞中瞬时转染SLC7A11-AS1的干扰片段,MTT法检测H460/DDP对顺铂药物敏感性的变化.结果表明,SLC7A11-AS1表达量高的肺癌患者生存期明显短于SLC7A11-AS1表达量低的肺癌患者(P＜0.05);SLC7A11-AS1的表达在H460/DDP细胞中明显上调(P＜0.05);干扰SLC7A11-AS1表达后,H460/DDP细胞对顺铂的化疗敏感性明显提高.因此,SLC7A11-AS1与肺癌的不良预后相关并影响肺癌的化疗耐药.     

转录因子AP-2α与ACTN1、TES的相互作用

AP-2α是转录因子AP-2家族中的重要一员,与发育和细胞生长、分化和凋亡都有密切的联系.本文用酵母双杂交的方法筛选得到两个与转录因子AP-2α相互作用的蛋白,经测序鉴定分别为ACTN1与TES基因.在先前对AP-2α与TES基因分别克隆并在表达的基础上,进一步克隆并表达了ACTN1基因,并证实了ACTN1蛋白与AP-2α能够在体外相互作用.而且免疫共沉淀的结果表明在HeLa细胞系中过表达的AP-2α与TES蛋白能够处于同一复合体中.同时发现HeLa细胞系中,内源表达的ACTN1蛋白与GFP-TES有明显的共定位.结果提示这3种蛋白可能存在于同一个大的复合体中,通过这样的结合完成复杂的调节功能.     

长非编码RNA基因Z38对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响

为探讨稳定干扰长非编码RNA基因Z38对乳腺癌细胞BT549的影响,向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选获得稳定干扰的细胞,采用RT-PCR检测Z38的表达水平、MTT法检测细胞增殖及耐药性、克隆法检测细胞集落形成能力、碘化丙啶染色方法分析细胞周期、流式细胞术分析肿瘤干细胞标志物CD44和CD24的表达.结果表明,特异性的慢病毒能显著降低Z38表达水平,使细胞增殖能力、抗化疗药物能力及细胞集落形成能力显著降低,导致G_2/M期细胞数目显著减少,细胞周期受阻,并且显著降低了CD44~+/CD24~-细胞群百分比而导致细胞的肿瘤干细胞特性降低.