蛋白农药HrpNEcc防治大白菜软腐病试验

对HrpNEcc蛋白农药应用于大白菜软腐病防治的技术参数进行了研究,研究发现,HrpNEcc纯蛋白田间喷洒使用的适宜剂量为6～10mg/m(2)或者使用体积分数为0.017%～0.033%稀释液为宜,对大白菜细菌性软腐病防治率可达90%左右;贮藏期间使用体积分数0.1%稀释溶液对大白菜细菌性软腐病防治率达到75.4%,...     

响应曲面法优化重组人神经生长因子发酵培养基组成的研究

通过响应曲面法(RSM)达到优化重组人神经生长因子发酵培养基组分含量的目的.对发酵基础培养基采用四因素三水平实验设计,优化了葡萄糖、酵母粉、蛋白胨和KH2PO4的最佳浓度,得到了最大预测值并进行了验证.最终优化培养基组分为:葡萄糖7.95 g/L、蛋白胨19.06 g/L、酵母粉13.51 g/L和KH2PO43.87g/L,此时预测最大菌体量Ymax=2.398 g/L.验证试验结果表明:使用优化后的培养基表达重组人神经生长因子,其菌体量的平均值为(2.357±0.083)g/L,实验值与预测值基本相符,均高于优化前菌体量,且其表达量也得到相应提高.     

克雷伯菌HQ-3厌氧发酵产氢培养基的优化

运用Plackett-Burman设计实验结合SAS数据分析对基于克雷伯菌HQ-3(Klebsiellasp.HQ-3)产氢培养基的主效因素进行筛选,确定产氢培养基的主效因素,利用最陡爬坡实验确定主效因素的响应面中心值,用响应面法和Matlab7.0对厌氧发酵的产氢培养基的主效因子进行了优化.得到的优化的产氢培养基(YH培养基)为:Na2HPO4.12H2O,15.0g/L;KH2PO4,7.7g/L;MgSO4.7H2O,3.7g/L;葡萄糖,21.4g/L;蛋白胨,18.1g/L;酵母膏,8.0g/L;pH=8.3.利用优化的培养基进行厌氧发酵产氢验证,得到最大产氢量为826.3mL/L,与预测值806.0mL/L基本相符.并且优化培养基较初始培养基产氢量621.2mL/L,提高了33%.在最优发酵条件下,对发酵液相产物乙醇、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、异丁酸进行测定,发现乙醇、甲酸、乙酸含量占总液相产物的93%,确定其发酵类型为混合酸途径.     

人Cu，Zn-SOD在重组毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以表达人Cu,Zn-SOD的重组毕赤酵母为出发菌株,通过摇瓶实验研究发酵初始pH值、诱导剂浓度、诱导温度和培养基组成等因素对目的蛋白表达水平的影响.实验结果表明,培养基组分对目的蛋白表达水平的影响最大.与YPG培养基相比,菌株在FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4)中目的蛋白表达量提高5.5倍.在优化摇瓶发酵条件下(诱导剂浓度1%,诱导温度27℃,FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4),初始pH值为6.0),发酵液上清酶活水平为895 U/mL,较初始提高8.5倍;以摇瓶实验结果指导5 L罐发酵,得到13 539 U/mL酶活,为摇瓶试验的15倍.     

高效的苜蓿组织培养再生体系的建立

以保定苜蓿为实验材料,从外植体的基因型、培养基的选择,激素(KT)、水解酪蛋白的浓度等方面探讨了影响保定苜蓿组织培养的因素.结果表明:下胚轴比子叶作为外植体获得的效果更好;改良的SH培养基相对于UM培养基对愈伤组织的诱导更有效;在含有0.2mg/L KT和2 g/L水解酪蛋白的UM培养基上,得到了最大的胚状体诱导率;水解酪蛋白的加入提高了胚状体的质量和成熟率.     

香根草愈伤组织的诱导和快速繁殖

为了寻找大批量快速繁殖香根草的有效办法,以香根草的茎段、茎节为实验材料进行愈伤组织的诱导和快速繁殖的实验.用不同浓度的6-BA、IAA、2,4-D对其不同的外植体进行试验.结果表明:在愈伤组织诱导实验中,MS培养基附加6-BA 0.5mg/L 2,4-D 2.0mg/L的激素组合对茎段愈伤组织诱导效果最佳;将产生的愈伤组织团转入分化培养基中,诱导不定芽,其最适分化培养基为MS附加6-BA 3.5mg/L IAA 0.2mg/L;再生苗在MS培养基附加6-BA 3.0mg/L IAA 0.5mg/L的培养基上,进行生根培养效果较好.可见,茎段和茎节均可作为外植体.考虑到茎段数量较大,易取材,且效果明显优于茎节,认为茎段是香根草组培快繁的理想外植体.     

胞质雄性不育新基因T1243在大白菜中的遗传转化

以大白菜带柄子叶为外植体,通过农杆菌介导法,优化大白菜的遗传转化体系,得出结论:津育75的最佳筛选培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+7.0mg/L AgNO3+7.5mg/L Kan+200mg/L Amp,外植体在黑暗条件下预培养2d,然后用OD600值为0.1菌液侵染2min,共培养2d时转化率最高,为35.48%.对抗性植株进行分子检测,结果表明T1243基因已整合到大白菜中,并可以正常表达。     

激素对油菜子叶再生及转基因瞬间表达的影响

以甘蓝型油菜“湘油15”子叶为外植体,以MS为基本培养基,采用正交试验设计,研究了预培养基2,4-D和6-BA浓度、分化/共培养基NAA和6-BA浓度对子叶芽再生频率和转GUS基因瞬间表达率的影响.结果表明,激素对芽再生频率和转基因瞬间表达率都有重要影响,但激素对芽再生和转基因瞬间表达的影响效应具有不一致性.激素对芽分化的影响程度从大到小依次为再生培养基NAA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D、再生培养基6-BA,推导的对于芽再生的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L、再生分化培养基NAA0.2 mg/L和6-BA3.0 mg/L;激素对GUS基因瞬间表达的影响程度从大到小依次为共培养基NAA、共培养基6-BA、预培养基6-BA、预培养基2,4-D,推导的对于瞬间表达的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 0mg/L和6-BA0.2 mg/L,共培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.推导的对于芽再生频率×GUS基因瞬间表达率的最佳激素组合方案为预培养基2,4-D 1.0 mg/L和6-BA1.0 mg/L,共/分化培养基NAA0.05 mg/L和6-BA3.0 mg/L.     

蝴蝶兰的离体培养与快繁技术研究

将蝴蝶兰花梗腋芽作为外植体,接种于添加不同浓度激素配比的MS培养基上进行离体培养。实验结果表明,不管是已开花的花梗还是未开花的花梗,其腋芽均能诱导产生不定芽,其适宜的培养基配方为MS 6-BA 5.0mg/L;利用诱导产生的不定芽的茎尖进行茎尖培养,可得到大量的原球茎状体,其适宜的培养基为MS 6-BA 3.0mg/L 10％椰乳 5％马铃薯,其诱导率为65％;原球茎状体进行增殖培养的适宜培养基为KC 5％椰乳 10％马铃薯,其增殖倍数为24.2。     

管囊酵母的诱变育种及甜高粱渣水解液发酵

对管囊酵母1771进行硫酸二乙酯(DES)与紫外线(UV)复合诱变,筛选得到一株菌DU-13,其糖醇转化率较出发菌株提高28.7%。用DU-13菌株在甜高粱渣酸水解液和发酵培养基中进行发酵,乙醇产量分别为3.5g/L和7.4g/L;转化率分别为0.173g/g和0.250g/g,水解液发酵效果不如发酵培养基。在甜高粱渣酸水解液中添加营养物质,并设计正交实验优化添加方案。将优化水解液在相同条件下利用DU-13菌株进行发酵,结果表明优化水解液发酵效果优于发酵培养基和水解液：乙醇产量为13.5g/L,转化率为0.378g/g。     

水杨酸对盐胁迫下大白菜种子萌发和幼苗生长发育的影响

研究盐胁迫对大白菜种子萌发和幼苗生长的影响以及不同浓度的水杨酸（SA）对盐害的缓解作用．试验结果显示,不同浓度的SA能够提高盐胁迫环境下大白菜种子的发芽势和发芽率,提高大白菜幼苗的叶绿素含量及可浓性糖含量,降低植物组织中丙二醛含量．通过实验,确定缓解盐害的水杨酸的最适浓度为1．0mmol／L,当水杨酸浓度超过3．0mmol／L时,对作物生长有抑制作用．     

重组大肠杆菌利用醋酸及乳酸为碳源合成PHB

以廉价的工业副产物醋酸及乳酸为碳源,对产PHB重组大肠杆菌进行培养,考察醋酸及乳酸的添加对重组大肠杆菌生长及PHB产量的影响。将来自Cupriavidusnecator的PHB合成操纵子phaCAB基因簇克隆至pBAD载体,得到产PHB菌株BL21＿pBAD＿phaCAB,以阿拉伯糖为诱导剂,在大肠杆菌中进行重组表达。分别使用LB及M9培养基,对重组菌株BL21＿pBAD＿phaCAB进行培养,研究其生长速度及PHB产量,探索产PHB重组大肠杆菌最适培养基。以添加0.04 g/L乳酸、1.2 g/L乳酸、0.02 g/L醋酸、0.6 g/L醋酸、0.04 g/L乳酸+0.02g/L醋酸、1.2g/L乳酸+0.4g/L醋酸的M9培养基(均含2 g/L葡萄糖)为实验组,以M9培养基(含2g/L葡萄糖)为对照组,考察醋酸及乳酸的添加对重组大肠杆菌生长及PHB产量的影响。分别取第6,12,24和36小时的培养液,分析其葡萄糖、醋酸及乳酸含量的变化。结果表明,低氮型M9培养基更适合产PHB重组大肠杆菌在低糖培养环境中生长。在葡萄糖消耗殆尽后,大肠杆菌能够以醋酸及乳酸为碳源进行代谢,因此在培养基中...     

重组人碱性成纤维细胞生长因子类似物在大肠杆菌中的分泌表达研究

用带有大肠杆菌外膜蛋白信号肽序列的重组分泌型表达载体pSE-hbFGF，在大肠杆菌BL21中分泌表达了rhbFGF类似物。SDS－PAGE、免疫印迹结果表明，表达产物分泌到了细胞周质和培养液中，用间接ELISA测定出培养上清中的rhbFGF类似物为24.5mg/L，周质中为36.5mg/L菌液（O.D600nm=10)。同时探讨了发酵培养中影响rhbFGF表达的几个关键因素，如诱导时期的选择、诱导时间的长短、培养基的选择及诱导剂的浓度等。     

肥药双效剂2125,1125和菜腐灵对大白菜的影响

采用随机排列方法施用肥药双效剂1125 2.8 g.kg-1;2125 0.9,1.0 g.kg-1;以施用15%菜腐灵2.0g.kg-1为对照,探讨了肥药双效剂2125,1125对大白菜生长发育、产量、品质及生理指标的影响。结果表明:经2125处理的大白菜比对照和施用1125的极显著增加外叶数、产量、可溶性糖含量、可溶性蛋白质含量和叶绿素含量,极显著降低相对电导率。施用2125的大白菜与对照相比,极显著和显著增加叶片鲜重、干重、比叶重、净菜率和株高。施用1125的大白菜比对照极显著增加产量、可溶性糖含量、SOD、叶绿素b含量、可溶性蛋白质含量,显著降低相对电导率与叶绿素a含量。施用2125和1125的大白菜叶面积比对照略有增加,帮叶比略有提高,对大白菜“三病”的防治效果明显。15%菜腐灵虽对大白菜软腐病有一定防效,但降低产量、品质和耐储性;而施用2125和1125能促进大白菜的生长发育,提高产量和品质,改变大白菜的生理代谢机能,增加耐储性,可替代15%菜腐灵。     

POD、PPO指纹图谱在芸薹属蔬菜分类上的研究

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对芸薹属21个品种根POD同工酶和PPO同工酶进行了研究,并用类平均法(UPGMA)进行了聚类分析。结果表明:大白菜、小白菜、菜心、油菜、壬生菜、京水菜、芜菁属于芸薹种下的亚种或变种,结球甘蓝、紫甘蓝、抱子甘蓝、羽衣甘蓝、花椰菜、青花菜、紫花菜、苤蓝、芥蓝属于甘蓝种下的亚种或变种,雪里蕻、结球芥菜属于芥菜种下的变种。从蛋白质分子水平上分析了芸薹属三大类蔬菜的亲缘关系,并确定了特征指纹图谱。     

菌糠复合剂对不结球白菜生长发育及产量的影响

为确定菌糠复合剂对不结球白菜生长发育及产量的影响,采用盆栽试验的方法,施用不同的菌糠复合剂,定期测定了3茬不结球白菜的株高、根长、叶片数及产量。结果表明:菌糠复合剂可以促进不结球白菜生长、增加产量。其中,以含有链霉菌(Streptomycessp.)和巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)的微生物组合1 菌糠处理的效果最好。     

毒死蜱对不同蔬菜种子生长的毒性研究

为评价毒死蜱对不同蔬菜种子发芽和根伸长的影响,以黄瓜、莴苣、甘蓝作为试验种子,采用水培法,将已催芽的试验种子暴露于一系列浓度的毒死蜱（乳油剂型）溶液中,测定种子的株高抑制率和根伸长下降率。结果表明：毒死蜱对黄瓜、莴苣、甘蓝种子生长均有一定的毒性。同一浓度水平下,黄瓜、莴苣、甘蓝3种试验种子株高和根伸长对毒死蜱的敏感性均为根伸长〉株高。3种蔬菜种子株高对毒死蜱的敏感性为黄瓜〉甘蓝〉莴苣,根伸长对毒死蜱的敏感性为黄瓜〉莴苣〉甘蓝。480g／L的毒死蜱（乳油剂型）对黄瓜、莴苣、甘蓝株高的风险等级为“低风险性”,对黄瓜、莴苣、甘蓝根长的风险等级为“中风险性”。     

Hepc 20在毕赤酵母中的胞内表达及鉴定

构建了Hepc 20的毕赤酵母表达载体,在毕赤酵母中能成功表达有活性的Hepc 20。优化了菌株的培养诱导条件,结果表明BMMY培养基是Hepc 20表达和重组菌株生长的最佳培养基,甲醇诱导终体积分数0.5%,在此条件下Hepc 20在重组菌株中的表达量约为3.6 mg/L。Western blot检测显示的22000处的条带为重组Hepc 20条带;ELISA验证表明重组Hepc 20可以跟抗体特异结合,琼脂扩散法抗菌实验表明重组Hepc 20对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌表现出抗菌活性。     

重组人尿激酶原的工业化制备与性质研究

将含有 pET2 9a prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经 10L种子罐培养及 10 0L发酵 ,IPTG诱导表达 ,其表达量为占菌体总蛋白的 2 0 % ,表达产物经体外变复性 ,CM 纤维素离子交换层析 ,Superdex 75分子筛层析及Affi preppolymyxinsupport亲和层析去热源 ,每 10 0L发酵液得重组人尿激酶原纯品 6g ,纯度达 95 %以上 ,比活大于 1.2× 10 4 IU /mg ,双链含量低于0 .5 % ,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准 .其分子量 (质谱测定 )、氨基酸组成、N、C 端氨基酸序列分析等均与理论值相符 .进行了等电点及肽图等性质研究