一母系遗传非综合征耳聋家系的线粒体DNA突变分析

在问卷调查及家系随访的基础上,在安徽省淮北市收集到一母系遗传非综合征耳聋家系,利用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和测序技术,检测了该家系成员线粒体DNA(mtDNA)上可导致非综合征耳聋的两个突变热点处(12S rRNA基因上的1 555位点和tRNASer(UCN)基因上的7 445位点)的碱基变化,发现该家系所有母系成员的mtDNA上都有A1555G同质型突变,但7 445位点无异常;进而对该家系两个表型明显不同母系成员(一例具有先天性耳聋表型,另一例听力正常)的mtDNA进行全长测序,结果未在mtDNA上发现除A1555G以外的其他位点突变,只发现了27处多态性序列变化,且两成员的mtDNA无序列差异.说明mtDNA上的A1555G同质型突变是该家系部分母系成员致聋的分子生物学基础之一;推测该家系A1555G突变携带者临床表型的差异可能与mtDNA多态性无关,而更可能是核修饰基因与A1555G突变协同作用的结果.     

非综合征母系遗传耳聋的分子遗传学研究

对一个母系遗传的“线粒体耳聋”家系,应用ＰＣＲ,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ,ＰＣＲ产物克隆测序技术对该家系ｍｔＤＮＡ进行了分析,发现该家系全部患者都有ｍｔＤＮＡ１２ＳｒＲＮＡ基因１５５５位点Ａ１５５５Ｇ突变,另外,除此突变位点外,我们还在部分患者中发现了一新的突变位点：ｍｔＤＮＡ１２ＳｒＲＮＡ基因１４３８位点Ａ→Ｇ改变,说明Ａ１５５５Ｇ突变可能是导致该家系耳聋的主要因素之一．     

中国人结直肠癌患者碱基切割修复基因胚系突变及与腺瘤样息肉基因体细胞突变的关系研究

取42例经过病理确认的结直肠癌患者癌组织及癌旁正常组织,抽提基因组DNA,应用单链构象多态性分析(SSCP)、变性高效液相色谱(DHPLC)分析,结合DNA直接测序,在全基因分析humanmutY homologue(MYH)基因胚系突变的同时,探讨其对结直肠癌细胞adenomatous polyposis coli(APC)基因体细胞突变的影响.结果42例患者中检出6例(14.29%)携带MYH基因的胚系突变,其中3例(7.14%)为MYH基因第2外显子单体型突变c.53C>T/c.74G>A(p.Pro18Leu/p.Gly25 Asp),3例(7.14%)为第12外显子的单碱基替换导致的错义突变c.972G>C(p.Gln324His).初步分析显示,这两种突变在正常对照组的检出较低,仅为3/213(1.41%)和0/59(0%).另一方面4/6例携带MYH基因胚系突变患者的癌组织样本中检出5个APC基因体细胞突变.本文结果提示,散发性结直肠癌患者中频繁检出MYH基因的胚系突变,其存在可能导致细胞DNA氧化损伤修复功能减弱,并使机体细胞APC基因发生突变的风险增高,从而可能参与部分结直肠癌的发生.     

国人Ⅱ型长QT综合徊临床特点及KCNH2基因变异

遗传性长QT综合征(LQTS)是一种常染色体遗传性心脏病.特征性表现为心电图上QTc延长,及尖端扭转型室性心动过速(TdP)导致的晕厥和猝死.近年来随着分子遗传学的发展已明确遗传性LQTS是由于编码离子通道的基因或细胞骨架蛋白基因突变造成的,目前已发现1～8种类型,致病基因分别为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1,KCNE2、KCNJ2和Cav2.1.本研究目的是观察中国遗传性Ⅱ型LQTS(LQT2)患者的临床特点及KCNH2突变.应用聚合酶链反应和测序分析,对来自中国19个省市自治区的77个遗传性LQTS家系筛查了LQT2致病基因KCNH2,观察临床表现和心电图改变.77例LQTS家系先证者中,心电图表现为LQT2者42例(54.5%),平均年龄(26.7±12.7)岁,QTc(580±70)ms,发病年龄(17.3±11.5)岁.晕厥触发因素包括运动、情绪激动和铃声刺激等.目前已经发现了9个KCNH2突变,其中4个为首先发现;另外还发现5个KCNH2的核苷酸多态性.证明LQT2为中国最常见的LQTS;中国LQT2患者心电图表现与临床特点与欧美LQT2患者有所不同.     

视网膜色素变性家系遗传分析及基因诊断

通过对一常染色体显性视刚膜色素变性(RP)家系的连锁分析.发现致病基因与RP4连锁,进一步对RHO基因的突变检测,发现RHO的Pro347Leu突变是该家系的遗传基础,运用该结果对家系中2个年幼个体进行了基因诊断,和其他RHO突变引起的RP病人相比.该家系具有发病年龄早,部分成员伴发白内障的独特症状.     

母系遗传耳聋家系核心成员MTO1基因的突变筛查

根据MTO1基因序列及有关文献,采用Oligo6软件设计并合成了8对引物,扩增了淮阴母系遗传非综合征耳聋大家系10例母系成员(5例听力正常,5例具有严重耳聋症状)的MTO1基因12个外显子及其与内含子交界区的DNA片段.测序结果发现5例具有严重耳聋症状患者的MTO1基因与5例听力正常个体的MTO1基因相应序列完全一致,且与MTO1标准序列相比,无任何序列变化.推测MTO1基因可能不对该家系线粒体DNA A1555G突变具有核修饰效应.     

国人Ⅱ型长QT综合征临床特点及KCNH2基因变异

遗传性长QT综合征(LQTS)是一种常染色体遗传性心脏病。特征性表现为心电图上QTc延长,及尖端扭转型室性心动过速(TdP)导致的晕厥和猝死。近年来随着分子遗传学的发展已明确遗传性LQTS是由于编码离子通道的基因或细胞骨架蛋白基因突变造成的,目前已发现1￣8种类型,致病基因分别为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1,KCNE2、KCNJ2和Cav2.1。本研究目的是观察中国遗传性II型LQTS(LQT2)患者的临床特点及KCNH2突变。应用聚合酶链反应和测序分析,对来自中国19个省市自治区的77个遗传性LQTS家系筛查了LQT2致病基因KCNH2,观察临床表现和心电图改变。77例LQTS家系先证者中,心电图表现为LQT2者42例(54.5%),平均年龄(26.7±12.7)岁,QTc(580±70)ms,发病年龄(17.3±11.5)岁。晕厥触发因素包括运动、情绪激动和铃声刺激等。目前已经发现了9个KCNH2突变,其中4个为首先发现;另外还发现5个KCNH2的核苷酸多态性。证明LQT2为中国最常见的LQTS;中国LQT2患者心电图表现与临床特点与欧美LQT2患者有所不同。     

健康人外周血中A20基因3'UTR突变与多态性分析

目的:建立检测NF-κB负调控因子A20基因3'非编码区(3'UTR)单核苷酸多态性(SNP)和突变的方法和rs77191406的检测方法.方法:利用PCR扩增99名健康人外周血单个核细胞(PBMCs)DNA的A20基因3'UTR全长片段,并对PCR产物进行核苷酸序列分析.将所测A20 3'UTR序列与Gen Bank中的序列(NM_006290.3)通过BLAST程序对比,检出可能存在的基因突变.利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测A20基因SNP rs77191406位点多态性.结果:在A20 3'UTR mRNA 3080位点检测出CT突变,该突变在基因库中已有作为SNP登记(rs77191406),该SNP在7例(7.07%)健康人样本中检测到,但并未发现其他突变和多态性.成功建立PCR-RFLP检测A20基因SNP(rs77191406)的方法.结论:首次报道中国健康人群中A20基因3'UTR存在rs77191406,其意义有待进一步明确.     

人体外周血液的培养及若干病例的细胞遗传学研究

本文详细地介绍了以外周血液培养来研究人类染色体的技术,这些都是我们实验室几年来根据国外文献作了一些修改,以适合于我们的具体条件而拟订的.同时应用这些方法对若干病例作了细胞遗传学的研究,主要结果如下:1.四例先天愚型:在这些病例中,绝大多数中期细胞的染色体数均为47.核型分析表明为G-三体型.一般认为这是由于母亲在卵细胞形成时发生了染色体不分离的结果.2.睾丸女性化:这里报导了一个很大的家系,这一综合症的患者在该家系中已络续出现了三代.其中的一个病人用于白细胞的染色体研究.结果是正常人的双倍体数(2n=46), 具有正常男性的核型,即XY.口腔粘膜及多形核嗜中性球的性染色质扦查为阴性.这种结果显然不符合于这样的假设,即认为该种综合症的性染色体组成是XXY.结合以往一些作者的研究,我们认为该综合症是以伴性隐性或限性的常染色体显性而遗传的.但从现有证据尚不足以区分这两种的可能性.3.无睾畸形:白细胞的双倍体数为2n=46,显示正常的男性核(XY).性染色质为阴性.鉴于该病例为散发性的,我们认为它有可能起因于基因突变.4.女性假两性畸形:由白细胞的初步分析,认为可能是XO(45)/XY(46)嵌合体.但为了肯定其确切的核型,还有待于对病者的皮肤和骨髓作进一步的研究.     

急性阑尾炎家族遗传性初探

目的:明确急性阑尾炎是否存在家族遗传性.方法:对经病理证实为急性阑尾炎并行手术的772例患者作回顾性调查分析.结果:有15家系76例有家族遗传倾向,其家族发病率为25.2%(76/302),并在其余695例中随机抽样56例作相关家系调查,其家族发病率为6.4%(56/879),经x2检验,P＜0.005,两组间家族发病率具有极显著的差异.结论:证实部份急性阑尾炎有家族遗传倾向.     

Mutations analysis of STK11 ene in Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominantly inherited disease characterized by multiple gastrointestinal hamartomatous polyps and melanin spots on lips and buccal mucosa, with an increased risk for various cancers. ThePJS gene, a potential tumour suppressor gene, encoding a serine/ threonie kinase (STK11), was mapped to chromosome 19p13.3. To investigate the mutations of STK11 gene in Chinese with PJS, we analyzed its coding sequence in fifteen patientsand twenty unaffected members of six families, including three multigenerational families with PJS and three sporadic families with PJS, by PCR, PCR-DHPLC and DNA sequencing techniques. Ten point mutations were found in the six families, including five missense mutations, one acceptor-splice site mutation, a nonsense mutation and three silent mutations. Our data showed that five missense mutations occurrd at codon 123 (CAG to CAT) in exon 2, codon 161 (ATT to AGT) in exon 4,codon 194 (GAC to GAG) in exon 4, codon 245 (CTC to TTC) in exon 5 and codon 354 (TTC to TTG) in exon 8. One kind of nonsense mutation was detected at codon 37(CAG to TAG) in exon 1. Furthermore, we found an intronic mutation at a splice-acceptor site: a one base substitution from AG to AA in intron 4. These mutations were not detected in 20 normal DNA samples. In three sporadic families, only in one patient, we detected a missense mutation in exon 5. In addition, we found three silent mutations, which may cause polymorphisms of STK11 gene in introns 1(+36), 3(-51) and 5(+27). These results indicated that the point mutation in STK11 might be involved in PJS pathogenesis. Mutation frequency is higher in the families suffering PJS in three or more generations than that of the sporadic cases.     

Mutations analysis of STK_(11) gene in Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominant disease that is characterized by multiple gastrointestinal hamartomatous polyps and melanin spots on lips and buccal mucosa at young age[1,2]. Previous studies have demonstrated that PJS predisposes carriers to cancers of gastrointestinal tract, uterus, ovary, testis, breast and other extragastrointestinal organs[3—5]. The STK11 gene, encoding a serine/threonine kinase at chro-mosome 19p13.3, was identified in 1998 as the main causativ…     

眼皮肤白化病患者的TYR基因突变类型初步研究

目的:对临床诊断为眼皮肤白化病(OCA)患者的TYR基因进行突变筛查,以了解我国大陆OCA患者TYR基因突变类型。方法:应用PCR技术扩增患者及其父母的TYR基因外显子、外显子-内含子交界区及启动子区,以DNA序列测定技术进行突变筛查与鉴定。结果:在8名患者的16个TYR等位基因内,查明9种突变;其中错义突变4种(R77Q、E294K、R299H和W 400L),无义突变2种(R116X和R278X),插入突变2种(929 insC和232 insGGG),剪切位点突变1种(IVS1-3 C>G)。结论:W 400L、R299H分别占本研究所检出全部OCA1突变等位基因的31.3%(5/16)和18.8%(3/16),可能为中国大陆人群中较常见的TYR基因突变类型。     

32例肿瘤组织中p53基因突变的PCR-SSCP、银染色检测

目的　检测肿瘤组织中 p5 3基因的突变率 ,探索其在肿瘤发展过程中的作用 .建立PCR SSCP检测 p5 3突变的常规方法 .方法　检测 32例癌组织和癌旁组织 .用盐沉淀制备样品DNA ,以p5 3基因exon7设计引物 ,用PCR SSCP结合银染色显示结果 .结果　 32例肿瘤标本检出阳性 9例 ,阳性率 2 8.1% .4例癌组织和癌旁组织均为阳性 .其中 2 2例胃癌 ,检出 4例阳性 (占 18.2 % ) ,双阳性者 2例 .结论　p5 3基因突变在肿瘤中具有普遍性 ,癌组织和癌旁组织双阳性者 ,与肿瘤的扩散有关 .该检测方法简便易行 ,有助于对 p5 3基因突变的扫描检测 .     

ANLL中转录因子GATA—2基因点突变

了解转录因子ＧＡＴＡ－２基因在ＡＮＬＬ中的表达和突变情况,方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ检测８５例ＡＮＬＬ病人外周血单个核细胞中ＧＡＴＡ－２基因的表达情况,ＰＣＲ产物进一步经单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析以了解基因突变情况。结果：绝大多数ＡＮＬＬ都表达了ＧＡＴＡ－２基因（８９．４％）,ＳＳＣＰ分析发现一例Ｍ２型的ＰＣＲ产物出现异常迁移带,核苷序列分析显示在ＧＡＴＡ－２基因第８９２位的核苷酸出现点突变,即第     

广西巴马小型猪活化素β_A/β_B基因cDNA克隆与序列分析

目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。     

广西肝癌中HBV感染与N-ras基因突变的研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和免疫组化法检测２９例广西南部肝癌组织中的Ｎ－ｒａｓ基因突变和ＨＢＶ感染状况，结果，肝癌中Ｎ－ｒａｓ基因在第２￣３７密码子之间的突变率为７９．３％，其中２２例有２￣５个突变位点，该基因突变也见于癌旁组织，肝组织中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｓＡｇ和ＨＢｘＡｇ检出率分别为８６．２％和７９．３％，两者具有相关性，并与Ｎ－ｒａｓ基因突变率呈相平行的趋势。因广西南部的肝癌与ＡＦＢ１污染有关，本研究     

Nonsense mutation in the glucokinase gene causes early-onset non-insulin-dependent diabetes mellitus.

Maturity-onset diabetes of the young (MODY) is a form of non-insulin-dependent (type 2) diabetes mellitus (NIDDM) which is characterized by an early age at onset and an autosomal dominant mode of inheritance. Except for these features, the clinical characteristics of patients with MODY are similar to those with the more common late-onset form(s) of NIDDM. Previously we observed tight linkage between DNA polymorphisms in the glucokinase gene on the short arm of chromosome 7 and NIDDM in a cohort of sixteen French families having MODY. Glucokinase is an enzyme that catalyses the formation of glucose-6-phosphate from glucose and may be involved in the regulation of insulin secretion and integration of hepatic intermediary metabolism. Because the glucokinase gene was a candidate for the site of the genetic lesion in these families, we scanned this gene for mutations. Here we report the identification of a nonsense mutation in the gene encoding glucokinase and its linkage with early-onset diabetes in one family. To our knowledge, this result is the first evidence implicating a mutation in a gene involved in glucose metabolism in the pathogenesis of NIDDM.     

PCR—SSCP研究肝癌原发灶和转移灶中P16^INK4exon2的突变

用两步ＰＣＲ法，成功地从石蜡包埋组织ＤＮＡ中扩增了Ｐ＾１６ＩＮＸＫ４ｅｘｏｎ２片段；并用单链构象多态分析ＰＣＲ产物的差异。     

Neuroglobin mutation associated with hypoxia adaptation in Tibet chicken

Globin protein family plays an important role in storing and transporting oxygen. As a newly reported globin, the revealed function of neuroglobin includes binding and storing oxygen as well as facilitating the utilization of oxygen in neuronal cells. In the present study, mutations in exons of chicken Ngb gene were identified with the method of sequencing and created restriction site PCR in Tibet chicken and other four lowland chicken breeds. The mutations of Lys-2224(E4)-Asn and Ser-2279(E4)-Gly were identified in exon 4 of the gene. The Lys-2224(E4)-Asn mutation existed only in Tibet chicken and the mutation frequencies increased with increasing altitude. Analysis of the haplotype and diplotype of the two mutations in Tibet chicken populations of different altitudes showed that the frequencies of TG haplotype and TTGG diplotype also increased with increasing altitude, while the reverse tendency was found on GGAA diplotype. Under the hypoxic simulation incubation, the main haplotype was TG in living embryos and GA in dead embryos. The results showed that the Lys-2224(E4)-Asn mutation may be a specific mutation associated with hypoxia adaptation in Tibet chicken.