基于细胞色素P450单加氧酶介导的4-甲酚氧化降解途径的天麻素生物合成

为实现天麻素的微生物异源生产,将谷氨酸棒状杆菌中4-甲酚降解相关基因cre HIJEFD和药用植物红景天来源的尿苷二磷酸糖基转移酶基因ugt分别克隆至载体pRSFDuet-1和p ACYCDuet-1,转化大肠杆菌后获得重组菌株S1.在S1中诱导关键酶表达后,外源添加4-甲酚,生物转化后对产物进行定性和定量分析.最终以5mmol/L 4-甲酚为底物,重组菌株S1在30℃诱导培养48 h后转化产物中有天麻素生成,产量达到1.5 mmol/L,摩尔转化率为30.3%.本研究实现了从4-甲酚到天麻素的生物转化,可为芳烃化合物降解与天然药物分子生物合成相偶联提供新的思路,并且具有一定的产业化应用前景.     

人角质细胞生长因子-1在水稻中的表达

人角质细胞生长因子（Keratinocyte growth factor,KGF）在组织的损伤修复中起着重要的作用.植物细胞生物反应器是一种成本低、安全性好的蛋白生产系统.本研究将人KGF-1经农杆菌介导法转入水稻中,共获得38株抗性再生植株.Southern杂交和RT-PCR结果表明KGF-1基因整合入水稻基因组中且部分转化株中KGF-1基因得到转录.Western blotting检测结果显示有两株转化水稻中能够表达KGF-1.     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌培养及其影响因素

研究了温度、pH值、溶氧量(以转速表征)、金属离子浓度等因素对氧化亚铁硫杆菌的生长状况及体内ATP酶活力的影响,确定了最适的培养条件.通过对比培养前与培养后微生物扫描电镜(SEM),探讨环境胁迫对微生物表面形貌和菌体生长的影响.结果表明,初始pH 2.0,温度30℃,转速150r/min,氧化亚铁硫杆菌培养60h,酶的活性较高,其中最大值为2.8U/mL,金属离子Zn2+、Cu2+、Mg2+会降低微生物ATP酶的活性,当Zn2+浓度小于0.03mol/L,Cu2+浓度小于0.08mol/L,Mg2+浓度小于0.04mol/L时,对微生物的抑制作用不明显.初始pH=2.0,温度30℃,转速150r/min,培养嗜酸氧化亚铁硫杆菌,与对照菌株相比,菌体形状大小没有明显变化,菌体数量显著增加,菌体表面有生物膜形成.     

一种改进的提取苏云金杆菌质粒DNA的方法

为了建立一种提取苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis)质粒DNA的常规方法,介绍了一种改进的TritonX-100温和裂解法,与碱裂解法和SDS裂解法相比,具有简易、重复性好等优点,对采用该方法提取的质粒DNA进行电泳,取得了较理想的效果,说明这种方法较适用于苏云金杆菌质粒DNA的提取。     

红球菌菌株腈水合酶提取方法优化

研究了红球菌(Rhodoccus sp.Tccc28001)腈水合酶初步提取实验.对腈水合酶提取的菌体培养时间、细胞的超声破碎方法和硫酸铵分级分离方法进行了优化.结果表明,提取的最佳条件为:培养96 h收获菌体;在4℃下溶菌酶处理菌悬液40 h后进行超声波处理,400 W超声破碎60min,分2次进行,每次30 min(60个循环,15 s超声,15 s间歇);然后使用40 mmol/L磷酸缓冲液,经20%~70%饱和度硫酸铵沉淀,能获得最高产率的腈水合酶.此研究为腈水合酶的层析纯化奠定了基础.     

磷酸缓冲液对大豆种子萌发期抗冷性的影响

用0.01mol/L的pH5.8磷酸缓冲液浸种9h,可在大豆种子萌发期低温胁迫((3±1）℃,24h)条件下,能有效地降低相对电导率,水溶性蛋白含量和稀碱提取蛋白含量明显增加,脯氨酸含量也显著增加.表明磷酸缓冲液浸种对大豆种子萌发期在低温胁迫时,具有防护作用.     

甲胺磷农药降解菌的筛选及其降解效能研究

从长期施用有机磷农药的土壤取样,通过驯化、富集培养,筛选到2株能降解甲胺磷农药的菌株HK-1和GLY-1.利用分光光度法分析了菌株在含1.5 g/L MAP的无机盐培养液中培养72h下的降解率,菌株HK-1和GLY-1的甲胺磷降解率分别为85.71%和80.25%.2株菌的遗传稳定性较好,对甲胺磷农药的耐受浓度为3 g/L,且可降解有机磷乐果和久效磷.菌株生长的最适甲胺磷浓度、温度、pH和接种量分别为1.5 g/L、25-30℃、7.0和4%-6%.两株菌对常用抗生素表现出不同程度的敏感性,金属离子对菌株降解甲胺磷农药有不同程度的促进或抑制作用.通过Biolog鉴定系统,将HK-1和GLY-1初步鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa sp.）和特瑞特西苍白杆菌（Ochrobactrum tritici sp.）。     

两相体系中微生物转化法制备依西美坦

采用有机介质中微生物转化的方法,对甾体C1,2位的生物脱氢进行了研究.通过考察有机溶剂对甾体底物和产物的溶解度,微生物细胞在不同有机溶剂中的存活率以及有机溶剂的加入量,构建了较合适的二甲苯/发酵液两相体系,且二甲苯加入量占总体积的15%为宜.然后以雄甾-4-烯-6-亚甲基-3,17-二酮为底物,利用简单节杆菌(Arthrobacter simplex)完整细胞在两相体系中对甾体A环C1,2位进行生物脱氢,得到抗肿瘤药物依西美坦(雄甾.1,4.二烯-6.亚甲基.3,17.二酮).对转化时间、转化温度、摇床转速、摇瓶装液量等条件进行了一系列的研究.结果表明,在装液量为20 mL每100 mL三角瓶,温度为32℃,转速为180 r/min,转化时间为24 h的条件下,转化率可达到13.6%.     

古尼虫草对苏云金杆菌抗紫外辐射的保护作用

用古尼拟青霉（paecilomyces gunnii)不同生长天数的培养液所培养的苏云金杆菌（bacillus thuringiensis)经紫外辐射后,其活菌数有很大差异。说明古虫尼草处于稳定生长期的培养液中所含抗紫外辐射的成分最高;古尼拟青霉的培养液、古尼虫草（cordyceps gunnii)子实体浸提液所培养的苏云金杆菌经紫外辐射后,活菌数依次对比对照提高,说明了抗紫外辐射的成分在古尼虫草子实体浸提液和菌丝体浸提液中的含量比较高,在古尼拟青霉培养液中较低。     

常用生物农药及使用方法之一

微生物体农药 苏云金杆菌(B.t)剂型100亿活芽孢/克、150亿活芽孢/克可湿性粉剂和100亿活芽孢/毫升悬浮剂,主要用于防治棉铃虫、烟青虫、小菜蛾、菜青虫等鳞翅目害虫.     

枯草芽胞杆菌ACCC-10619产芽胞条件的研究

通过单因素发酵试验和正交试验,确定了枯草芽胞杆菌ACCC-10619最佳培养基配方和发酵条件.结果表明最佳质量分数组合为:麸皮3.0%,葡萄糖3.0%,硫酸铵0.5%,硫酸锰0.05%,发酵温度33℃,初始pH为7.0,发酵周期36 h,静置时间12 h.经100 L发酵罐液体扩大培养,芽胞产量达8.5×1013个/L.为枯草芽胞杆菌微生态制剂生产应用提供参考.     

甜瓜胚性愈伤组织诱导研究

以甜瓜无菌苗4日龄子叶和1~4 mm2成熟种子切块为外植体,接种于不同培养基,在不同培养条件下,研究不同质量浓度的激素、不同暗培养时、不同类型外植体愈伤组织诱导的情况.研究结果表明,甜瓜成熟种子4日龄子叶外植体在加有2,4-D(1 mg/L),NAA(1 mg/L),6-BA(0.5mg/L)和蔗糖(3%)的MS培养基上先暗培养1周,再转移到光照条件25℃,16 h光周期下培养1周,最后转移到无任何激素的MS培养基中,胚性愈伤组织的诱导效果最好.     

用磷酸盐缓冲液提取车前草可溶性膳食纤维

采用磷酸盐缓冲液作为提取液从车前草中提取可溶性膳食纤维,确定提取可溶性膳食纤维的最佳条件.实验表明,对提取膳食纤维的影响因素为提取液pH、提取温度、提取液浓度、提取时间.最佳提取条件是温度90℃,浓度0.09 mol/L,pH值为7.2,提取时间80 min.     

苏云金芽胞杆菌cry7Ab9基因的克隆与杀虫活性的测定

以辽宁省千山市的22株苏云金芽胞杆菌进行PCR cry型的cry7类基因鉴定,对cry7类基因进行克隆表达及生物活性测定,为cry基因储备奠定基础.菌株QZG121经比对后发现含有cry7Ab基因.克隆该基因全长序列为3 417 bp,编码1 138个氨基酸残基,相对分子质量为130 000,并在Gene Bank中登记,基因登录号为GU936713,由苏云金芽胞杆菌国际命名委员会正式命名为cry7Ab9.通过构建原核表达系统获得cry7Ab9基因表达蛋白,并进行暗黑鳃金龟幼虫杀虫活性的测定,7天校正死亡率10 mg.L-1为11.11%、100 mg.L-1为25.93%;两周校正死亡率10 mg.L-1为33.33%、100 mg.L-1为48.15%,LC50为289.99 mg.L-1.     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.     

黄原胶发酵染菌的控制技术

一、概述黄原胶是一种微生物生产的多糖，是一种优良的食品添加剂，具有很好的粘性、流变性、可塑性，在食品工业、石油工业中有较广的用途。黄原胶生产，其核心主要是利用人工不断扩大培养的黄单饱杆菌的生化作用，把玉米淀粉转化为黄原胶多糖。黄单饱菌是一种好氧性的、杆状细菌，它的最适宜发酵温度为２８±１℃。该温度是多种好氧菌适宜温度，在黄原胶发酵中各种球菌（双球、四球等）、球状杆菌的感染较为严重，在黄原胶发酵过程中一旦感染球菌或球状杆菌，轻则发酵液粘度低、成品性能不好，重则导致发酵液中的黄单饱菌消失，发酵液不产…     

细胞转染条件的优化

通过对3种细胞转染方法(电穿孔法，磷酸钙法，阳离子性的脂质体法)的比较及优化，获得了理想的转染率，以进一步从细胞水平研究基因表达调控及小鼠ES细胞打靶．电压在350～450V，电穿孔法转染率与电压呈线性关系；用HEPES缓冲液能显著提高磷酸钙法转染率；低质量的DNA与细胞过长时间接触降低阳离子性脂质体法的转染效率．根据各种方法的特点选择和优化合适的细胞转染方法，可以提高哺乳动物细胞的转染率．     

花椒挥发油化学组成及抑菌活性研究

气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析了花椒(Zanthoxylum Bungeanum Maxim)挥发油的主要化学成分,并采用气相扩散法、平板扩散法研究了花椒挥发油对6种细菌和5种真菌的抑菌活性.结果表明:花椒挥发油主要含有烯醇及其酯类、萜烯类化合物,且具有较强的抑菌活性.花椒挥发油对6种细菌和5种真菌的最低杀菌浓度(MBC或MFC):枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为25.00mL/L,大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌和普通变形杆菌为12.50mL/L,沙门氏菌为6.25mL/L,黑曲霉、青霉、黄曲霉、酵母为12.50mL/L,根霉为25.00mL/L.高温加热减弱挥发油的抑菌活性.     

正交设计优化苜蓿ISSR-PCR反应体系的研究

以苜蓿基因组DNA为模板,利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物和模板)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合苜蓿的最佳ISSR反应体系:20μL反应体系中加83.4 nkat Taq酶,2.0 mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.0μL,0.4 mmol/L dNTP,0.2 mmol/L引物,2.5 ng DNA模板.PCR扩增反应程序为:94℃预变性4 min(94℃变性1 min,45~53℃退火1 min,72℃延伸1 min)40个循环,于72℃延伸7 min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.     

铁氰化镍/银复合修饰电极的制备及对氟康唑的电催化作用

在含有Ag+,Ni2+,K3Fe(CN)6的胶体混合溶液中,用电化学沉积方法制备了一种过渡金属铁氰化物——铁氰化镍/银复合膜(Ag/NiHCF)修饰石墨电极(SG).在pH 5.00的醋酸-醋酸铵缓冲液中,Ag/NiHCF/SG修饰电极对氟康唑的电极反应有催化作用,氟康唑还原峰的峰电流与浓度在8.00×10-7～5.00×10-5 mol/L范围内呈良好线性关系(r=0.986),检出限为2.50×10-9 mol/L.该电极已成功用于氟康唑注射液中氟康唑含量的测定,回收率为96.5%～109%.