第三代测序细菌基因组DNA提取方法的比较

为筛选有效提取细菌菌株总DNA的方法,分别采用SDS法、CTAB-SDS法、试剂盒法和改良试剂盒法对苏云金芽胞杆菌、粘细菌和放线菌进行总DNA的提取、电泳检测、NanoDrop 2000测定、PCR扩增.对放线菌和苏云金芽胞杆菌,用改良试剂盒法所提取的总DNA纯度较高,电泳条带清晰,DNA主带位于23 kb,单位体积菌液所提取到的总DNA较SDS法和CTAB-SDS法高,能满足下游的PCR扩增等分子操作.对待测样品所做的质检报告也证实样品合格,可用于后续建库、测序.而粘细菌提取到的总DNA由于它们的OD260/230在2.0以下,没有达到第三代测序样品的要求.改良试剂盒法所提取到的总DNA大多数可以满足第三代测序技术样品制备的要求.     

苏云金芽胞杆菌高效电转化方法的建立

电转化已经成为苏云金芽胞杆菌工程菌构建过程中非常重要的一种外源基因导入方法.高效率的电转化方法将加速这类研究进展.通过对培养基、培养时间、感受态细胞制备、电转化缓冲液、电压参数的优化,建立一种高效的苏云金杆菌电转化方法.苏云金杆菌生长在含有0.5 mol/L山梨醇的BHI培养基中,30℃振荡培养至OD600值达到0.6～0.8,细菌细胞经1 g/L蛋白酶K在37℃处理20 min,然后用电转化缓冲液洗涤2遍,设定电压为1 800 V,电击1次.利用该方法,pHT315质粒在苏云金杆菌中的转化效率大幅提高.     

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白.原子力显微镜观测,发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构;等电点法提取的得率高,不能检测到完整的晶体结构.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1~2倍.将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性,经统计分析,液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1.5~3倍.     

一种适合抗癌药紫杉醇产生菌AFLP分析的DNA提取方法

比较研究了2种常规的DNA提取方法及一种新改进的抗癌药紫杉醇产生菌DNA提取方法.结果表明,CTAB提取法DNA产量低,多糖和蛋白质含量高;高盐低pH法(SD S法)提取DNA的产量较高,蛋白质和多糖含量高,需要进一步去除;新改进的DNA提取方法,DNA产量极高,而且蛋白质含量和多糖含量也低,适合AFLP分子标记技术对该菌的分子生物学研究.     

一种简便的石斛DNA提取方法

对石斛兰基因组DNA的提取方法进行了改良,提出一种简便、实用的DNA提取方法,经紫外检测、电泳检测及PCR检测,结果表明所得DNA的产量和纯度能够满足分子生物学研究操作的要求．     

一种节肢动物模板DNA的快速提取方法

简要介绍一种 高效、快速提取节肢动物模板DNA的方法，提取的DNA无污染物产生，完全能满足RAPD等研究的需要。     

SDS、CTAB和PVP法提取香蕉基因组 DNA的比较研究

文章报道了采用SDS法、CTAB法和PVP法提取的香蕉基因组DNA片段大小比较一致,都可直接用于RAPD分析,SDs法提取的DNA纯度较高,吸芽基因组DNA提取率略高于嫩叶,对相同done不同单株间基因组DNA的RAPD分析结果并不表现出明显的多态性.     

安全有效的杀虫剂

美国加州某公司的研究人员韦斯托尔研制成除虫菊与苏云金杆菌的混合物用来杀虫(美国专刊号为3,946,107).这种混合物具有几个优点:首先,它比这两种杀虫剂单独使用对害虫的毒性要强,其     

发根农杆菌诱导植物毛状根的发生及次生代谢物生产的研究进展

发根农杆菌(Agmbacterium rhizogenes)中含有Ri质粒．在自然条件下，发根农杆菌通过伤口侵染植物，使植物产生毛状根，本文从发根农杆菌的特性，及其所含有的Ri质粒的结构和功能，发根农杆菌诱导毛状根发生的机理，毛状根的转化方法，培养和鉴定及用于植物次生代谢生产方面的应用研究进行了综述．     

Fe_3O_4纳米磁珠快速提取植物DNA的实验研究

磁珠易与生物分子偶联,操作方便,能高效获取靶物质。研究建立一种植物DNA的快速提取方法,用吸附性能优异的Fe_3O_4纳米磁珠作为固相载体提取三角梅DNA,时间为40min,与常规方法相比时间缩短。所提DNA紫外吸光度比值A260nm/A280nm=1.792、A260nm/A230nm=2.219,提取DNA电泳条带大小为1 600bp左右。所提取DNA杂质少,纯度高,可用于后续基因扩增、杂交检测等。研究将为构建基于纳米磁珠微流控芯片的遗传信息高效获取系统打下坚实基础。     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.     

一种新的室温燐光法及其分析应用

提出一种新的4代树枝状分子（4G—D）-曲拉通-100X（Triton-100X）燐光标记试剂．基于Triton-100X-4G-D标记的麦胚凝集素（WGA）的产物（Triton-100X-4G-D—WGA），能与碱性燐酸酶（ALP）发生两种（直接法和夹心法）特异性亲和吸附反应（AA），其AA的产物仍然保持4G-D室温燐光的优良性质，且AA产物的△Ip值与ALP的含量成线性关系，据此建立了Triton-100X-4G—D标记麦胚凝集素-亲和吸附固体基质室温烧光法（AA—SS—RTP）测定痕量ALP的新方法．该方法的检出限为0．20ag spot^-1（直接法，对应浓度：5．0×10^-18 mol L^-1）、0．14ag spot^-1（夹心法，对应浓度：3．5×10^-18 mol L^-1），灵敏度高，重现性和精密度好．直接法和夹心法用于血清中ALP含量的测定，与漳州市中医院ELISA法临床检测的结果相吻合．     

喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24 h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护.     

混合束胶增溶分光光度法测微量铬(Ⅲ)

研究了在TritonX - 1 0 0和CTMAB混合离子表面活性剂存在下 ,铬与苯基荧光酮 (PF)的显色反应 结果表明 ,在碱性条件下 ,Cr3+与PF、CTMAB、TritonX - 1 0 0形成紫红色络合物 ,λmax=575nm ,ε575=1 .0 7× 1 0 5 L·mol- 1 ·cm- 1 ,铬在 0～ 6μg/2 5mL范围内服从比耳定律 在拟定条件下 ,以混合试剂掩蔽 ,直接光度法测定江水、湖水及工业废水中的微量铬 ,结果满意     

苎麻纤维细度测试的灰色优化GM*(1,2)模型与误差分析

采用灰色系统理论建立了苎麻纤维Tex数Y与投影宽度X之间的灰色GM (1,2)模型和灰色优化GM^*(1,2)模型.通过误差分析与对比,指出利用灰色优化模型可以真实地拟合苎麻纤维投影宽度和Tex数真值之间的关系.为生产工艺控制、产品质量检验和监督提供了一种简便而科学的方法.     

半夏乙醇提取物对桃蚜的控制作用研究

选用无水乙醇为有机溶剂,采用索氏提取法提取半夏干粉中的活性物质,研究提取物对桃蚜的控制作用.结果表明,半夏乙醇提取物对桃蚜有较好毒杀活性,提取物浓度越高,效果越明显,当浓度为100.0mg·mL^-1,处理后48h,毒杀校正死亡率在90%以上.桃蚜在半夏无水乙醇提取物处理过的叶片上取食,其若蚜发育历期延长,成蚜寿命显著缩短,生殖力显著下降,桃蚜种群数量受到明显的抑制,在浓度为100.0mg·mL^-1时,7d后桃蚜种群数量约为对照的47.6%.     

古尼虫草对苏云金杆菌抗紫外辐射的保护作用

用古尼拟青霉（paecilomyces gunnii)不同生长天数的培养液所培养的苏云金杆菌（bacillus thuringiensis)经紫外辐射后,其活菌数有很大差异。说明古虫尼草处于稳定生长期的培养液中所含抗紫外辐射的成分最高;古尼拟青霉的培养液、古尼虫草（cordyceps gunnii)子实体浸提液所培养的苏云金杆菌经紫外辐射后,活菌数依次对比对照提高,说明了抗紫外辐射的成分在古尼虫草子实体浸提液和菌丝体浸提液中的含量比较高,在古尼拟青霉培养液中较低。     

ZnO纳米线阵列的生长机制

通过化学气相沉积方法在Si衬底上制备了规则排列的ZnO纳米线阵列．利用扫描电子显微镜观察了合成的氧化锌纳米结构的形貌,表明当In在前驱物中引入超过0．3g时,在Si衬底上合成的纳米结构都是纳米线阵列;高分辨透射电子显微镜图像、x射线图谱和x射线能谱均表明合成的ZnO纳米线阵列具有纤锌矿结构,择优沿（001）方向生长．提出了在Si衬底上生长ZnO纳米线阵列的机制．     

RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨

进行了RAPD技术在蜘蛛遗传多样性研究中的方法探讨.利用蜘蛛的附肢作为其基因组DNA抽提的材料,且该改进的方法所抽提的蜘蛛基因组DNA的产量与纯度足以满足RAPD分析的要求;通过优化RAPD PCR反应条件,可以获得清晰度高,重复性好的RAPD图谱以用于蜘蛛(如拟水狼蛛Piratasubpraticus)、拟环玟豹蛛(Par dosapseudoannulata)、武昌獾蛛Trochosawuchangensis等)的遗传多样性研究;在不投食饲养武昌獾蛛一个月以上的前提下,用随机引物S92(5′CAGCTCACGA3′)比较分析了武昌獾蛛的头胸部与其附肢各自的RAPD图谱的差异,差异不显著(P>0.05).结果表明:蜘蛛的附肢和头胸部均可作为其遗传多样性研究材料,但以前者为材料可以有效防止异源DNA的干扰.因而,其基因组DNA在作为蜘蛛遗传多样性的RAPD分析模板时要优于头胸部.     

两株产纤维素酶细菌的分离和筛选

从林区土壤中分离能够分解纤维素的细菌菌株共15株,采用刚果红染色的初筛平板获取透明圈较明显的菌株8株。在此基础上,进行液体培养并测定酶活,得到2株酶活较高的菌株,分别编号为X18和X10-1-2。这两株菌均为G( )、形态杆状、可产芽孢、好氧,初步鉴定为芽孢杆菌属的两个不同种。