人p16^INK4cDNA探针在非小细胞肺癌研究中的应用

制备总RNA,RT－PCR克隆p16^INk4cDNA,测序验证,制备探针,进行PCR产物Southern杂交检测非小细胞肺癌组织标本中p1^^INK4基因第二外显子阴性杂交率为12．9％（4／31）,原位杂交显示p16^INK4基因转录阴性率为22．6％（7／31）,结果说明克隆的p^INK4cDNA是正确的。可用于临床基因诊断,p^16INK4基因变异及表达在非小细胞肺癌的、发展中起作用。     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

哈萨克族食管癌中PTEN基因的突变情况

通过检测抑癌基因PTEN在新疆哈族食管癌及正常食管粘膜组织中的突变频率,探讨PTEN基因突变与哈族食管癌的关系。运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）方法以及DNA直接测序技术,扩增125例哈族食管癌石蜡包埋组织及70例新鲜哈族食管粘膜中PTEN基因的突变热点,即第5-8号外显子,根据构象改变检测其基因突变情况。125例哈族食管癌组织中PTEN基因第5及第8号外显子的突变率分别为0．8％（1／125）．3．2％（4／125）,6、7号外显子未发现突变（0／125）。70例新鲜哈族食管粘膜中均未检测到任何突变（0／70）。二者差异无统计学意义（P〉0．05）。哈族食管癌中存在PTEN抑癌基因的突变,但突变率较低。PTEN基因突变在食管癌发生发展中的作用不大。     

Rb基因表达与非小细胞肺癌关系的研究

采用mRNA原位杂交和免疫组织化学方法对31例非小细胞肺癌及相应的正常组织进行Rb基因表达的研究。结果显示Rb基因转录的阴性率为16．1％（5／31）,蛋白表达异常率为19．4％（6／31）。表明,非小细胞肺癌的发生与Rb基因的表达有关。     

肿瘤相关基因对大肠肿瘤临床诊断及预后应用的研究

目的 探讨Ｒａｓ,Ｐ５３基因对大肠肿瘤的早期诊断及预后的临床应用价值。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）ＥＢ染色技术对２５例大肠肿瘤原发灶组织进行了Ｋｉ－,Ｎ－ｒａｓ第１处显子和Ｐ５３基因５～８外显子的点突变进行检测。息肉性腺瘤组织中１／２（５０％）发生了Ｋｉ－ｒａｓ点突变。在大肠癌组织中,存在Ｎ－ｒａｓ点突变、Ｋｉ－ｒａｓ点突变、Ｐ５３基因５～８外显子突变,大肠肿瘤组织存在     

人p16~(INK4) cDNA探针在非小细胞肺癌研究中的应用

制备总RNA ,RT PCR克隆p16 INK4 cDNA ,测序验证 ,制备探针 .进行PCR产物Southern杂交检测非小细胞肺癌组织标本中p16 INK4 基因第二外显子阴性杂交率为 12 .9% (4 / 31) .原位杂交显示p16 INK4 基因转录阴性率为2 2 .6 % (7/ 31) .结果说明克隆的p16 INK4 cDNA是正确的 ,可用于临床基因诊断 ,p16 INK4 基因变异及表达在非小细胞肺癌的发生、发展中起作用     

Si-1基因在肿瘤中的缺失和突变状况初步研究

 通过对Si-1基因6,14和15号外显子区段的PCR扩增,分析了Si-1基因在116例恶性肿瘤组织、1例良性肿瘤和21例非肿瘤组织的缺失和突变.发现恶性肿瘤中有7例缺失,8例有内含子突变;良性肿瘤中没有缺失和突变;非肿瘤组织中没有缺失,1例有内含子突变.脑肿瘤的缺失率最高,达到57.1%,内含子突变率42.9%;肝癌的缺失率达15%,内含子突变率26.7%.上述结果表明,Si-1基因在脑肿瘤和肝癌组织中有较高的缺失和内含子突变,显示该基因有可能是这2种肿瘤的易感基因.     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

基质金属蛋白酶-9基因多态性与冠心病的关系

目的研究中国南方汉族人群基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因C1562T多态性与冠心病的关系。方法对经冠状动脉造影证实的急性冠状动脉综合征患者150例（ACS组）、稳定性心绞痛患者110例（SAP组）和同期冠状动脉造影阴性、排除冠心病诊断的患者70例（对照组）进行研究。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆MMP-9水平,采用多聚酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性（PCR—RFLP）技术分析MMP-9基因中C1562T基因多态性。比较各组的基因型和等位基因频率。分析基因型与MMP-9水平的关系。结果ACS组血浆MMP-9水平（98．32±31．48）ug／L明显高于SAP组（73．42±18．47）ug/L（P〈0．05）和对照组（59．65±16．47）ug／L（P〈0．01）,而SAP组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。ACS组MMP-9基因CT基因型频率（32．0％）、CT＋TT基因型频率（35．3％）以及T等位基因频率（19．3％）均高于对照组（8．6％、12．8％、8．6％）（P〈0．05）和SAP组（11．8％、16．3％、10．5％）（P〈0．01）,但SAP组与对照组之间各基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义（P〉0．05）。C1562T位点CT／TT基因型患者血浆MMP-9水平显著高于CC基因型患者（P〈0．01）。结论MMP-9基因C1562T多态性可能与中国南方汉族人群ACS有关,1562T等位基因是动脉粥样硬化斑块不稳定性的易感基因。     

CpG岛甲基化检测方法

目的：建立CpG岛甲基化测定方法,方法：收集20例急性粒细胞性白血病（AML）,18例多发性骨髓瘤（MM）,14例骨髓异常增生综合征（MDS）,15例慢性粒细胞性白血病（CML）及20 例正常对照组的外周血,分离单个核细胞,提取DNA,应用CpG岛思虑在化特异的方法（MSP－PCR）,测定P15和P16基因甲基化情况,结果：P15和P16基因甲基化在各种白血病的表率率分别为AML 80％和70％,MM72．2％和66．7％,MDS 57．1％和50％,CML0％,结论：P15及P16基因甲基化在AML,MM及MDS中有较高表达,而在CML中不表达。     

一种新型基因枪的研究

为研制一种适应各种场合 ,尤其是在野外操作的基因枪 ,满足将目的基因导入动植物细胞 ,使之稳定表达并遗传 ,实现培育或改良新的优良品种。以压缩弹簧为动力 ,运用撞击发射原理 ,对裹着基因的微粒进行加速 ,使之获得足够的动能 ,去射击靶细胞。弹簧预压力不同 ,微弹的动能随之不同 ,可适应不同细胞的要求。利用所设计的装置 ,在常压下将GUS基因导入番茄叶片细胞 ,经检测 ,得到表达 ;将质粒psv- luc2 0转入小鼠的皮肤、腹部肌肉和肝脏内 ,也得到表达。实验表明 ,该构思是可行的 ,实验装置可以在常压下操作 ,能在各种条件下使用     

柳树NAC基因的克隆与表达模式分析

【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345’的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1 126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1 139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG 和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示, SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用 分子生物学软件GCK2.0对整个克隆过程进行分析,制定克隆策略,通过测序鉴定结果,得到了含目的基因 p53cDNA全序列的pTRE-p53重组质粒,通过GCK2.0分析,减少了基因克隆的盲目性,提高了工作效率。     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的押癌基因，通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用分子生物学软件GCK2．0对整个克隆过程进行分析，制定克隆策略，通过测序鉴定结果，得到了舍目的基因p53cDNA全序列的pTRE—p53重组质粒。通过GCK2．0分析，减少了基因克隆的盲目性，提高了工作效率。     

Progress of gene targeting in mouse

Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted incorporation of foreign genes, could be introduced into the mouse genome by gene targeting. Recent studies make it possible to do the gene targeting with temporal and spatial control.     

用计算机对人类TSPYl基因P53结合位点的鉴定

根据p53下游基因在其调节区域（启动子或内含子）含有与P53蛋白特异性结合的一致性序列5’-RRRCWWGYYYN（0-13）RRRCWWGYYY-3’，R—G或A，W—T或A，Y—C或T，N—A，C，T，G。用计算机对人类基因组中P53结合位点进行了研究，发现Y染色体上的TSPY1基因内含子中含有这样的一致性序列5’-GGGCTAGTTTtgGAGCTAGCCT-3’，意味着TSPY1基因有可能是一个p53下游基因。     

抗菌肽的研究及其在植物基因工程中的应用

抗菌肽是一类新型的抗菌物质,在低等生物到高等动植物有广泛分布．抗菌肽及人工合成的抗菌肽基因在植物体中可以被表达并具有杀菌活性,能够应用于植物抗病工程方面,从而提高植物的抗病性．本文简要介绍了抗菌肽的发现、分类、结构、作用机理、基因结构和基因改造,以及抗菌肽在植物基因工程中的应用．     

Inheritance and expression of multiple disease and insect resistance genes in transgenic rice

2—3 anti-fungal disease genes are coinserted with hygromycin phosphotransferase in the same vector. Two insecticidal genes and PPT acetyl transferase genes are placed in another one. The vectors are co-delivered to rice embryonic cellus tissue at a molar ratio of 1︰1 using the particle gun method. 55 independent regenerated lines have been obtained through screening for hygromycin resistance. Of these, 70% transgenic plants harbor 6—7 foreign genes. The genes on the same vectors are always co-delivered to rice plant. Northern blot analysis has indicated that the multiple foreign genes give stable expression. In the 6 transgenic plants carrying 6—7 foreign genes, multiple foreign genes tend to integrate in 1 or 2 genetic loci. Progeny segregation is consistent with Mendel’s 3︰1 segregation law. 8 homozygous R₁ transgenic plants harboring 2—3 anti-fungal and 2 insecticidal genes are selected from large number of transgenic progeny screening for hygromycin and Basta resistance.