水稻内生优势菌--成团肠杆菌的鉴定及其系统发育学分析

从水稻越富品种中分离到一株代表性的内生菌株YS19,经形态、生理生化特征鉴定为成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans).YS19菌株DNA的G+C含量为55.1%,与成团泛菌(Pantoea agglomerans)模式菌JCM1236(ATCC27155)的DNA同源性为90.1%,因此将YS19菌株归为成团泛菌.而以16SrDNA基因序列为基础的系统发育分析表明,YS19与JCM1236的16SrDNA基因的同源性仅为93.9%,并且处在两个不同的进化分支,说明两者具有不同的起源,即成因泛菌具有很大的异源性.     

一株高效絮凝剂产生菌的分离和鉴定

应用多相分类手段对絮凝菌株XHUA9进行了分类研究,并对分离提纯的发酵产物进行紫外和红外分析.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,该菌和模式菌株Paenibacillus hunanensis的序列同源性为96.7%,基因组DNA-DNA同源性杂交值为51.6%.菌株的主要极性脂肪酸为双磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇.菌株优势醌为MK-7,主要优势脂肪酸为anteiso-C15:0和C16:0.菌株(G+C)摩尔分数为51.9%.根据上述结果,菌株XHUA9鉴定为类芽孢杆菌属内的新种,命名为Paenibacillus shenyangensis sp.nov..紫外扫描和红外检测等结果表明,菌株XHUA9所产絮凝剂的主要成分为多糖类物质.     

以光生物素标记DNA的点杂交比色法迅速鉴定类单胞菌的研究

应用光生物素标记参考菌株DNA比色法以DNA-DNA点杂交对类单胞菌属的分离菌株及参考菌株进行遗传学鉴定。在强日光灯下,光生物素标记DNA15min。以少量菌体法提取被测菌株的DNA,并将此DNA点种在硝酸纤维膜上;碱性磷酸酶偶联链霉抗生物素基物显色法DNA-DNA点杂交,颜色图形分析仪测定点杂交颜色强度。该方法鉴定结果与数值分类法的结果和复性率定量测定DNA-DNA同源性的结果基本相符。光生物素标记DNA比色法DNA-DNA点杂交鉴定类单胞菌是一种快速而简便的方法。     

新疆一些根瘤菌的DNA同源性分析

通过分析七株根瘤菌的DNA同源性,证实从新疆新分离到的一些慢生根瘤菌与数值分类选定的新疆慢生根瘤菌群的中心菌株A—IBS的DNA同源性为77—100.3％;与已定种的根瘤菌的模式菌株R.huakii103、R.tropici899 Agorh、Canlinodans571、R.fredii205的DNA同源性分别为66.75％、45.73％、2.61％、30.61％。结果证明,这些菌与原有的已研究的新疆慢生根瘤菌聚成一群,进一步证明新疆慢生根瘤菌群有可能为根瘤菌的一个新种或新属。     

光生物素标记DNA荧光法微孔板DNA杂交测定类单胞菌DNA-DNA相关性的研究

应用光生物素标记DNA荧光法微孔板DNA杂交测定类单胞菌的分离菌株和参考菌株DNA-DNA相关性.热变性DNA固化在96孔微孔板,光生物素标记DNA与固化DNA杂交,测定酶链霉抗生物素偶联β-D-半乳糖苷酶(Strept-avidin-conjugated β-D-galctosidase)作用于敏感荧光底物4-甲基荧光素-β-D-半乳糖苷(4-methylumbelliferyl-β-D-galactoside).在波长365nm激发450nm发射,荧光分析仪测定杂交的荧光强度.根据荧光强度,计算分离菌株和参考菌株DNA-DNA相关性.试验结果表明:光生物素标记ONA荧光法微孔板DNA杂交是更敏感的方法,与光生物标记DNA硝酸纤维膜比色法点杂交、DNA动力学测定DNA同源性,数值分类法的结果基本相符.     

全细胞蛋白聚类分析的可行性探讨

采用SDS-PAGE技术对71株黄芪根瘤菌进行了全细胞蛋白的聚类分析．结果表明，这是进行根瘤菌分类时一种简便快速的分群方法，分群的菌株相似性水平为78％，群内菌株的DNA同源性≥70％．     

一株Chitinophaga菌株的鉴定、优化及其活性蛋白的初步纯化

为确定前期获得的可产生抗血栓物质细菌的分类地位、优化发酵条件及对活性物质初步纯化.利用形态学特征、理化性质、脂肪酸含量、G+C含量、16S rRNA序列同源性及DNA-DNA杂交率等方法鉴定菌株MJM38,利用纤维蛋白平板法检测溶栓活性,利用纤维蛋白原平板法检测抗凝活性,利用单因素法筛选菌株MJM 38产生抗血栓活性物质的最佳培养条件,利用盐析、超滤及分子筛层析等方法对其活性物质进行了初步分离.结果发现,菌株MJM 38属于Chitinophaga菌,初步确定抗血栓活性物质为蛋白质,其分子量大小在30 k Da~100k Da之间,菌株MJM 38在培养时间为4 d、培养温度为25℃~30℃、发酵培养基初始p H值为7时产生的抗血栓物质的溶栓活性最大.     

16S rDNA与gyrB序列联合法鉴定一株蜡样芽孢杆菌

以从凝结芽孢杆菌活菌片中分离得到的一株YSSNJ-005菌株为目的菌株,经16S r DNA与gyr B序列联合法对其精确鉴定。研究结果表明:经过16S r DNA序列分析,初步判定菌株YSSNJ-005属芽孢杆菌属。由gyr B基因序列同源性分析及构建系统发育树对菌株YSSNJ-005继续鉴定。BLAST在线对比可知:菌株YSSNJ-005为芽孢杆菌属,且与蜡样芽孢杆菌标准菌株Bacillus cereus ATCC14579基因序列同源性达100%,可精确断定菌株YSSNJ-005是蜡样芽孢杆菌。     

1株碱杆菌属菌株的分离和鉴定

 从新疆采集的盐土样品中分离到1株革兰氏阳性、严格好氧、产孢、嗜盐细菌菌株YIM 012,对其进行了系统分类学研究.菌株YIM 012为杆菌,生长最适温度为28~45℃,最适pH 7.0~8.0,并能在70~250g/L的盐质量浓度中生长良好.其DNA的G+C的摩尔分数为39%,16S rRNA基因序列分析结果显示,该菌株与碱杆菌属Alkalibacillus salilacus(DSM 16460^T)亲缘关系最近,相似性达到99.6%,但与同属其它2个有效种间相似性低于96%.杂交结果显示其与A. salilacus亲缘关系低于20%,并且在生理生化方面也有差异.综合分析,确定该菌株为碱杆菌属的1个新种,将其命名为嗜盐碱杆菌(Alkalibacillus halophilus).     

利用ITS-RFLP标记辅助筛选白灵侧耳与杏鲍菇杂交菌株

为提高白灵侧耳菌株、杏鲍菇菌株及其杂交菌株筛选效率及鉴定的准确性,利用ITS-RFLP标记辅助单核杂交技术对白灵侧耳与杏鲍菇的杂交菌株进行了筛选.对5份白灵菇菌株和4份杏鲍菇菌株进行了种间配对杂交,根据亲本菌株交配型将其分成7个组合进行杂交.结果表明:9份亲本材料共具有6个A因子和7个B因子.利用该技术对杂交处理后的菌株样品进行筛选,获得了3份杂交菌株11D、53D、70D,其中杂交菌株11D与53D的菌丝生长速度与亲本菌株相比较差异显著;杂交菌株70D的菌丝生长速度与亲本菌株XB130DB相比较差异显著,而与亲本菌株BL130DB在菌丝生长速度上差异不显著.     

梭梭根际根瘤菌对紫花苜蓿生长及耐盐性的影响

目的 土壤盐渍化是降低植物生产力、制约农业发展的主要非生物胁迫因素之一,豆科植物共生固氮菌对土壤盐渍化非常敏感,因此探讨盐胁迫下荒漠植物根际根瘤菌资源对紫花苜蓿生长及耐盐性的影响,有望为豆科植物新型复合微生物菌肥的研发和增强紫花苜蓿(Medicago sativa)耐盐能力提供理论基础和优质菌种资源。方法 以从梭梭(Haloxylon ammodendron)根际分离得到的3株根瘤菌(WAW-10、WA30-5和WM30-21)为研究对象,探究0和300 mmol/L NaCl处理下3株梭梭根际根瘤菌对紫花苜蓿生长和耐盐性的影响。结果 接种3株梭梭根际根瘤菌均促进了正常条件和盐胁迫下紫花苜蓿植株的生长,叶绿素含量、根系活力、含碳量和含氮量均显著提升,尤以菌株WM30-21的综合效果最佳;各接菌处理均可诱导紫花苜蓿结瘤,尤以菌株WM30-21的效果最佳。盐胁迫下,接种3株梭梭根际根瘤菌均提高了紫花苜蓿的过氧化氢酶活性,降低了相对质膜透性和丙二醛含量,从而维持了质膜的相对完整性;并提高了紫花苜蓿叶片可溶性糖和脯氨酸含量,从而增强了渗透调节能力;还降低了紫花苜蓿植株中的Na⁺含量、维持K⁺含量的相对稳定,从而提高了钾、钠离子物质量之比(K⁺/Na⁺),其中以菌株WM30-21的效果最佳。结论 接种3株梭梭根际根瘤菌均不同程度地促进了紫花苜蓿的生长,并通过维持质膜的相对完整性、增强渗透调节能力和提高K⁺/Na⁺来增强其耐盐性,其中以菌株WM30-21效果最佳。     

相思根瘤菌的抗逆性初步研究

对21株相思根瘤菌和2株大豆根瘤菌菌株进行NaCl、(NH4)2SO4、pH值、高温和低温的耐受性实验，其中耐(NH4)2SO4的实验分别进行了相思根瘤菌在含(NH4)2SO4的平板上的耐受性和在浓度为100mol／L、300mol／L、500mol／L、600mol／L的(NH4)2SO4中的结瘤试验。参试菌株均经过回接实验培养和镜检，培养基均为YMA。结果表明，相思根瘤菌均能耐受的盐浓度为0．5％～2．0％，能在37℃和pH值为6～9的条件下生长。在抗生素抗性方面，相思根瘤菌普遍抗氨卞青霉素，而对卡那霉素和链霉素敏感。相思根瘤菌的耐盐、耐高温和耐氨能力强于慢生大豆根瘤菌。     

Isolation and Characterization of a New Subspecies of Aeromonas salmonicida （ Aeromonas salmonicida subsp, flounderacida subsp. nov. ） from Stone Flounder（ Kareius bicoloratus L. ）

Biological properties were studied to appropriate pathogenic bacteria which were isolated from diseased (or dead) stone flounder (Kareius bicoloratus L. ) which expressed bacterial septicaemia, including morphological characteristics, colony characteristics, physiological and biochemical characteristics and serum homology of isolates, the results showed that the isolates belonged to a new subspecies of A. salmonicida. In addition, the representative strains have been re-checked and detected the mol% G C ratio of the DNA by China Center for Type Culture Collection (CCTCC), the examined strains were also regarded as a new subspecies of A. salmonicida, and designated as Aeromonas salmonicida subsp, flounderac/da subsp, nov. by its isolated fish (Kareius bicoloratus ). Molecular identification of analysis of the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene were applied, the results showed high similarity (99%) with the 16S rRNA gene of Aeromonas salmonicida from GenBank database. Cluster analysis of phylogenetic tree revealed that the representative strain formed separately bootstrap-supported cluster.     

从COI基因序列探讨叶甲科部分昆虫的系统关系

对叶甲科21种昆虫的COI基因（长度为716bp）的序列组成和变异情况进行了分析．结果表明,21种叶甲碱基T、C、A、G的平均含量分别为39．5％、13．9％、32．1％和14．5％,A＋T含量明显高于G＋C含量,密码子第三位点A＋T平均含量高达90．4％;该序列片段中共有315个碱基发生变异,变异率达到44％;核苷酸替换主要发生在C←→T和A←→T之间,第三位点的替换频率显著高于前两个位点．以中华萝摩叶甲（Chrysocus chinensis）为外群,采用MEGA4．0软件构建系统发育树．结果显示,21种叶甲聚为2大分支,叶甲亚科的种类形成一大分支,位于系统树的基部,较其他2个亚科分化得早;跳甲亚科与萤叶甲亚科共同聚为另一分支,二者的关系较之与叶甲亚科的关系更近．系统树所反映的三亚科间的关系与传统分类结果一致．     

PGPR芽孢杆菌B-1菌株的鉴定及其应用效果

从国外产品中分离得到一株PGPR菌株,编号为B-1;观察了该茵株的形态大小和茵落形态,进行了生理生化反应,通过热变性法测定其G+C(鸟嘌呤-胞嘧啶)摩尔分数为47.2%,鉴定该菌株为短芽孢杆菌(Bacillus brevis);通过小麦水培实验研究了该菌株对小麦株高和鲜重的影响,地上部鲜重较对照增加10.64%,株高较...     

内蒙古蒿属沙生地理替代种的ITS序列的比较分析

对内蒙古蒿属6个沙生地理替代种以及同属龙蒿组的龙蒿(A．dracunculus)和猪毛蒿(A．scoparia)的ITS序列进行分析，以大籽蒿(A．sieversiana)作为外类群．结果表明，这6个替代种以及猪毛蒿的ITS序列有着高度的一致性：ITSI序列为251bp，GC含量为53．78％或54．18％，只有2个变异位点．ITS2序列为218～221bp，GC含量为56．42％～58．26％，有16个变异位点．种间同源性高达98．5％～99．7％，与龙蒿的同源性为91．3％～92．1％，与外类群为88．5％～89．4％．反映出ITS序列在替代种间高度保守．