小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

耐旱植物厚叶旋蒴苣苔BDN1脱水素基因的克隆及表达特性分析

根据已知植物脱水素基因保守区域设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从耐旱植物厚叶旋蒴苣苔的总ｃＤＮＡ中扩增出一个５００ｂｐ的与植物脱水素基因同源的序列。结合５’ＲＡＣＥ获得了植物脱水素基因家族一个新成员ＢＤＮ１的全长ｃＤＮＡ（１１４８ｂｐ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明，ＢＤＮ１基因在厚叶旋蒴苣苔基因组中以单拷贝形式存在，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，该基因的表达受干旱，寒冷及ＡＢＡ的诱导。推测该基因与     

水稻耐盐性QTL的定位

利用已建成的１个以籼稻窄叶青８号（ＺＹＱ８）和粳稻京系１７（ＪＸ１７）为亲本的ＤＨ群体及其高密度分子连锁图谱,在水稻生长的幼苗期,用高浓度的ＮａＣｌ胁迫处理ＺＪＤＨ群体,以各株系存活时间为指标,得到１组耐盐性数据。然后分别用ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＱＴＬ１．１和ＰＬＡＢＱＴＬ１．０软件分析,结果表明ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＱＴＬ１．１和ＰＬＡＢＱＴＬ－ＳＩＭ均将耐盐主效基因Ｓｔｄ定位于第１染色体的ＲＧ６１２和     

人β-簇珠蛋白基因上游远侧端调控元件与GATA转录因子结合模式

用羟基脲诱导ＨＥＬ细胞，将诱导前后细胞核内蛋白质因子与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅⅠ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列（ＨＳ３－１４７１６－－１４９９１ＢＰ和ＨＳ４－１８３０６－１８５８６ＢＰ）的结合模式进行了分析，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，随着羟基脲诱导ＨＥＬ细胞时间的延长，细胞核内ＧＡＴＡ－２的含暧渐减少；与之相反，ＧＡＴＡ－１的含量却随着诱导的时间而增加。结合竞争性ＥＭＳ     

双价、三价种子特异性表达载体的构建及表达PHB合成相关基因的转基因油菜的获得

分离了种子特异性启动子和质体导肽序列，利用已经克隆的合成聚羟基丁酸酯的３个关键酶基因，分别构建了含有种子特异性启动子的嵌合ｐｈｂＣ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｂＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合ＰｈｂＣ、ｐｈｂＡ（编码３－酮硫裂解酶）、ｐｈｂＢ的三价表达载体，并由导肽将基因表达产物定位于质体．经根瘤农杆菌介导获得转基因油菜，并进行了ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ－ＤＮＡ杂交等分子检测．     

EPO激活HEL细胞内CREB转录因子

ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｌｔｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）是一种细胞核内转录因子，激活的ＣＲＥＢ能与特异调控元件ＣＲＥ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ）结合研究结果显示，ＥＰＯ（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｎｔｉｎ）诱导ＨＥＬ细胞（ＵＭＡＮＥＲＹＴＨＲＯＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬ）２０ｍｉｎ后分子筛的ＨＥＬ细胞核内ＣＲＥＢ的１３３位丝氨酸残基被磷酸化，并具有转录因子功能，用１３     

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤，选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物，在人ＣＤＮＡＹ语文加中筛出一长度为１５３５ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆，其开放读码框码３３４个氨基酸，与已知蛋白无明显同源性属一新发现的ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该 物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞，暗示该蛋白可能与脑     

猪FSHβ及ESR合并基因型对猪产仔数性状的影响

雌激素受体（ＥＳＲ）基因和促卵泡素β亚基（ＦＳＨβ）基因对猪产仔数具有显著的影响，分析了这两个基因座的合并基因型对母猪产仔数性状的影响，结果表明ＥＳＲ基因与ＦＳＨβ基因在商业猪种中均为控制猪产仔数的主效基因，但是它们对产仔数的主效基因，但是它们对产仔数的影响存在显著的场间和品种间差异。这两个基因座的合并基因型ＢＢＢＢ母猪比ＡＢＡＡ母猪总产仔数平均每胎多１．８５～３．０１头，产活仔数平均每胎多２．０     

去甲肾上腺素对不同初始表达水平α1B-肾上腺素受体表达的调节

选用α１Ｂ-肾上腺素受体（α１Ｂ－ＡＲ）密度分别为（６３３６±９１３）和（７７３±１６４）ｆｍｏｌ·ｍｇ－１的两株克隆ＨＥＫ２９３细胞，分别用高表达和低表达α１Ｂ-ＡＲ表示，比较去甲肾上腺素（ＮＥ）持续作用下不同初始表达水平的α１Ｂ－ＡＲ发生密度改变的差别．结果显示： １０μｍｏｌ·Ｌ－１ＮＥ持续作用４８ｈ可使高表达以α１Ｂ－ＡＲ的密度发生下调，却可使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度发生上调．蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＲＯ－３１－８２２０或Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ　Ｃ可消除ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但对低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度上调无影响．ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ不仅可模拟ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，而且使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度也发生下调．肌浆网／内质网钙泵抑制剂ＣＰＡ和内钙螯合剂ＢＡＰＴＡ－ＡＭ不影响ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但可部分抑制低表达α１Ｂ－ＡＲ的上调．以上结果提示，ＮＥ持续作用可对初始表达水平不同的α１Ｂ－ＡＲ密度产生不同方向的调节作用，作用机制亦不尽相同．     

9,10-二氰基蒽/苄基紫精/二异丙基胺体系光解反应机理的研究

利用电子自旋共振（ＥＳＲ）技术研究９,１０－二氰基蒽（ＤＣＡ）／苄基紫精（ＢＶ）／二异丙基胺（ＤＩＰＡ）体系的光诱导电子转移反应。自由能变化,荧光猝灭以及ＥＳＲ实验结果都支持电子转移的反应机理。随后＾１ＤＣＡ与反应底物ＤＩＰＡ之间发生电子转移生成活性中间体ＤＣＡ＾－和ＤＩＰＡ＾＋,当ＤＣＡ＾－反应中遇到ＢＶ时,传递一个电子给它形成ＢＶ＾＋,在整个反应过程中,ＤＣＡ起了传递电子的作用。     

牛泡沫病毒内部启动子上顺式作用元件具有增强子特性

以牛泡沫病毒（bovine foamy virus,BFV)中国毒株BFV3026为材料，研究env基因内部启动子（internal promoter,IP)上顺式作用元件的功能特点，用PCT方法进行系列缺失，将IP中BFV反式激活因子Tas 应答元件（TRE^IP）精确定位于TATA盒近上游的72bp区段中（9205－9276）。发现此段可激活同源及异源启动子，具有典型增强子特性；此区段与已知SFV－1 TRE^IP近启动子区和SFV－3TRE^IP近启动子区和SFV－3TRE^IP序列同源性高，都具有核因子NF－1（nuclear factor1）的结合位点, 位置相同，推测此类顺式作用元件具有相似功能特点。     

双价、三价种子特异性表达载体的构建及表达PHB合成相关基因的转基因油菜的获得

分离了种子特异性启动子和质体导肽序列，利用已经克隆的合成聚羟基丁酸的酯的３个关键酶基因，分别构建了含有种子特异性启动子的嵌合ｐｈｂＣ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｈＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合ｐｈｂＣ、ｐｈｈＡ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｂＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合ｐｈｂＣ、ｐｈｂＡ（编码３－酮硫裂解酶）、ｐｈｈＢ的三价表达载体，并刷导肽将基因表达产     

植物转录因子的结构与调控作用

植物各种诱导型基因的表达主要受特定转录因子在转录水平上的调控。典型的转录因子含有ＤＮＡ结合区、转录调控区、寡聚化位点及核定位信号区等功能区域。这些功能域决定转录因子的功能、特性、核定位及调控作用等，转录因子通过这些功能域与启动子顺式作用元件结合或与其他蛋白的相互作用来激活或抑制基因的表达。植物转录因子的结构与功能成为近年来植物分子生物学等研究领域的重要内容。     

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因5′端上游序列特异结合蛋白的鉴定

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPSⅠ)是肝组织特异酶,与肝细胞分化有关。我们曾观察到,肝癌及癌变过程中CPS_1基因表达降低,并证明可能是由于基因转录调控异常所致。真核基因转录调控是通过顺式作用元件(cisacting element)和反式作用因子(transacting factor)的相互作用而实现的。目前已发现许多与病毒基因、细胞基因启动子、增强子特异结合的蛋白因子,具有转录调控作     

一种新的小鼠被毛突变基因定位

分别尝试用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）法和重组率测定法对所发现的被毛突变进行基因定位。结果为所选用的１００个１０ｂｐＲＡＰＤ引物中,８７个获得了扩增产物,由于所获得的产物与小鼠表现间缺乏相关性,利用ＲＡＰＤ法未能交闰到染色体上。以分布于小鼠１１条染色休下的Ｉｄｈ１,Ｃａｒ２,Ｍｕｐ１,Ｐｇｍ１,Ｈｂｂ,Ｅｓ１０,Ｅｓ１,Ｍｏｄ１,Ｇｄｃ１,Ｃｅ２,Ｅｓ３等生化基因位点为遗传标记,对分别对与ＣＡＢ     

高等真核低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定

极低频磁场（ＥＬＦＭＦ）生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题，为探索ＥＬＦＭＦ的特异反应基因及这些基因的结构与功能，用ｍＲＮＡ差异显示技术对受ＥＬＦＭＦ辐照与假辐照的Ｄａｕｄｉ细胞内的ｍＲＮＡ进行了检测，筛选到一个受ＥＬＦＭＦ诱牵ＤＤ片段，反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ鉴定进一步证实系磁场导所致，经克隆测序及与ＧｅｎｅＢａｎｋ同源性比较表明该基因片段（ＭＦ－ＣＡ）是人细     

拟南芥QRAP2基因的克隆、表达、DNA结合能力及体外转录活性分析

通过对拟南芥ATH1基因芯片数据的分析, 从拟南芥中鉴定到一个受干旱胁迫高水平诱导的cDNA片段, 并用RACE方法获得了其全长cDNA. PCR及定量实时PCR分析表明, 该基因在经干旱、紫外线照射、脱落酸、高盐以及水杨酸等胁迫条件处理后表达量均有显著提高, 特别是干旱处理后短时间内表达量迅速提高, 3 h后即提高到对照样品的430多倍. 通过多序列比对和系统进化分析, 我们将该基因归于DREB亚家族. 由于该基因编码蛋白含有典型的AP2/EREBP DNA结合结构域, 并在N端有一段富含谷氨酰氨残基的区域, 所以将它命名为QRAP2 (Glutamine-rich AP2). 凝胶阻滞实验结果显示, QRAP2蛋白能够特异结合DRE顺式元件序列但不能与mDRE和GCC等非相关元件结合. 酵母单杂交实验表明, QRAP2蛋白全长序列或其N端112个氨基酸与GAL4 DNA结合结构域形成的融合蛋白表现出转录激活功能, 而其C端135个氨基酸与GAL4 DNA结合结构域的融合蛋白则没有表现出转录激活活性. 现有资料的分析表明, QRAP2是AP2/EREBP转录因子家族的新成员, 可能在干旱胁迫条件下参与激活相关下游基因的表达.     

用体内足迹法研究MEL细胞中红系调控元件上DNA-蛋白质相互作用

应用连接介导ＰＣＲ方法研究了ＭＥＬ细胞诱导前后细胞中β－珠蛋白基因簇中高敏位点２和βｍａｊ启动子上蛋白－ＤＮＡ间的相互作用，首先培养ＭＥＬ细胞并用ＭＤＳＯ和Ｈｅｍｉｎ诱导分化，用硫酸二甲酯对活细胞进行体内化处理，化学法裂解后，进行体内足迹研究，结果表明，在ＭＥＬ细胞诱导前后，其位点控制区高敏位点２及βｍａｊ启动子上的ＤＮＡ蛋白质间相互作用状况都有显著的变化，提示β－珠蛋白基因族中的远端调控序列（Ｌ     

MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

果蝇的ｍｂｌ基因编码一个核蛋白，含有２个Ｃｙｓ３Ｈｉｓ锌指基序。ｍｂｌ基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化。根据与ｍｂｌ基因高度同源的人ＥＳＴ ＡＡ０８６１３９设计ＰＣＲ引物，筛选胎儿脑ｃＤＮＡ点阵文库，得到一个人ｃＤＮＡ，命名为ＭＢＬＬ。     

高等真核细胞受极低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定

极低频磁场（ＥＬＦ ＭＦ）生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题．为探索 ＥＬＦ ＭＦ的特异反应基因及这些基因的结构与功能，用 ｍＲＮＡ差异显示技术（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ， ＤＤ）对受ＥＬＦ ＭＦ辐照与假辐照的Ｄａｕｄｉ细胞内的ｍＲＮＡ进行了检测，筛选到一个受ＥＬＦ ＭＦ诱导表达的ＤＤ片段（＞１ｋｂ），反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ鉴定进一步证实系磁场诱导所致．经克隆测序及与ＧｅｎｅＢａｎｋ同源性比较表明该基因片段（ＭＦ－ＣＡ）是人细胞中新发现的受磁场诱导的反应基因。