桂枝茯苓丸调控MTDH和PTEN逆转卵巢癌多药耐药的机制研究

研究桂枝茯苓丸在人卵巢癌耐药性裸鼠肿瘤模型中对凋亡的诱导作用,探讨其可能的作用机制。采用实时无标记细胞分析系统检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性,建立SKOV3/DDP卵巢癌耐药性BALB/c裸鼠肿瘤模型,模型裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g.kg-1.d-1(高)、8 g.kg-1.d-1(中)、4 g.kg-1.d-1(低)剂量组、PI3K抑制剂LY294002组、低剂量桂枝茯苓丸LY294002组(联用组)及对照组,给药10天后剖取肿瘤组织,采用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率,采用荧光定量PCR检测肿瘤组织中MTDH、PTEN mRNA的相对表达。结果表明,SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.57和4.36倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,上调PTEN mRNA和下调MTDH mRNA的作用逐渐增强,各组之间差异具有显著性(P < 0.01)。LY294002和低剂量桂枝茯苓丸联用后,抑制凋亡的作用强于二者分别单用的凋亡抑制作用,下调MTDH mRNA和上调PTEN mRNA的作用强于其他各组(P < 0.01)。说明在SKOV3/DDP卵巢癌耐药性BALB/c裸鼠模型中,桂枝茯苓丸能够剂量依赖性地诱导耐药性肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与上调PTEN mRNA和下调MTDH mRNA有关。     

桂枝茯苓丸联用顺铂紫杉醇化疗提高卵巢癌多药耐药模型裸鼠生存率

研究桂枝茯苓丸逆转人卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV3/DDP)肿瘤模型的耐药作用及其对荷瘤BALB/c裸鼠生存率的影响,探讨其可能的作用机制。采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性;采用SKOV3/DDP细胞建立卵巢癌耐药肿瘤模型,模型BALB/c裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g·kg~(-1)·d~(-1)(高)、8 g·kg~(-1)·d~(-1)(中)、4g·kg~(-1)·d~(-1)(低)剂量(中药组)、顺铂/紫杉醇组(化疗组)、低剂量桂枝茯苓丸与化疗联用组(中西联用组)和空白对照组,检测各处理组的抑瘤率。观察各组BALB/c裸鼠的生存情况;并采用荧光定量PCR检测各组肿瘤组织中MDR1 mRNA的相对表达。结果是SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.13倍和3.85倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,抑瘤作用增强,裸鼠生存率提高,肿瘤组织MDR1 mRNA表达相对于对照组逐渐下降。西药化疗组在耐药模型裸鼠中的抑瘤效果高于中药组,中西药联用后抑瘤效果显著高于西药化疗组;与其他各组相比,西药化疗组的裸鼠平均体重明显下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。中西联用组裸鼠生存率高于桂枝茯苓丸低剂量组和西药化疗组。西药化疗组MDR1mRNA表达相对于对照组显著增加,中西药联用组MDR1 mRNA表达相对于对照组显著下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。说明桂枝茯苓丸能够逆转SKOV3/DDP耐药性卵巢癌模型裸鼠的耐药性,提高裸鼠生存率,其机制可能与抑制MDR1 mRNA表达有关。     

海马生髓丸对S180荷瘤鼠、SKOV3卵巢癌模型鼠抑瘤机理的实验研究

以S180荷瘤鼠、SKOV3卵巢癌模型鼠为研究对象,进行海马生髓丸抗肿瘤的实验研究.通过对移破植瘤的抑瘤率、光、电镜技术及细胞凋亡调控基因P53、BcL-2等免疫组化的研究,表明海马生髓丸具有一定的抗肿瘤作用,可以抑制S180荷瘤鼠的肿瘤生长,明显增强SKOV3卵巢癌模型鼠DDP的杀伤肿瘤作用,对肿瘤细胞的凋亡具有明显促进作用.     

桂枝茯苓丸对自发性髙血压大鼠血流状态的影响及心肌纤维化的改善作用

目的:探讨桂枝茯苓丸对自发性髙血压(SHR)大鼠血流状态的影响及心肌纤维化的改善作用。方法:将28只12周龄的SHR大鼠随机分为模型组、桂枝茯苓丸低(10 mg·(kg·d)-1)、中(20 mg·(kg·d)-1)、高(40 mg·(kg·d)-1)剂量治疗组,另设同源正常的京都大鼠(WKY)为对照组,各组大鼠数量均为7只。桂枝茯苓丸各治疗组给予上述对应的各药物剂量灌胃给药,模型组及对照组大鼠给予20 mg·(kg·d)-1的生理盐水灌胃,连续饲养12 w后检测大鼠的血流动力学变化指标,ELISA检测试剂盒分析纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血管性假性血友病因子(v WF)、组织纤溶酶原激活物(t-PA)活性。应用HE染色、Masson染色观察大鼠左心室心肌组织病理成分变化,免疫组化染色分析心肌组织中PKD1蛋白的表达变化。结果:和模型组相比,桂枝茯苓丸各治疗组大鼠心肌血流动力学指标改善明显,左室收缩期平均压(LVSP)、左心室内压力曲线最大上升和下降速率(±dp/dt max)、PAI-1和v WF活性均显著升高(P0.01);左心室舒张末期压力(LVEDP)、t-PA活性均显著降低(P0.01)。组织病理成分变化分析表明和模型组相比,桂枝茯苓丸各治疗组大鼠心肌组织成纤维细胞构成比例显著下降(P0.01),肥大细胞数量减少,细胞胞浆中PKD1蛋白的表达显著下调(P0.01)。结论:桂枝茯苓丸可有效改善髙血压引发的血液高凝状态,抑制SHR大鼠的心肌纤维化,改善心室重构。     

芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠肾脏炎性损伤的协同保护作用

以自发性高血压大鼠作为实验动物模型,观察芒果苷联合葛根素对SHR形态学及炎症因子IL-6,IL-10,TNF-α表达的影响,探讨芒果苷联合葛根素是否能增强保护肾脏炎症损伤的作用。将8只WKY大鼠作为对照组A,再将72只SHR大鼠随机分为模型组B、苯那普利组C(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷组D(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、葛根素组E(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组F、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组G、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))组H、葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+芒果苷(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组I、葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+芒果苷(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))组J。每天给药10 m L/kg连续灌胃,灌胃给药2个月后停药,杀鼠前禁食12 h。用显微镜观察大鼠肾组织病理形态结构,免疫组化法检测大鼠肾组织IL-6、IL-10、TNF-α的表达,ELISA法检测SHR IL-6、IL-10、TNF-a水平。各组大鼠肾脏组织均未见明显病理形态学改变;免疫组化检测和酶联免疫检测结果显示:与模型组比较,各组大鼠肾组织IL-6,IL-10,TNF-α含量均有不同程度下降。芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠肾脏组织形态学无显著影响;可下调大鼠肾脏组织异常升高的IL-6,IL-10,TN-α水平。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂诱导多药耐药人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

为研究卵巢癌多药耐药机制和逆转耐药,探讨在低剂量顺铂存在下,人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对多药耐药人卵巢癌细胞的杀伤增效作用及其可能存在的分子病理机制。用顺铂为诱导剂,逐步建立多药耐药人卵巢癌细胞株SKOV3/cDDP。(此细胞株经免疫组化检测P-gp高表达)。TRAIL、顺铂或两药联用12h,24h,48h,采用MTT法测试细胞毒作用,Hochest33258染色荧光显微镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察亚细胞结构形态,通过流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blot分别检测在联用TRAIL作用前后cFLIP蛋白的表达情况。结果显示:1)单用100ng/mL TRAIL只能杀伤4.67%±0.26%的SKOV3/cDDP细胞,IC50>1000ng/mL。顺铂对SKOV3/cDDP细胞的作用存在剂量依赖性细胞毒效应,这种效应主要通过诱导细胞凋亡实现;2)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用可杀死52.12%±2.84%的SKOV3/cDDP细胞。呈现出高效协同作用;3)流式细胞术分析、透射电镜观察及荧光显微镜证实其协同性杀伤作用主要通过促进诱导细胞凋亡实现;4)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用,可使细胞cFLIP蛋白的表达下调,促进了细胞凋亡的发生。结论:TRAIL与亚毒性浓度顺铂联用表现出对多药耐药人卵巢癌细胞的高效杀伤作用,这种作用可能主要由促进细胞凋亡介导实现,cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

地西他滨对卵巢癌SKOV3的细胞 凋亡和增殖的影响

目的:探讨地西他滨(DAC)对人卵巢癌细胞株SKOV3的细胞凋亡和增殖等细胞生物学方面的影响.方法:采用不同浓度的地西他滨(10、100、 200 nmol/L)处理人卵巢癌细胞株SKOV3后,通过流式细胞仪检测地西他滨对人卵巢癌细胞株SKOV3的细胞凋亡的影响,细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测地西他滨、顺铂(Cisplatin)以及地西他滨联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖的影响.结果:浓度为100 nmol/L的地西他滨对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制最明显,细胞增殖抑制率达61.31%,有统计学差异(P0.05).地西他滨浓度超过100 nmol/L后对SKOV3的抑制率没有明显升高.低浓度地西他滨联合顺铂相比于单用地西他滨或者顺铂,SKOV3的细胞增殖抑制率升高,有统计学差异(P0.05).浓度为100 nmol/L的地西他滨处理人卵巢癌细胞株SKOV3后细胞凋亡率升高,有统计学差异(P0.05).结论:低浓度地西他滨促进人卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,抑制SKOV3的增殖,地西他滨可能通过增强铂类化疗药物的敏感性抑制肿瘤的发生发展.     

莪术醇联合顺铂对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用及对Bcl-2表达的影响

探讨莪术醇联合化疗药物顺铂对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型。成瘤后,将其随机分为4组:即模型对照组、顺铂组、莪术醇组、联合用药组;每组8只,模型对照组予腹腔注射生理盐水(0.1 m L/10 g),顺铂组予2 mg·kg~(-1)顺铂腹腔注射给药,莪术醇组腹腔注射100 mg·kg~(-1),联合用药组腹腔注射顺铂2 mg·kg~(-1)和莪术醇100 mg·kg~(-1)。每3 d ip 1次,连续给药7次。TUNEL法观察其对Hep G2细胞的原位诱导凋亡作用,ELISA法检测其对Bcl-2的影响。与模型对照组比较,顺铂组、莪术醇组、联合用药组平均瘤重、平均瘤体积、Bcl-2蛋白含量均降低,凋亡指数升高(P0.05或P0.01);其中以联合用药组作用最为显著。与顺铂组相比,具有显著性差异(P0.05)。说明莪术醇联合顺铂可抑制人肝癌裸鼠原位移植瘤生长,诱导人肝癌细胞Hep G2凋亡,这可能与下调Bcl-2的表达有关。     

咪康唑通过抑制PI3K/Akt/NOX4通路诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增敏顺铂的机制

目的:探究唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞的抑制作用和分子机制,以及其对顺铂敏感性的影响.方法:采用MTT法检测不同唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活性的影响,筛选出效果最佳的唑类抗真菌药.通过流式细胞术分析最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞凋亡及活性氧(ROS)的影响.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测最佳唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞NADPH氧化酶-4(NOX4)mRNA表达的影响.Western blot法检测p-Akt、Akt及NOX4的蛋白表达.通过裸鼠体内肿瘤模型验证最佳唑类抗真菌药及其联用顺铂后的抑瘤效果.免疫组化法检测肿瘤组织中p-Akt和NOX4蛋白的表达情况.结果:14个唑类抗真菌药对肺鳞癌H520细胞活力均有抑制作用,且咪康唑半抑制浓度最低,选为最佳唑类抗真菌药.咪康唑能减少肺鳞癌H520细胞ROS的产生并诱导肺鳞癌H520细胞凋亡.咪康唑可抑制p-Akt及NOX4的表达,且咪康唑与PI3K/Akt通路抑制剂LY294002联用后,NOX4蛋白表达与LY294002单独给药组相比无统计学差异.咪康唑可削弱顺铂对肺鳞癌H520细胞p-Akt表达的促进作用,并可增加顺铂的敏感性.荷瘤裸鼠体内实验中,咪康唑可抑制肿瘤的生长,免疫组化结果显示,咪康唑可减少裸鼠肿瘤中NOX4和p-Akt的蛋白表达.结论:咪康唑可能通过抑制PI3K/Akt介导的NOX4的表达,诱导肺鳞癌H520细胞凋亡并增强顺铂抑制肺鳞癌H520细胞的作用.     

人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建

为探讨人卵巢癌进展机制的相关研究,构建适宜的体内动物模型。采用慢病毒转染技术,构建稳定过表达绿色荧光报告基因(GFP)的人EOC细胞模型:SKOV3(人卵巢浆液性腺癌细胞株)和ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞株);异氟烷吸入麻醉4-6周龄BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠,从裸鼠背部正中纵切口进入腹腔,显微多点注射法分别将细胞模型悬液,移植于裸鼠的单侧卵巢,每组6只裸鼠;Night OWL活体成像系统动态观察裸鼠移植瘤生长和转移情况;移植术后4-6周解剖裸鼠,取卵巢和转移瘤组织行HE染色。结果显示,携带GFP的EOC细胞模型SKOV3和ES-2,均可成功构建裸鼠卵巢原位移植瘤模型,裸鼠未发生手术原因死亡,成功率均100%;活体成像系统通过检测GFP的荧光强度和范围,能够动态监测裸鼠移植瘤生长情况;SKOV3细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢浆液性腺癌;ES-2细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢透明细胞癌。由此可知,异氟烷吸入麻醉、从背部正中纵切口进入腹腔、显微多点注射法移植携带GFP的EOC细胞模型,能成功构建可动态监测的裸鼠卵巢原位移植瘤动物模型;该动物模型与人卵巢癌生物学特征类似,适宜作为研究人卵巢癌演变进展的体内模型。     

松龄血脉康胶囊干预大鼠动脉粥样硬化的作用及机制

<正>常大鼠饲喂高脂饲料配合腹腔注射维生素D3建立AS(动脉粥样硬化)大鼠模型。将实验大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、松龄血脉康胶囊低(0.6 g·kg~(-1)·d~(-1),C组)、高(1 g·kg~(-1)·d~(-1),D组)剂量组、阳性对照辛伐他汀组(10 mg·kg~(-1)·d~(-1),E组)。12周后腹主动脉取血检测各组血脂;酶联免疫吸附法测定各组血清超敏C反应蛋白、白介素6及单核细胞趋化蛋白1含量。12周后与B组相比,D组可以显著降低血脂(TC、LDL)(P0.05)并使血清超敏C反应蛋白及白介素6含量显著下降(P0.01);C组、D组血清单核细胞趋化蛋白1含量显著下降(P0.05,P0.01)。松龄血脉康胶囊可通过降低AS大鼠血脂;降低血清超敏C反应蛋白、单核细胞趋化蛋白1、白介素6的水平,减轻炎症反应,阻止AS发展。     

红芪多糖对2型糖尿病大鼠血脂代谢紊乱及胰岛素抵抗的影响

探究红芪多糖(HPS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠脂代谢紊乱及胰岛素抵抗的影响。Wistar雄性大鼠,随机留取5只作为空白对照组(A组),其余大鼠一次性注射大剂量STZ制造T2DM模型,按体重随机分为模型对照组(B组)、二甲双胍组(C组)(67.5mg·kg~(-1)·d~(-1))、红芪多糖高剂量组(D组)(200mg·kg~(-1)·d~(-1))、红芪多糖低剂量组(E组)(100mg·kg~(-1)·d~(-1))。A、B组均灌胃等量超纯水,C、D、E组按上述剂量用药,各组继续给予高脂饲料喂养。连续灌胃6w,6w末处死大鼠,检测空腹血糖(FPG)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL),并计算胰岛素敏感性指数(ISI)。与模型对照组比较,二甲双胍组、红芪多糖高剂量组、红芪多糖低剂量组血糖值均显著降低(P0.05或P0.01),TG、TC、LDL均显著升高(P0.05或P0.01),HDL均显著降低(P0.05或P0.01),胰岛素的敏感性指数升高(P0.01)。HPS对T2DM大鼠有降低血糖,抑制TG、TC、LDL的升高,抑制HDL的降低,提高胰岛素的敏感性指数,减弱胰岛素抵抗的作用,从而缓解T2DM大鼠病情及防止其并发症的发生。     

瘦素预处理抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤的研究

目的:探讨瘦素(LEP)预处理抑制心肌细胞凋亡改善心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)的作用途径.方法:将成年雄性SD大鼠24只,随机分为:正常组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、瘦素+缺血/再灌注组(LEP+I/R)和LY(LY294002,LY)+LEP+I/R组.心电图检查验证大鼠MIRI模型成功后,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法检测心肌梗死面积,苏木精-伊红染色(HE)法和心肌酶检测心肌损伤程度,TENUL检测心肌组织凋亡程度,Western blot法检测Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3等凋亡蛋白以及PI3K/Akt信号通路表达.结果:LEP预处理能够缩小I/R诱导的心肌梗死面积减轻心肌损伤,同时降低心肌细胞凋亡程度,该保护作用机制可能涉及PI3K/Akt信号通路的激活.LY作为PI3K信号通路的阻滞剂,能够逆转这种保护作用.结论:LEP预处理抑制心肌细胞凋亡可能与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

黄酮对运动大鼠脂肪代谢酶与ERRα表达的影响

为探讨耐力训练对大鼠脂肪代谢酶、雌激素受体关联受体α(ERRα)mRNA及蛋白表达与补充甘草黄酮的干预作用,选用SD雄性大鼠50只,每组10只,随机分为安静对照组(NC)、运动对照组(NE)、运动+补充甘草黄酮低(GFML,4g·kg~(-1)·d~(-1))、中(GFME,8g·kg~(-1)·d~(-1))、高(GFMH,12g·kg~(-1)·d~(-1))剂量组。对照组灌胃等量生理盐水,6周的力竭训练后,宰杀大鼠。根据试剂盒的方法测定大鼠血清肝脂酶(HL)、脂蛋白酯酶(LPL)、载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)和载脂蛋白CⅢ(ApoCⅢ)含量和骨骼肌ERRαmRNA及蛋白表达水平,结果发现:运动对照组HL含量低于安静对照组(P0.05),GFM各组HL含量高于运动对照组(P0.05或P0.01)。LPL含量在NE组高于NC组(P0.05),GFM各组LPL含量高于安静对照组和运动组。ApoCⅡ含量在运动对照组高于安静对照组(P0.05),GFM各组ApoCⅡ含量与安静对照组比较有显著性差异(P0.05或P0.01)。运动对照组ApoCⅢ含量低于安静对照组(P0.05),GFME组和GFMH组ApoCⅢ含量与安静对照组比较有显著性差异(P0.05)。NE组大鼠脂肪组织ERRαmRNA及蛋白表达水平高于NC组(P0.05),在GFML、GFME和GFMH各组大鼠脂肪组织ERRαmRNA及蛋白表达都高于NC和NE组(P0.05或P0.01)。综上可见,补充甘草黄酮能够改善血脂代谢和调控酶水平在机体内的相对稳定性,从而防止脂代谢紊乱。     

黄芪提取物对心肌梗死大鼠心肌组织中VEGF/Flt1/Flk1的表达分析

目的研究黄芪提取物(Astragalus Extract,AE)对心肌梗死大鼠心肌组织中VEGF及其受体Flt1/Flk1的表达调控作用,探讨黄芪促血管新生作用机制,为心肌梗死的治疗提供理论和实验依据。方法通过结扎大鼠心脏的左冠状动脉前降支造成心肌梗死的模型,然后将大鼠分为模型组、AE低剂量组(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量组(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、高剂量组(40 mg·kg~(-1)·d~(-1)),另外再设假手术组,仅仅穿线而不结扎。各组大鼠数量为8只。各治疗组给予AE上述对应的各药物剂量灌胃(ig)给药,模型组及假手术常规饲养,饲养4周后,把大鼠处死。应用HE染色、Masson染色分析左心室心肌细胞组织形态学变化和血管结构病理成分变化;反转录PCR(RTPCR)法测定心肌组织中VEGF、Flt1、Flk1 mRNA的表达变化;免疫组化染色法和免疫印迹法分析心肌组织中血管内皮生长因子VEGF、Flt1、Flk1的蛋白表达变化。结果 HE染色分析,模型组大鼠心肌细胞坏死严重,成纤维细胞增生较多,并伴有炎性浸润;AE低、中剂量组大鼠,心肌细胞形态结构不清晰,排列不齐,炎性浸润略微;AE高剂量组的大鼠心肌细胞形态结构完整,有效降低成纤维细胞的增生。与模型组比较,AE各组大鼠心肌组织结构相对规整,胶原含量明显下降(P0.05),新生的血管数量明显增(P0.05),内皮细胞形态相对完整,VEGF及Flt1、Flk1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.01)。结论 AE可明显改善大鼠心肌梗死后心肌组织的紊乱状态,促进受损心肌组织中新生血管数量的增加,提高受损心肌组织中VEGF、Flt1、Flk1 mRNA和蛋白的表达。     

以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA( small interference RNA) 抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变.方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100 μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照.于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50.转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率.结果:以MRP为靶标的siRNA 明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P＜005);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P＜005).结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

双(α-呋喃甲酸)氧钒合成方法的改进及抗癌作用研究

通过优化和改进,获得一种合成双(α-呋喃甲酸)氧钒(BFOV)的新方法,产率达93%,w(Ba)10 mg/kg,元素分析和结构分析与VO(C_5H_3O_3)_2·2H_2O吻合.运用标准MTT法测试了BFOV分别对A549(人肺癌细胞株)、SKOV3(人卵巢癌细胞株)和耐受顺铂的A549/DPP、SKOV3/DPP生长的抑制活性.此外,还使用MTT法试验了它对Beas-2B(人肺正常上皮细胞株)的毒性以及对小鼠的急性毒性.结果表明,BFOV的水溶性好、水溶液稳定性高,不但对人癌细胞株A549和SKOV3具有很强的抑制作用,IC_(50)小于顺铂或与顺铂相当,且对顺铂耐受的人癌细胞株A549/DPP和SKOV3/DPP具有更强的抑制活性,可以克服顺铂的耐药性.同时,它对人体正常细胞Beas-2B的毒性和对小鼠的急性毒性均小于顺铂.因此,双(α-呋喃甲酸)氧钒可作为抗癌药物,值得进一步研究和评价.     

2-巯基苯并噻唑衍生物类小分子抑制剂对人结直肠癌细胞SW620的生长抑制作用

拟研究2-巯基苯并噻唑衍生物类小分子抑制剂(SKLB-163)对结直肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响;并探讨可能的作用机制。使用流式细胞术检测药物处理后肿瘤细胞凋亡的情况;利用MTT实验检测细胞增殖情况。在裸鼠人结直肠癌细胞SW620移植瘤模型中评估药物灌胃给药时能否抑制肿瘤生长。流式细胞术和MTT表明,SKLB-163能够促进SW620细胞凋亡,且能够显著抑制SW620细胞的增殖。动物实验表明,口服灌胃给药SKLB-163(200 mg/kg)能够显著抑制裸鼠人结直肠癌细胞SW620移植模型肿瘤的生长。总之,SKLB-163具有较好的抗肿瘤活性;为进一步发展新型2-巯基苯并噻唑类抗肿瘤药物提供了依据。     

干扰长链非编码 RNA NEAT1 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长、间质转换及裸鼠肿瘤形成

摘要:目的 研究干扰长链非编码 RNA 核富集的转录物 1( NEAT1) 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响。 方法 通过 RT-PCR 分析 NEAT1 在胃癌 MGC-803、SGC-7901 细胞和正常胃上皮 GES-1细胞中的表达,并检测 sh-NEAT1 的沉默效率。 NEAT1 沉默后,EDU 染色分析肿瘤细胞的增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell 小室和划痕实验分析肿瘤细胞的侵袭、迁移能力;Western blot 分析肿瘤细胞 Ki67、Caspase-3、N-cadherin 和 E-cadherin 的表达。 荧光素酶报告实验验证 NEAT1 与 miR-126 的靶向关系,分析 NEAT1 / miR-126 对胃癌 SGC-7901 细胞生长和运动的调节影响;通过构建转染 sh-NEAT1 的 SGC-7901 细胞的移植瘤模型裸鼠,检测30 d 内肿瘤体积及质量变化;免疫组化检测 Ki67 和 Caspase-3 的表达,RT-PCR 检测 NEAT1 和 miR-126 的表达;Western blot 检测 N-钙黏蛋白( N-cadherin) 及 E-钙黏蛋白( E-cadherin) 的表达。 结果 NEAT1 在肿瘤细胞中的表达水平显著高于正常细胞( P< 0. 05) ,sh-NEAT1 沉默后,肿瘤细胞 NEAT1 的表达量显著降低,增殖能力明显受到抑制,凋亡细胞比例显著增高,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力明显减弱,肿瘤细胞中 Ki67 和 N-cadherin 表达量明显降低,Caspase-3 和 E-cadherin 的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义( P< 0. 05) 。 荧光素酶报告实验表明NEAT1 与 miR-126 存在靶向关系,sh-NEAT1 能显著促进 miR-126 的表达( P< 0. 05) ,miR-126 inhibitor 能显著促进 sh-NEAT1 对 SGC-7901 细胞增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。 移植瘤模型裸鼠表明 sh-NEAT1 能够抑制肿瘤体积增大,下调肿瘤组织中 NEAT1、Ki67 及 N-cadherin 的表达水平,上调 miR-126、Caspase-3 和 E-cadherin 的表达量,肿瘤的 质 量 与 对 照 组 相 比 显 著 增 加,差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05) 。 结 论 干 扰 长 链 非 编 码 RNANEAT1 能够上调 miR-126 表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,并通过阻断 EMT 机制降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力,抑制裸鼠肿瘤的形成。     

瓜蒌皮水提物通过PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制缺血缺氧大鼠原代心肌细胞的凋亡

以激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路、抑制心肌细胞凋亡为切入点，探究瓜蒌皮水提物(TP-W)保护心肌缺血的机制.分离大鼠心肌细胞，通过缺氧气体+无血清培养液培养制造缺血缺氧损伤模型，以模拟急性心肌缺血时的体内心肌细胞环境；同时添加PI3K特异性抑制剂(LY294002)和TP-W处理细胞，利用倒置相差显微镜观察细胞形态，噻唑兰法、末端标记法分别检测细胞存活率及凋亡率，免疫荧光联合免疫印迹方法定位、定量地检测细胞内PI3K、Akt及eNOS蛋白表达及磷酸化水平.结果显示：对上述缺血缺氧损伤的心肌细胞，TP-W可显著改善其生长状态、提高存活率、降低凋亡率；同时显著上调上述3种蛋白表达水平及磷酸化水平，但磷酸化水平均可被LY294002处理显著削弱.可见，激活PI3K/Akt/eNOS信号通路、抑制心肌细胞凋亡可能是TP-W抗心肌缺血的重要机制，也是中药“开胸除痹”的关键生物学内涵.