完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

卵母细胞的不同对牛体外受精效果的影响

为了进一步提高牛体外受精（ＢＩＶＦ）胚的发育率，探讨了来自不同大小卵泡、具有不同卵丘细胞层数以及细胞质形态不同的卵母细胞对牛体外受精效果的影响。结果表明：１）分别采自直径大于５ｍｍ、２￣５ｍｍ和小于２ｍｍ的卵泡的卵母细胞，经体外成熟、体外受精后，卵裂率分别为５４．５％（３０／５５）、６４．４％（８５／１３２）和５０．４％（６３／１２５）。其中，２￣５ｍｍ卵泡的卵母细胞的体外受精结果显高于小于２ｍ     

电脉冲激活猪卵母细胞的研究

通过对猪卵母细胞的电激活进行系统研究，结果表明：对于体外成熟母卵细胞，电场强度为１２５０Ｖ／ｃｍ，脉冲时程为４０，６０μｓ时，效果较好，一次脉冲激活率可达８５．３％和８７．１％，而对于体内成熟卵母细胞，电场强度为１５００Ｖ／ｃｍ，脉冲时间为４０，６０μｓ时，效果了，一次脉冲激活率达８５．７％和８８．２％；     

灭活与未灭活发情母牛血清对牛体外受精卵发育的影响

通过在成熟培养液和发育培养液内添加灭活或未灭活发情母牛血清（ＯＣＳ）探讨了血清灭活与否对牛体外受精（ＢＩＶＦ）卵发育的影响，在卵母细胞成熟培养实验中，两个组分别添加１０％灭活、未灭活发情零日母牛血清（Ｄ＿０ＯＣＳ），另一组为不加血清的对照组。三个处理组的卵裂率分别为７４．８％、７６．５％和５０．２％（Ｐ＜０．０１）。囊胚发育率分别为２５．９％、１８．３％和４．８％（Ｐ＜０．０５）。前两个处理组间无显著差异，但二者的各项发育指标均显著高于对照组。在发育培养液内分别添加５％灭活或未灭活发情第五日母牛血清（Ｄ＿５ＯＣＳ）。两个处理组的卵裂率分别为７６．７％和７２．０％，囊胚发育率分别为２４．５％和２０．１％，二者间无显著差异，结果表明：牛卵母细胞的成熟过程中，血清的添加是必须的。未灭活ＯＣＳ同样可以促进ＢＩＶＦ卵的体外发育，但其效果仍不如灭活的ＯＣＳ．     

电沉积Ni—Fe合金的穆斯堡尔效应

对电沉积Ｎｉ－Ｆｅ合金的穆斯堡尔谱分析表明γ相Ｎｉ－Ｆｅ合金的同质异能移（Ｉ．Ｓ．）为－０．０６－０．０２ｍｍ／ｓ；ａ相的Ｉ．Ｓ．为－＋０．０５ｍｍ／ｓ，与冶冻Ｎｉ－Ｆｅ合金的Ｉ．Ｓ．（冶冻Ｎｉ－Ｆｅ合金的γ相Ｉ．Ｓ．为－０．１９－－０．０２ｍｍ／ｓ；ａ相Ｉ．Ｓ．Ｓ为－０．０７－０．１０ｍｍ／ｓ）相比，向正值方向偏移，γ相平均偏移０．１８ｍｍ／ｓ，ａ相约０．１３ｍｍ／ｓ，电沉积Ｎｉ－Ｆｅ合金的磁超     

电沉积Ni－Fe合金的穆斯堡尔效应

对电沉积Ｎｉ－Ｆｅ合金的穆斯堡尔谱分析表明γ相Ｎｉ－Ｆｅ合金的同质异能移（Ｉ．Ｓ．）为－０．０６～０．０２ｍｍ／ｓ；α相的Ｉ．Ｓ为～＋０．０５ｍｍ／ｓ，与冶炼Ｎｉ－Ｆｅ合金的Ｉ．Ｓ．（冶炼Ｎｉ－Ｆｅ合金的γ相Ｉ．Ｓ为－０．１９～－０．２２ｍｍ／ｓ；α相Ｉ．Ｓ．为－０．０７～０．１０ｍｍ／ｓ）相比，向正值方向偏移，γ相平均偏移０．１８ｍｍ／ｓ，α相约０．１３ｍｍ／ｓ．电沉积Ｎｉ－Ｆｅ合金的磁超精细场随合金中Ｆｅ含量的变化情况与冶炼Ｎｉ－Ｆｅ合金中的情况不完全一样。此外，还观察到电四极裂矩不等于零，表明电沉积Ｎｉ－Ｆｅ合金中存在电场梯度．根据镀层合有杂质Ｓ和结构缺陷的特点，讨论了上述穆斯堡尔参数的变化情况。     

不同融合条件及激活方法对体细胞克隆绵羊胚胎发育的影响

对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代，将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后，作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产，用细胞驰素B法与离子霉素＋6－DMAP法对核移植胚胎（重构胚）在电融合后进行化学激活，然后在38.6度，5％CO2，最大相对湿度条件下，进行体外培养（IVC），重构胚卵裂率分别为37．8％与43．8％（51／135与81／185），囊／桑葚胚率分别为9．8％和12．3％（5／51和10／81），在融合电压1．5kV/cm，持续时间30us，脉冲次数为2次的条件下，孤雌激活胚胎的卵裂率和囊／桑葚胚率分别为81．0％和12．9％。     

肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响

在受精液中添加不同浓度的肝素（２，６，１８，５４，１６２，４８６ｍｇ／Ｌ）均能明显提高牛卵母细胞的受精分裂率（分别为８３．６，８４．９，８５．７，８９．２，８４．５和９０．２％，比对照组７３．６％，Ｐ〈０．０５）和卵裂指数（授精后４４－４５ｈ大于２－细胞的卵裂数占卵裂总数的百分率，分别为８５．７，８５．０，８９．９，９．８７，８７．４和８５．５％，对对照组５７．６％，Ｐ〈０．０１。然而，卵母细胞的     

猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究

探讨了不同的成熟培养液及外源激素对猪卵母细胞体外成熟培养及电激活后孤雌胚胎发育能力的影响. 结果表明：（1）改良M199（mM199）组猪卵母细胞成熟率显著高于M199组，且这两组又较NCSU-23组能极显著提高卵母细胞的成熟率. （2）孕马血清（PMSG）+人绒毛膜促性腺激素（hCG）+促卵泡素（FSH）组卵母细胞成熟率略高于FSH+促黄体素（LH）组，两者卵母细胞成熟率极显著高于尿促性腺激素（hMG）组. （3）含胎牛血清（FBS），猪卵泡液（PFF），表皮生长因子（EGF）的培养液较对照组在卵母细胞成熟率上无显著差异，但均能显著提高电激活后的卵裂率.添加EGF组桑囊率明显高于不添加组.但分别添加FBS和PFF组较对照组在桑囊率上均无显著差异. （4）卵丘细胞扩散与卵母细胞第一极体排出之间无直接相关性，但扩散程度好能提高电激活后的卵裂率.     

岩滩水电站厂坝混凝土快速施工技术

关键性工艺和措施是：优化混凝土配合比，采用机制石灰岩人工砂石料，碎石按８０ｍｍ～４０ｍｍ，４０ｍｍ～２０ｍｍ，２０ｍｍ～５ｍｍ分级，大石；中石：小石组合比例为３０∶４０∶３０，人工砂石料合石粉量１２％～１５％，水泥用量５５ｋｇ／ｍ３，高掺粉煤灰１０５ｋｇ／ｍ３，占胶凝材料６６．４％，掺用ＴＦ减水缓凝剂，混凝土Ｖｃ为１５ｓ±５ｓ。投料顺序为碎石→水泥→水、外加剂→砂、粉煤灰，拌和时间１５０ｓ～１８０ｓ。缆车或汽车直接入仓或皮带机运料入仓，汽车转料。层面结合允许间隔时间为混凝土的初凝时间。碾压根据震动碾各自性能和振激力大小而定。坎身排水孔采用人工拔管造孔。常态混凝土和碾压混凝土（ＲＣＣ）同步上升。常态混凝土浇筑温度控制在１５℃～１６℃，ＲＣＣ控制在２５℃以内。     

体外受精——胚胎移植在不孕症治疗中的应用

对 6 0例不孕症患者采用GnRH -a FSH HCG超促排卵方案治疗 ,应用HTF培养基培养胚胎。采样 6 0个取卵周期 ,5 8个周期进行胚胎移植。移植周期妊娠率达34.5 %。从临床效果可见 ,体外受精—胚胎移植是解决输卵管因素不孕最直接的方法     

生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究探讨了在成熟培养液和发育培养液内添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α对牛体外受精卵发育的影响，在成熟培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，经体外受精处理后卵裂率分别为７８．３％和８２．６％，显著高于对照组６０．２％的卵裂率；三个处理组囊胚发育率分别为１９．６％、２４．５％和１８．７％，三者间无显著差异．在发育培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，其囊胚发育率分别为３０．０％和２３．４％，与对照组２１．０％的囊胚发育率相比差异不显著．在成熟培养液内添加ＴＧＦ－α，在发育培养液内添加ＥＧＦ，经这两种生长因子分别作用后，体外受精卵翼胚发育率为２１．０％，与单独使用其中一种生长因子相比囊胚发育率无明显提高．     

胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

已知成分培养液中兔原核卵培养到胚泡的研究

用商业化ＲＰＭＩ１６４０添加１５ｍｇｍｌ－ＢＳＡ将１５４枚兔原核卵,经体外２４ｈ、４６ｈ、７０ｈ、９４ｈ和１１８ｈ培养,分别有９８．７％（１５２／１５４）、９８．１％（１５１／１５４）、９２．９％（１４３／１５４）、８６．４％（１３３／１５４）和７５．３％（１１６／１５４）的胚胎得到进一步发育．５６．５％（８７／１５４）经１１８ｈ培养后发育成胚泡．１４０ｈ后孵化率达３５．７％（５５／１５４）．将７０枚发育的４－细胞移植到５只受体,３只妊娠（６０％）产仔５只．结果表明在ＲＰＭＩ１６４０中添加ＢＳＡ,可完成兔受精卵植入前的发育,且发育的４－细胞在植入受体输卵管后,可发育到妊娠期满并产仔．     

小鼠精子微注射受精卵的体外发育与移植的研究

用显微注射方法,将精子注入小鼠卵母细胞卵周隙中,使精卵体外受精获得受精卵。并对精子注射后卵母细胞的成活率、受精率和受精卵的发育率以及移植后受胎率等方面进行了系统的研究,结果表明:卵子存活率为75.36％(1309/1737),其中264枚卵裂,受精率为20·17％(264/1309),卵裂卵经体外培养后有192枚发育到桑椹胚及胚泡期,发育率为72.73％(192/264)。将其中73枚(桑椹胚10枚,肛泡63枚)胚胎移植到10只假孕受体子宫中,一只受体妊娠产仔9只,仔鼠发育正常。     

漫长而艰辛的“试管婴儿”之路——2010年度诺贝尔生理学或医学奖成果简介

 “试管婴儿之父”罗伯特·爱德华兹（Robert G. Edwards）获得2010年度诺贝尔生理学或医学奖,以表彰他在体外受精（IVF）技术方面的杰出贡献。早在20世纪50年代,爱德华兹便提出通过体外受精治疗人类不育的设想：即从女性卵巢内取出卵子,与精子在细胞培养皿中完成受精,然后再移植回母体子宫内发育。他们经过漫长而艰辛的努力实现了这一目标,1978年世界第一例“试管婴儿”出生。这项技术给全世界大约10%的不育症夫妇带来希望。一门新的医学领域（辅助生殖技术）由此诞生,开启现代医学的新世界。