巴马汀对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6表达的影响

目的:观察巴马汀对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细白介素6(IL-6)表达的作用.方法:采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用ELISA法检测IL-6的生成量;采用qRT-PCR法检测IL-6 mRNA的表达.结果:巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6的生成,以及IL-6mRNA的表达,并呈现出浓度依赖性.结论:巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6的生成及IL-6mRNA的表达,从而发挥抗炎作用.     

hTERT基因电转染人γδT细胞建立可诱导的永生化细胞系

利用电击将外源基因hTERT与pTet-on调控质粒共转染人γδT细胞,建立可诱导的永生化人γδT细胞系.分离人PBMC,体外刺激增殖后经磁珠分选纯化,然后对其进行外源hTERT基因和pTet-on调控质粒的共同电转染,并加入强力霉素诱导目的基因表达.电转染程序T 23和T-20的效率分别为37.5％±0.9860％和30.5％±0.5590％.经鉴定,外源hTERT基因能够整合人γδT细胞基因组中并在诱导后表达.程序T-23的转染效率更高,强力霉素的有效诱导浓度是600ng/mL,志愿者本人的血清更利于电转后细胞的存活.     

油酰乙醇胺对氧化性低密度脂蛋白诱发的动脉粥样硬化反应的作用

探讨油酰乙醇胺(OEA)对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)坏死的影响及对ox-LDL诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)内炎性因子表达变化的影响.实验用ox-LDL诱导HUVEC坏死和RAW264.7细胞内炎性反应;显微镜下观察细胞形态,并收集细胞进行Annexin V/PI-FITC染色,流式细胞分析细胞坏死率;采用实时定量PCR(real-ti me PCR)和酶联免疫吸附剂检测(ELISA)测定mRNA和蛋白水平表达的变化.结果显示:OEA能缓解ox-LDL诱导的HUVEC的坏死,并能呈浓度依赖性的上调HUVEC内过氧化物酶体增殖激活受体α(PPAR-α)和SIRT-1的表达;OEA降低ox-LDL诱导的RAW264.7肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CRP mRNA表达的升高,及降低ox-LDL诱导的促动脉粥样硬化因子M-CSF mRNA表达的升高,同时升高ox-LDL诱导SIRT-1表达的降低.实验结果表明,OEA通过激活PPAR-α和抗炎通路对动脉粥样硬化有一定的作用.     

绿原酸对脂多糖致炎症小鼠体内体外COX-2的影响

探讨绿原酸对脂多糖致炎症小鼠体内体外COX-2蛋白表达的影响.脂多糖滴鼻造模建立小鼠急性肺损伤模型,脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症反应模型,应用Weston blot法,检测小鼠肺组织内以及RAW264.7巨噬细胞中COX-2的蛋白表达.绿原酸在小鼠体内体外均能有效降低脂多糖诱导的COX-2的蛋白表达,并能促进COX-2蛋白的降解.降低脂多糖诱导的COX-2的蛋白水平是绿原酸抗炎的机制之一.     

佛手水煎剂对RAW264.7癌细胞增殖的影响

为了观察佛手水煎剂对RAW 264.7癌细胞增殖的影响,用生药量0.625,1.250,2.500和5.000 mg/mL的佛手水煎剂处理RAW 264.7癌细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力、台盼蓝排斥法测定细胞存活率、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法检测细胞凋亡与坏死.结果表明:与对照组比较,0.625,1.250和2.500 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞固缩,细胞核染色质凝聚、片断化,有凋亡小体出现,表现出典型的细胞凋亡特征;5.000 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞肿胀,细胞膜破裂,呈现坏死症状,RAW 264.7癌细胞的增殖明显受到抑制(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.073 mg/mL.说明佛手水煎剂能诱导癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖.     

金花茶叶醇提物对LPS导致RAW炎症的保护作用

考察金花茶叶醇提物对内毒素(LPS)刺激腹腔巨噬细胞(RAW264.7)后细胞炎症的保护作用.通过噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度金花茶叶醇提物作用下细胞的存活率;通过Griess法检测金花茶叶醇提物对LPS刺激后RAW264.7细胞NO释放量;通过酶联免疫吸附法检测炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6含量;通过蛋白免疫印迹法检测NF-κB p65的表达量.MTT结果显示,LPS及不同浓度的金花茶叶醇提物均未对细胞存活率产生明显影响(P0.05).3、10、30、100μmol/L的金花茶叶醇提物均可以明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P0.05).100μmol/L的金花茶叶醇提物可以明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的释放(P0.001).10、30、100μmol/L的金花茶叶醇提物均可以明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白表达(P0.05).金花茶叶提取物对内毒素导致的腹腔巨噬细胞炎症具有一定的保护作用,其作用机制可能与NF-κB通路相关.     

异甘草素改善RAW 264.7细胞线粒体生物发生抑制LPS诱导的炎症反应

本研究旨在探讨异甘草素(ISL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞炎性反应的影响,及其线粒体相关机制.以体外培养RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,采用MTT法考察ISL(5,10,20 μmol/L)对RAW 264.7细胞活力的影响,Griess法检测NO含量,ELISA法检测TNF-α水平,...     

石蒜碱对内毒素致炎症小鼠体内体外COX-2的影响

研究石蒜碱对内毒素导致的炎症小鼠体内体外COX-2的影响.通过内毒素诱导的小鼠建立急性肺损伤(ALI)模型,采用内毒素诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,利用Western blot技术检测小鼠肺组织以及RAW264.7巨噬细胞中COX-2蛋白的表达量.结果显示,石蒜碱能够在体内、体外显著抑制内毒素诱导的COX-2的蛋白表达,并加快COX-2蛋白的降解速度.石蒜碱能够有效降低内毒素导致的炎症小鼠体内、体外COX-2的蛋白水平.     

野漆树苷对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及机制探究

目的:探究野漆树苷(Rhoifolin,RHO)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型释放炎性因子的影响,并探讨其作用机制.方法:用脂多糖(0.5μg·mL~(-1))刺激体外生长良好的RAW264.7细胞24h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度RHO对RAW264.7细胞的毒性作用,用Griess试剂法检测一氧化氮(Nitric Oxide NO)的含量,RT-PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α),白介素1β(Interleukin-1β,IL~(-1)β),白介素6(Interleukin,IL-6)的含量,采用Western Blot法检测MAPK信号通路中相关蛋白的含量.结果:与空白对照组相比,在LPS诱导下,RAW264.7细胞分泌致炎因子NO,TNF-α,IL~(-1)β,IL-6(P0.01);与模型组相比,25~100μmol·L~(-1)的RHO可明显下调LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL~(-1)β和IL-6(P0.05,P0.01),并呈现良好的剂量依赖关系;野漆树苷还不同程度的抑制了Erk和JNK激酶的磷酸化.结论:RHO可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子NO分泌,抑制TNF-α,IL~(-1)β和IL-6mRNA的合成,抑制JNK/SAPK及Erk信号通路可能是其抗炎作用机制之一.     

参附注射液通过调节核内HMGB1和NF-κB结合发挥抗炎活性的机制

探讨参附注射液（Shenfu injection,SFI）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的RAW264.7细胞的抑炎作用及其潜在机制。采用LPS诱导野生型RAW264.7细胞制作炎症细胞模型,经参附注射液不同剂量进行干预,RT-qPCR、WB和ELISA检测细胞内促炎因子,包括诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase,iNOS）、白介素?1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的转录、翻译和分泌水平,评价参附注射液的抗炎作用;构建高迁移率组蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）过表达RAW264.7细胞（HMGB1+-RAW264.7）和HMGB1点突变RAW264.7细胞（HMGB1m-RAW264.7）,通过免疫荧光检测野生型、HMGB1+和HMGB1m-RAW264.7细胞中HMGB1的核移位情况,采用哺乳动物双杂交法和免疫共沉淀法检测HMGB1、P65和P50的结合率,以探讨核内HMGB1在炎症反应中的作用及SFI抗炎的潜在分子机制。结果表明：SFI可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS、IL-1β和TNF-α的转录、表达和分泌（P＜0.01）。SFI能抑制HMGB1向核外迁移,使其高表达于核内。核内高表达HMGB1可使RAW264.7细胞对LPS的耐受度增加。在1μg/mL浓度LPS诱导下,HMGB1+-RAW264.7细胞中TNFα和IL-1β的转录和表达水平均升高,且SFI能逆转这一现象。HMGB1m-RAW264.7细胞中TNFα和IL-1β与对照组无差异。SFI可增加核内HMGB1与P65、HMGB1与P50的结合率（P＜0.01）,减少P50与P65的结合率。试验结果表明：SFI可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应;其作用途径可能是通过抑制HMGB1出核,竞争性结合P65和P50合,减少P65-P50二聚体的形成,进而抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路的激活。