SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一. 以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达，提示此分子可能参与了胚胎植入的调节. 为此，本研究在小鼠模型中，采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法，系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节. 结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达，其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞，而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上，滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中，SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达，孕激素能够阻断雌激素的作用. 以上结果提示，SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节，如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程，同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用.     

育龄妇女子宫内膜Bcl—2的周期性变化

应用免疫组化方法研究育龄妇女子宫内膜的Ｂｃｌ－２表达,发现子宫内膜腺上皮细胞的Ｂｃｌ－２表达在月经周期中存在周期性变化,从增生早期至分泌早期,腺上皮细胞均呈Ｂｃｌ－２阳性反应,增生中晚期Ｂｃｌ－２表达最强,至分泌中晚期则表达基本消失。子宫平滑肌细胞中的Ｂｃｌ－２表达在月经周期中则不存在明显的周期性变化。腺上皮细胞Ｂｃｌ－２的周期性变化与子宫内膜的周期性增生和脱落是一致的,说明Ｂｃｌ－２可能具有抑制子宫内膜细胞凋亡的作用。此外,子宫内膜腺上皮Ｂｃｌ－２表达的周期性变化可能受雌、孕激素的调控。     

子宫内膜异位症与雌、孕激素受体亚型间关系的研究进展

本文综述了雌、孕激素受体亚型在在位内膜和异位内膜的不同表达,在子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的不同表达以及在月经周期的不同时期的不同表达,并进一步阐述了雌、孕激素受体亚型在子宫内膜异位症的发生发展中所起的不同作用。     

橙皮素对血管内皮细胞NO分泌功能的影响

考察了橙皮素对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NO分泌功能的影响,探讨其作用机制.为此采用DAN法测定HUVECs分泌NO的水平,用人乳腺癌MCF-7细胞(雌激素受体阳性)促增殖实验和报告基因模型实验评价橙皮素的雌激素样活性.结果显示在内源雌激素水平较低的条件下,橙皮素在12.5～100 μmoL/L浓度范围内,能够促进HUVECs分泌NO,并呈剂量依赖性.此作用能够被雌激素受体拮抗剂ICI182,780和放线菌素D阻断.橙皮素与E2同时作用时,HUVECs分泌NO水平较两者单独作用时显著下降.而在内源雌激素水平较高的条件下,橙皮素抑制HUVECs分泌NO.橙皮素能够促进MCF-7细胞增殖,并且能够被ICI182,780完全阻断,同时,橙皮素能够部分拮抗E2对MCF-7细胞的促增殖作用.另外,橙皮素能够诱导ERα控制的报告基因表达.从而可认为橙皮素属于雌激素受体部分激动剂,对血管内皮细胞NO分泌功能具有调节作用,其机理涉及雌激素受体信号途径和基因转录调节.     

六氯苯与雌二醇共存时内分泌干扰活性拮抗效应及其机制研究

以典型天然雌激素雌二醇为代表,以人体乳腺癌细胞MCF-7增殖为手段,检验了六氯苯与雌二醇共同作用时的内分泌干扰活性及其机理.结果发现六氯苯具有强烈的内分泌干扰活性,但与雌二醇混合后,呈现明显的拮抗效应,内分泌干扰活性被显著抑制.机理分析表明六氯苯、雌二醇、二者混合物都可以干扰雌激素受体和胞外信号调节激酶(ERK)信号通路、激活转录因子、诱导细胞增殖.路径分析表明,六氯苯与雌二醇的拮抗作用与雌激素受体通路无关,主要原因是雌二醇降低了六氯苯对ERK的活化程度、降低了p-ERK蛋白的表达、从而干扰了丝裂原活化蛋白激酶信号转导.转录因子分析表明,雌二醇弱化六氯苯内分泌干扰活性的主要原因是降低了c-Myc蛋白表达.上述发现为六氯苯的控制提供了理论依据.     

米非司酮（RU486）对人子宫肌瘤组织雌,孕激素受体的影响

孕酮促进子宫肌瘤生长，米非司酮则可缩小肌瘤体积。为进一步了解米非司酮的抗孕酮作用，本文研究米非司酮治疗后子宫肌瘤细胞的雌、孕激素受体状况。方法：将有子宫肌瘤症状的妇女２２人随机分成２组（对照组１２人，米非司酮组１０人）。患者年龄为３０～５０岁，平均４２０９岁。米非司酮组在手术前一周，每天口服米非司酮２５ｍｇ。切除子宫后立即取一块肌瘤组织及子宫内膜，在福尔马林固定，以后用石蜡包埋。肌瘤样品经单克隆抗体及ＬＳＡＢ反应后，用于研究雌、孕激素受体的表达情况。利用计算机分析系统测定平均密度做受体的定量分析。子宫内膜组织用于月经周期的组织学分期。结果：与对照组相比，米非司酮组显示（１）雌激素受体含量在增生期明显增加（Ｐ＜００５）；（２）雌激素受体含量在分泌期无明显变化（Ｐ＞００５）；（３）孕激素受体含量无论是在增生期还是分泌期均明显减少（Ｐ＜００５）。结论：米非司酮能降低肌瘤细胞的孕激素受体含量，这样它可抑制孕酮促肌瘤组织生长的作用     

雌二醇与镉雌激素活性拮抗效应及其机制研究

为了更好地理解镉对人体的健康效应以保障人体健康,以典型天然雌激素雌二醇(E2)为代表,研究了E2与Cd的共同作用效应.主要研究了人体乳腺癌细胞MCF-7增殖、周期分析、雌激素活性作用途径等.结果发现Cd具有雌激素活性,但与E2共存时发生拮抗作用,雌激素活性明显下降.细胞周期研究表明,E2,Cd及两者混合物均能提高DNA合成期细胞比例,促进细胞增殖.增殖途径分析表明,E2,Cd及其混合物使细胞内雌激素受体α(ERα)蛋白的表达量明显降低,拮抗作用的发生主要来自丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路.E2和Cd可以诱导增殖相关蛋白Ki67的表达,促进细胞增殖,而E2与Cd联合使Ki67的表达极大地降低.     

类固醇激素受体在扬子鳄睾丸表达的免疫细胞化学研究

用免疫细胞化学方法对雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR) 在扬子鳄睾丸中进行定位研究.结果表明,三种类固醇激素受体在扬子鳄睾丸中都有分布:雄激素受体在睾丸的肌样细胞和支持细胞中呈阳性反应,雌激素受体在睾丸的间质细胞中呈 阳性反应,孕激素受体在睾丸的生精细胞中呈阳性反应.推测结果表明,雄激素受体在扬子 鳄精子发生过程有重要作用;雌激素受体可能在扬子鳄睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄性激素的分泌,进而调节生精过程和精子发育成熟,孕激素受体可能通过转换成AR和ER来对精子发生进行调节.这些结果为证明性类固醇激素参与调节扬子鳄性腺生殖内分泌调控提供了重要的形态学新证据.     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现:S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高;在妊娠第4天,子宫中S100A10基因表达明显上调,且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达,其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞,且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞,而非植入位点呈现极其微弱的表达;从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达;正常动情周期中,S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调;卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达,孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一，是一种钙依赖性的信号通路的介导分子，近年来有研究表明，它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RTPCR和原位杂交方法，研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达，在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现：S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达，在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高；在妊娠第4天，子宫中S100A10基因表达明显上调，且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达，其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞，且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞，而非植入位点呈现极其微弱的表达；从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达；正常动情周期中，S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达，孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

卵泡刺激素促进卵巢颗粒细胞增殖分化的信号通路的研究进展

卵泡刺激素（FSH）是一种垂体前叶合成和分泌的糖蛋白激素,是卵巢发育的重要激素,可与卵巢颗粒细胞膜上的特异性受体结合从而促进细胞的增殖分化,激活细胞内芳香化酶生成雌激素和孕激素。FSH在卵巢颗粒细胞中主要依靠cAMP—PKA信号通路促进细胞增殖,同时也发生多种信号通路,ERK1／2、ERK5、p38MAPK、P13K／Akt、VEGF均参与FSH促进卵巢颗粒细胞的增殖分化;它们之间相互作用促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

细胞周期与细胞凋亡共同的调控分子--Survivin蛋白(综述)

细胞周期与细胞凋亡是有着紧密联系的生命活动。尽管凋亡调控蛋白常常牵涉到细胞周期的调控，但是细胞周期与细胞凋亡共同的的调控分子却很少见。一个新的抗凋亡蛋白——Survivin蛋白，最近被发现同时具有调控细胞凋亡和细胞周期的双重功能，这为细胞周期与细胞凋亡之间存在紧密联系提供了有力的证据。另一方面，它的表达和分布特点对细胞增殖非常有利，提示Survivin蛋白可能是快速增殖细胞(如癌细胞)重要的测控分子。     

HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响

研究了环六亚甲基双乙酰胺对人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖和相关基因表达的影响.实验结果表明HMBA可明显抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达50.69%,分裂指数抑制率达58.8%,增殖细胞核抗原的表达降低,细胞周期被阻滞在G0/G1期.免疫细胞化学染色结果显示,经HMBA处理之后,与增殖分化调控有关的癌基因c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53的表达降低、抑癌基因p21WAF1/CIP1、p16、rb的表达升高.研究结果表明,HMBA能够有效抑制人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,其对细胞增殖的抑制作用与HMBA下调c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53等癌基因以及上调p21WAF1/CIP1、p16、rb等抑癌基因的表达,从而调控细胞周期有重要关系.     

2-ME抑制人子宫内膜癌细胞株增殖的研究

目的　探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞体外增殖和凋亡的抑制作用.方法选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME的培养液,对照组不含2-ME.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察2-ME对人子宫内膜癌细胞株KLE增殖的抑制作用;药物作用后的克隆形成实验;电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果2-ME浓度为10.0～50.0μM时,明显抑制KLE细胞的增殖(P<0.01),并具有时间依赖性和剂量依赖性.2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05).电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体.结论2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株增殖有抑制作用,并能促进其凋亡.     

Abrogation by c-myc of G1 phase arrest induced by RB protein but not by p53.

Inactivating mutations of the retinoblastoma gene (RB) are found in a wide variety of tumour cells. Replacement of wild-type RB can suppress the tumorigenicity of some of these cells, suggesting that the RB protein (Rb) may negatively regulate cell growth. As activation of c-myc expression promotes cell proliferation and blocks differentiation, it may positively regulate cell growth. The c-myc protein is localized in the nucleus and can physically associate with RB protein in vitro, hence c-myc may functionally antagonize RB function. Microinjection of Rb in G1 phase reversibly arrests cell-cycle progression. Here we co-inject RB protein with c-myc, EJ-ras, c-fos or c-jun protein. Co-injection of c-myc, but not EJ-ras, c-fos or c-jun, inhibits the ability of Rb to arrest the cell cycle. The c-myc does not inhibit the activity of another tumour supressor, p53 (ref. 12). Thus, c-myc and RB specifically antagonize one another in the cell.     

Hedgehog/Wnt feedback supports regenerative proliferation of epithelial stem cells in bladder

Epithelial integrity in metazoan organs is maintained through the regulated proliferation and differentiation of organ-specific stem and progenitor cells. Although the epithelia of organs such as the intestine regenerate constantly and thus remain continuously proliferative, other organs, such as the mammalian urinary bladder, shift from near-quiescence to a highly proliferative state in response to epithelial injury. The cellular and molecular mechanisms underlying this injury-induced mode of regenerative response are poorly defined. Here we show in mice that the proliferative response to bacterial infection or chemical injury within the bladder is regulated by signal feedback between basal cells of the urothelium and the stromal cells that underlie them. We demonstrate that these basal cells include stem cells capable of regenerating all cell types within the urothelium, and are marked by expression of the secreted protein signal Sonic hedgehog (Shh). On injury, Shh expression in these basal cells increases and elicits increased stromal expression of Wnt protein signals, which in turn stimulate the proliferation of both urothelial and stromal cells. The heightened activity of this signal feedback circuit and the associated increase in cell proliferation appear to be required for restoration of urothelial function and, in the case of bacterial injury, may help clear and prevent further spread of infection. Our findings provide a conceptual framework for injury-induced epithelial regeneration in endodermal organs, and may provide a basis for understanding the roles of signalling pathways in cancer growth and metastasis.     

IRS1在藻蓝蛋白介导的H460细胞增殖和迁移调控中的作用

藻蓝蛋白来源于海洋藻类,是我国认可的食品着色剂和功能型食品．初期研究表明,藻蓝蛋白处理能抑制人类非小细胞肺癌系H460的体外增殖能力和迁移能力,使得其体外集落形成能力减弱．通过转录组学测序分析进一步探究具体作用机制,从藻蓝蛋白处理前后发生显著变化的基因中,筛选出了一个藻蓝蛋白处理后发生显著下调的基因,即胰岛素受体底物1（irs1）,并通过体外转染siRNA的方法抑制IRS1的表达,来研究其对非小细胞肺癌系H460的增殖和迁移能力的影响．采用MTT法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期分布．结果表明,下调IRS1的表达后,与对照组相比,细胞的生长速率降低,迁移能力、集落形成能力受到抑制,同时使细胞周期被阻滞到G1期．PI3K-AKT信号通路研究表明,藻蓝蛋白处理使得PI3K-AKT信号通路活性受到抑制,下调IRS1的表达使得PI3K-AKT信号通路部分蛋白表达也下调,通路活性受到一定程度抑制．本研究结果表明,藻蓝蛋白抑制非小细胞肺癌系H460体外活性功能的机制,可能与IRS1的表达和PI3K-AKT信号通路的活性有关,这为藻蓝蛋白的调控机制提供了有力的理论基础．      

皮蛋模拟胃肠道消化物对HepG2细胞的影响

皮蛋是中国传统食品,其水解物具有抗氧化、抗炎和抗癌等功效,具有良好的医学前景,但目前皮蛋发挥抗癌功效的途径及作用机制尚不清楚。探究了皮蛋模拟胃肠道消化物(preserved eggs simulated gastrointestinal digests,PESD)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。将皮蛋经体外模拟胃肠道消化处理后,进行细胞实验,用CCK-8法进行细胞增殖分析,研究PESD对HepG2细胞存活率的影响,采用碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色标记的方法,通过流式细胞术测定PESD对HepG2细胞周期的影响,用western blot法测定细胞周期相关调控蛋白的表达。研究发现:PESD以剂量依赖性方式对HepG2细胞增殖进行抑制,IC₅₀为4.17mg/mL;PESD处理显著增加了S期细胞的占比(P<0.05),使HepG2细胞阻滞于S期;4mg/mL的PESD处理HepG2细胞24h后,细胞中cyclin A、cyclin E、ATM、chk2和CDC25A的蛋白表达水平上升(P<0.05),而CDK2蛋白表达水平下降(P<0.05)。研究认为,皮蛋模拟胃肠道消化物是以剂量依赖性的方式来抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,主要是通过ATM-chk2-CDC25A信号通路,上调cyclin A和cyclin E蛋白的表达,下调CDK2蛋白的表达来实现人肝癌HepG2细胞阻滞于S期,影响人肝癌HepG2细胞周期进程,抑制癌细胞的增殖。研究结果旨在为皮蛋抗癌作用机制的阐明提供一定的理论基础。