血管内皮细胞凋亡过程中几种癌基因表达的研究

为了研究细胞凋亡的分子调控机制,用光学显微技术、ＤＮＡ凝胶电泳和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法,研究了去除生长因子和蛇诱导的两个血管内皮细胞凋亡系统中ｐ５３、ｃ－Ｈｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ和ｂｃｌ－２基因的表达。发现去除生长因子诱导细胞的凋亡过程中,Ｐ５３基因表达显增加,ｃ－Ｈ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达无变化;蛇毒诱导细胞凋亡过程中,Ｐ５３有达显增加ｃ－Ｈ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ基因表达无变化。在正常生     

细胞凋亡的基因调控研究进展

细胞凋亡的调控是细胞生理死亡和肿瘤等疾病发生的重要机制。分别对线虫和哺乳类动物细胞凋亡的基因调控研究进展进行了综述 ,阐述了bcl 2基因家族、c myc基因、p5 3基因、白细胞介素Ⅰβ转化酶基因家族、Fas/FasL基因对细胞凋亡的调控作用。     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

脑缺血再灌注损伤中凋亡调控基因表达的变化及意义

脑缺血再灌注损伤的病理机制十分复杂，目前许多学者发现细胞凋亡与其密切相关。细胞凋亡是一种基因控制的细胞主动死亡，它参与机体许多病理生理过程。研究资料表明，脑缺血再灌注损伤是诱导凋亡调控基因表达的最强烈刺激之一。脑缺血再灌注后，有多种基因被诱导表达，这些基因编码的蛋白质产物直接或间接参与了凋亡的调控。对脑缺血再灌注后的bcl-2基因家族、fas基因、p53基因的表达及作用机制进行论述。     

p38-p53-p21信号通路参与调控血管紧张素-Ⅱ诱导的人血管平滑肌细胞衰老

血管紧张素-Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)是一个重要的血管活性肠肽,对血管的结构和功能有重要的调控作用.研究显示,伴随机体代谢形成的AngⅡ激活后在体内外均可诱导血管平滑肌细胞发生衰老.但AngⅡ究竟通过哪条信号通路引起人血管平滑肌细胞衰老,衰老的细胞在RNA和蛋白质层面上到底发生了哪些改变,仍不清楚.为此,本研究通过转录组测序(RNA-seq),结合实时定量PCR(qPCR)以及Western blot等方法研究AngⅡ诱导人血管平滑肌细胞衰老中的基因表达谱改变及参与的信号通路,发现参与其他细胞衰老的TGF-β信号通路在AngⅡ诱导的人血管平滑肌细胞衰老中受损.研究进一步发现p38-p53-p21信号通路参与调控人血管平滑肌细胞的诱导衰老过程;而p38-p16信号通路则不参与此衰老调控.本研究也提供了证据支持p53的调控也发生在磷酸化水平上.     

p53基因调控网络研究进展

肿瘤抑制基因p53表达的p53蛋白是一个通用转录因子,与其上、下游功能相关基因组成了一个复杂的基因调控网络,在这个基因网络中p53基因起着关键作用;DNA损伤、缺氧、原癌基因的激活等均能刺激p53基因表达;p53表达升高后,可通过p53-MDM2反馈环路与泛素系统等对p53表达水平进行精确调节;p53通过调控多种下游/靶基因表达完成多种生物学功能,主要包括阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性等;认识p53基因调控网络的功能有助于理解p53及其下游/靶基因间的具体作用机制。     

小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用

阿糖胞苷是白血病的重要药物,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病,并取得了一定的疗效,但其作用机制尚未完全阐明,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关.文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara-C(10-8M)对HL-60细胞周期和细胞凋亡的影响,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P53蛋白和p53mRNA、bcl-2mRNA表达水平的改变,以探讨bcl-2和p53基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的关系.结果表明:小剂量Ara-C能诱导HL-60细胞凋亡,其分子机制可能与P53蛋白、p53mRNA表达增加和bcl-2mRNA表达降低有关.     

髓母细胞瘤中P53、bcl-2及Ki-67的表达及其意义

用免疫组化S P法检测 2 5例髓母细胞瘤中Ki 6 7、P53 及bcl 2基因的表达。结果表明 ,在 2 5例髓母细胞瘤中 ,bcl 2和P53 蛋白的阳性表达率分别为 72 % (18/ 2 5 )和 16 % (4/ 2 5 )。Ki 6 7阳性率平均为 (33.34± 4 .98) % ,其表达与组织学分型有关。说明在髓母细胞瘤中bcl 2蛋白与P53 蛋白可能参与调控细胞的凋亡     

抑癌基因p53与肿瘤发生及基因治疗的研究进展

概述了抑癌基因p53的结构和特性,以及p53的抑癌作用机理、基因治疗的研究进展.抑癌基因p53是人类细胞中非常重要的基因,野生型p53基因产物具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用.在p53基因发生突变或缺失时,可引起多种肿瘤.当人工将野生型p53基因与载体结合成重组DNA分子导入肿瘤患者体内后,有可能达到治疗恶性肿瘤的目的.     

Expression of bcl-2 gene increases in apoptosis of vascular endothelial cells induced by rattlesnake venom

Apoptosis of vascular endothelial cells (VEC) has been induced by deprivation of survival factors (aFGF and serum) and by rattlesnake venom. The expression of bcl-2 gene has been examined by Northern blotting in the two apoptosis inducing systems. Our results show that the expression of bcl-2 has not been detected in normal culture cells and in apoptotic cells induced by deprivation of survival factors. But in apoptotic cells induced by rattlesnake venom (10 g/mL), the expression of bcl-2 increases, and its mRNA exhibits two bands. The data first suggest that increasing expression and splitting of bcl-2 mRNA may play an important role in apoptosis of VEC induced by rattlesnake venom, and this finding is helpful to understanding the role of bcl-2 in regulation of apoptosis.     

Expression ofbcl-2 gene increases in apoptosis of vascular endothelial cells induced by rattlesnake venom

Apoptosis of vascular endothelial cells (VEC) has been induced by deprivation of survival factors (aFGF and serum) and by rattlesnake venom. The expression ofbcl-2 gene has been examined by Northern blotting in the two apoptosis inducing systems. Our results show that the expression ofbcl-2 has not been detected in normal culture cells and in apoptotic cells induced by deprivation of survival factors. But in apoptotic cells induced by rattlesnake venom (10 ng/mL), the expression ofbcl-2 increases, and its mRNA exhibits two bands. The data first suggest that increasing expression and splitting ofbcl-2 mRNA may play an important role in apoptosis of VEC induced by rattlesnake venom, and this finding is helpful to understanding the role ofbcl-2 in regulation of apoptosis.     

细胞凋亡的基因调节

现普遍认为细胞凋亡是基因介导的细胞死亡,大量的实验结果表明导致细胞凋亡的基因有ced3、ced4、p53、c-myc、E1A以及ICE基因等。抑制细胞凋亡的基因有ced9、v—ab1、v-raf、E1B、P35、bcl-2及相关基因(BHRF、LMW5-HL、Bcl-X_L)等,这些基因在不同的生存因子以及在不同的细胞中,作用效果不尽相同。     

CPUY013对胰腺癌Capan2的生长抑制与诱导凋亡作用

探讨CPUY013对体外培养人胰腺癌细胞Capan2生长抑制及诱导凋亡作用.采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对Capan2细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析CPUY013对细胞周期的影响,Western Blot法检测TopoⅠ、野生型p53、caspase-3、bcl-2和bax蛋白表达的变化.MTT法、集落形成试验结果显示,CPUY013对体外培养的人胰腺癌细胞Capan2有明显的生长抑制作用,处理72 h的IC50值为7.3×10^-7mol/L（MTT法）,CPUY013在8.0×10^-8mol/L浓度可以明显抑制Ca-pan2细胞的集落形成,抑制率为69.6%.同时,CPUY013可剂量依赖地降低Capan2细胞G1期细胞的比例,升高S期细胞的比例,呈现明显的S期阻滞.CPUY013可下调TopoⅠ蛋白的表达,上调细胞中p53、caspase-3、bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖性.CPUY013对Capan2细胞具有明显的生长抑制作用,阻滞细胞周期进程,诱导Capan2细胞凋亡,其可能与降低细胞内TopoⅠ蛋白表达,增加p53、caspase-3、bax蛋白表达,降低bcl-2蛋白表达有关.     

KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长

探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞 HepG2中扮演十分重要的角色.     

博莱霉素肺损伤大鼠细胞凋亡及bcl—2／bax基因的表达

目的：探讨细胞凋亡与博莱霉素诱导大鼠早期肺纤维化及bax,bcl-2对博莱霉素大鼠肺纤维化细胞凋亡的作用。方法：通过复制博莱霉素大鼠肺纤维化模型,采用TUNEL、免疫组织化学、原位杂交及透射电镜等技术,观察博莱霉素大鼠肺组织细胞凋亡的变化及bax,bcl-2,bcl-2mRNA和蛋白的表达。结果：博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化细胞凋亡明显增加,肺上皮细胞bax蛋白表达明显上调,bcl-2mRNA及蛋白表达明显减弱,间质细胞bcl-2mRNA及蛋白表达增加。结论：肺组织细胞凋亡及bcl-2表达下调可能参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的发生,凋亡相关基因bax,bcl-2mRNA及蛋白参与博莱霉素诱导大鼠肺纤维化细胞凋亡的调控。     

Involvement of p21ras in activation of extracellular signal-regulated kinase 2.

Many growth factors upon stimulation of their receptors induce the activity of extracellular signal-regulated kinases, ERKs, also known as MAP kinases. Several of these growth factors also activate the ras proto-oncogene product, p21ras (Ras), by stimulating the conversion of the inactive GDP-bound form of Ras to the active GTP-bound form. We have shown that direct introduction of p21ras oncoprotein into cells in the absence of growth factors activates ERKs within five minutes, which indicates that normal p21ras may be involved in the activation of ERKs by growth factors. Here we use a recombinant vaccinia virus expressing an interfering mutant of p21ras, RasAsn17, to investigate this question. In NIH3T3 cells that overexpress the insulin receptor, this recombinant virus inhibits insulin-induced activation of ERK2 completely, but there is no inhibition of insulin-induced activation of phosphatidylinositol-3-kinase. In rat-1 cells the recombinant virus inhibited ERK2 activity induced by platelet-derived growth factor (PDGF) but not by phorbol ester. We conclude that p21ras mediates insulin- and PDGF-induced activation of ERK2.