酶电极法测定药用乳酸中L-乳酸含量研究

以固定化L-乳酸氧化酶（1．1．1．27）与H2O2电极构成乳酸酶电极生物传感器,研究了乳酸酶电极分析法的各种分析条件及参数,并与药典标准酸碱滴定法对比测定了药用乳酸样品中L-左旋乳酸及D．L-外消旋乳酸的含量。结果供试药用乳酸样品中L-乳酸含量约占乳酸总量的10％,因此药用乳酸属于不等量立体异构体药物。采用酶电极法测定药用乳酸中的L-乳酸含量具有专一性高、成本低、分析速度快等优点。     

丝瓜布固定化米根霉发酵生产L-乳酸

L-乳酸因其为生产绿色化学材料聚L-乳酸的原料而倍受重视．文中以米根霉As3．6462为菌种,玉米淀粉为原料,研究了用吸附固定米根霉发酵L等L酸．结果表明,相对聚乙烯醇、棉布,丝瓜布有更好的固定化效果．实验条件下,载体边长在8—10mm,载体用量为15mL／50mL种子培养基,玉米淀粉发酵L-乳酸产量为72—83g/L,连续发酵4批后产量基本稳定．丝瓜布固定化米根霉发酵L看L酸有良好的工业的应用前景．     

酶电极法检测苹果酸-乳酸发酵过程中乳酸变化

以固定化L-乳酸氧化酶（1．1．1．27）与H2O2电极构成乳酸酶电极生物传感器,研究了乳酸酶电极分析法的各种分析条件及参数,并与药典标准总酸测定法对比测定了葡萄酒苹果酸-乳酸发酵溶液中L-乳酸的含量。结果表明供试溶液中L-乳酸含量约占总酸量的10％～20％。采用酶电极法测定葡萄酒苹果酸-乳酸发酵溶液中的L-乳酸含量具有专一性高、成本低、分析速度快等优点。     

细菌发酵生产L-乳酸的研究

采用细菌进行L-乳酸的发酵生产。研究了不同发酵条件下合适的碳源浓度、氮源浓度、接种量。确定最佳发酵条件为/g·L-1∶玉米糖化液100,麸皮20、麦根20、玉米浆30,接种量为10%,37℃下,发酵72h产酸为82.1g/L。施光性鉴定为L-乳酸。     

微波辐射合成L-乳酸铝研究

利用正交设计L25（54）安排实验,以L-乳酸铝产率为考察指标,通过极差分析和方差分析优化微波辐射加热合成L-乳酸铝制备工艺。极差分析结论得到以L-乳酸、铝粉为原料,在自制催化剂存在下,合成L-乳酸铝正交实验法优选的最佳反应条件是反应时间12 h,微波功率350 W,wL-乳酸=0.05,nL-乳酸：n铝=2.935。方差分析确定了时间A、微波功率B、乳酸浓度C、乳酸/铝摩尔数比D4个因素对产率影响显著性的相对大小顺序是A〉C〉D〉B,时间是显著影响因素。在优选的条件下合成了L-乳酸铝,产率达77.0%,对合成产品进行了红外光谱、纯度、熔点、旋光度、溶解度测试。相同条件下的对照实验结果表明,微波辐射加热反应产率是传统加热方法的5倍。     

L—乳酸产生菌的诱变选育

米根霉 R87经紫外线和氯化锂复合诱变处理,获得一株高产、稳产 L-乳酸的变异株R87-91.其在10%初糖和发醇72小时,产酸达8.18%.     

离子交换膜电渗析法从乳酸钠制备乳酸

采用三室离子交换膜电渗析法,将乳酸钠转化为乳酸,比较JM-1,DF-120两种离子交换膜的转酸效果,考察乳酸钠的初始浓度对乳酸回收率及能耗的影响.结果表明,乳酸钠的初始浓度对回收率及能耗均有较明显的影响;JM-1离子交换膜的选择性相对较好,乳酸回收率较高.在操作电流为4 A,乳酸钠初始浓度为1.0 mol.L-1的条件下,乳酸的回收率达到95%,能耗为0.78 W.h.g-1.     

D,L-乳酸的立构选择性聚合

为了制备高光学活性的聚乳酸,以D,L-乳酸为原料,熔融缩聚合成聚乳酸.采用旋光度法、红外光谱、差示扫描量热法、凝胶渗透色谱和核磁共振等方法研究了聚乳酸的结构和性能.结果表明:锡粉催化与自催化的D,L-乳酸聚合均可以得到较低分子质量、消旋的聚D,L-乳酸.SnCl2对甲苯磺酸与SnCl2/邻甲苯磺酸两个催化体系都具有立构选择性,可以催化D,L-乳酸聚合制备L-构型的聚乳酸.立构选择性聚合所得的聚乳酸具有较高相对分子质量(Mr>20000)、窄分布(分布指数1.1)、较高光学活性(比旋光度-109,光学纯度70.5%)和熔点(112℃).     

大孔径玻璃珠固定乳酸脱氢酶用于流动注射分析...

本用孔径为１２００Ａ的多孔玻璃珠作为载体，将乳酸脱氢酶固定于其上，装入柱内，联结于流动体系中。测定了固定化乳酸脱氢酶的表观米氏常数和人血清中的Ｌ－乳酸。Ｌ－乳酸的线性范围在０。１－９ｍｍｏｌ／Ｌ，回收率为９６－１０３％，变异系数＜０。７％，最低检出限为０。４ｎｍｏｌ，每小时可进样３５次，酶的稳定性良好。     

L-乳酸发酵培养基的研究

最终试验结果表明，发酵培养基成分为碳源为葡萄糖添加量为6％时L-乳酸的产量8.1g/l，氮源为牛肉膏添加量为2％时L-乳酸的产量9．02g/l，PH为6．5时5．62g/l，均为同一条件下的最高产酸量，最终确定最佳发酵培养基为6％葡萄糖、2％牛肉膏添、PH为6．5。     

乳酸脱氢酶在CTAB-戊醇反胶束体系中的催化动力学研究

以十六烷基三甲基溴化铵（CATB）-异辛烷-戊醇反胶束体系对乳酸脱氢酶（LDH）了固定化,探讨了体系含水量W0（W0=n（水）/n（CTAB）、CTAB浓度、戊醇体积比对LDH固定化的影响及游离酶和固定酶的催化动力学性质.结果表明：LDH进入反胶束的最佳条件是：体系含水量为4.3,CTAB浓度为0.24 mol/L,戊醇体积比为25%.对游离酶和固定化酶的酶促反应的最适pH值均为8.8,最适反应温度分别为52℃和30℃,米氏常数Km分别为65mmol/L和48mmol/L.在25℃时,游离酶存放2 h后失活35%,而固定化酶仅失活16%,说明反胶束固定化LDH具有良好的活力稳定性.     

米根霉L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

文章以米根霉基因组DNA为模板,根据已公布的米根酶L-乳酸脱氢酶基因(ldnL)序列设计引物,PCR扩增得到含有ldnL的DNA片段;PCR产物T/A克隆后再双酶切,将ldnL片段连接到大肠杆菌表达载体pET17b,得到重组表达质粒pET17b-ldnL;pET17b-ldnL转化大肠杆菌BL21(DE3),摇瓶培养诱导表达后的菌体经SDS-PAGE电泳分析,结果表明克隆的ldnL基因在大肠杆菌中实现表达。     

层状材料水滑石固定青霉素酰化酶的研究

以层状材料水滑石(LDH)为载体,采用不同酸性氨基酸插层,通过直接吸附和戊二醛交联的方法进行青霉素酰化酶(PGA)的固定.考察了各个因素对固定化酶酶活性的影响,优化了反应条件.制得的固定化酶的表观酶活性达9.67×10-6mol/s,酶活性回收率56.6%.对固定化酶的操作稳定性作了初步探讨.     

耐力跑训练对CCO、LDH活性组织化学特性影响

实验采用肌肉活检技术,运用现代组织化学方法,结合扫描显微分光光度计的方法,对6名普通受试者进行8周耐力训练前后右腿股外肌中有关代谢酶的活性的变化进行了对比观察.结果发现,经过8周的耐力跑训练后,股外肌中的细胞色素氧化酶(CCO),经训练活性提高44.2%(P<0.15);而乳酸脱氢酶(LDH)及三磷酸腺苷酶(ATP)的活性,练习前后无显著变化.     

流通池光纤荧光光度法测定乳酸

用明胶和戊二醛将乳酸脱氨酶（LDH）固定于PVC颗粒表面后，装成酶柱，以流通池光纤荧光光度法连续测定乳酸，检测乳酸的线性范围为2．0×10－5～4．0×10－1mol·L－1。该方法简便、快速，重现性、稳定性均好，酶的使用寿命长，已用于酿牛奶和食用白醋中乳酸的测定。     

固定化乳酸酶膜圈的研究

本文研究了固定化L-乳酸氧化酶膜圈的制作技术及其生化特性,并与美国YSI酶膜圈进行了比较,认为二者具有等值性,可与YSI-23L型乳酸分析仪配套使用。     

固定化乳酸脱氢酶的催化性质研究

研究了固定化乳酸脱氢酶(LDH)的制备和催化性质,讨论了戊二醛体积分数、酶的偶联时间、pH值对酶固定化的影响.对游离酶和固定化酶催化性质的研究结果表明:酶促反应最适pH分别为9.2和10.2,最适温度分别为51℃和50℃,米氏常数分别为16.2 mmol/L和0.7 mmol/L.与游离酶相比,固定化酶的活力稳定性更佳,有更好的贮存稳定性和复用性.     

A Study on the Molecular Switch of Gene Expression of the Mouse Heart Nuclear DNA Fragments

It is observed by in situ stain that LDH(1-5)…nNAD+ can probably enter the nucleopore and can be bound bound specifically with the genes that encode them. During the in vitro expression, the dilution of heart nuclear DNA fragments could enhance the expression activity of LDH/DNA and the amount of expressed LDH(1-5) is in proportion to the amount of dissociable LDH(1-5) on the LDH/DNA. With the integration of 14CLeu to the proteins, it is also observed that the addition of LDH(1-5)…nNAD+ can suppress the in vitro expression activity of LDH/DNA. AFM bservation shows that the regulation sequence at the both ends of active genes may be bound with such active factors as proteins encoded by the genes which probably is the main molecular switch of gene expression and regulation we have been always searching for. Our work shows the prospective application of the combination of AFM and isotope labeling in the research of biological reaction.     

固定化脂肪酶催化（R，JS）-1-苯乙醇转酯化拆分反应及动力学研究

利用制备的舍Fe304无机磁性复合物FSN固定假单胞茵脂肪酶（Pseudomonas sp Lipase,PSL）,获得具有高活性、高对映体选择性和易分离的固定化酶PSL／FSN．乙酸乙烯酯做酰化试剂,PSL／FSN在正庚烷溶剂中催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应,40℃反应2h时,（S）-1-苯乙醇对映体过量值eep和（R）-乙酸-1-苯乙酯的对映体过量值eep均为99％,（R,S）-1-苯乙醇的转化率达到理论值。固定化酶PSL／FSN在70℃经2h热处理,其活性和对映选择性没有明显的下降;PSL／FSN重复使用10次,其活性和对映体选择性未出现衰减。基于实验数据,研究了固定化酶催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学行为,获得了（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学方程。     

植物乳杆菌产乳酸脱氢酶的发酵条件优化及酶的纯化

对植物乳杆菌突变株RS2 2的发酵条件做了优化, 在25 L发酵罐上进行放大实验, 使菌株RS2 2的乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase）产酶水平有了较大提高, 细胞抽提液比酶活达到24.6U/mg．利用DEAE离子交换、 疏水层析对酶的纯化进行 了研究, 最终酶的纯化倍数为49.1, 比活力达1　208.6 U/mg,初步确定了LDH的纯化路线.