缩酮丙酮酸转移酶基因在野油菜单胞菌中的表达

将野油菜黄单胞菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）ＮＲＲＬ－Ｂ１４５９菌株的缩酮丙酮酸转移酶基因,在ｐＲＫ２０７３辅助质粒的协助下,经三亲本接合法,导入野油菜黄单胞菌ＮＫ０１小菌落的抗性突变株（ＮＫ０１·Ｓ·１）中,测定各接合子的产胶率、黄原胶粘度及丙酮的含量,得到一系列优于原始菌株的接合子,其中四株的产胶率、丙酮酸含量及黄原胶粘度分别较出发菌株提高７．２８￣１０．６０％、４０．２４     

野油菜黄单胞菌NK－01生物合成黄原胶的分子遗传学分析

本文采用甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变野油菜黄单胞菌ＮＫ－０１得到多糖合成缺陷的不产粘突变株。经ＳａｌＩ部分酶切得到ＮＫ－０１染色体ＤＮＡ片段，将其连接到广泛寄主载体ｐＲＫ２９３上，在Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１中建立完整的ＮＫ－０１基因文库。在协助质粒ｐＲＫ２０１３存在下，不产多糖突变株分别与含基因文库的Ｅ．ｃｏｌｉ菌落群进行三亲接合转移，筛选具有卡那霉素抗性的产粘接合后体。对接合后体进行重组质粒的酶切分析表明，所克隆的ＤＮＡ具有片段重叠。上述重组质粒对另外９株不产多糖突变株互补检测及遗传学分析表明，１３．４ｋｂ的ＤＮＡ片段含有合成黄原胶所必需的基因。     

β－淀粉酶基因在黄单胞菌中的克隆及表达

广泛寄主范围载体ｐＫＴ２１０可在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的协助下转移进入黄单胞菌（革兰氏阴性）中并能稳定存在；来源于枯草杆菌的β－淀粉酶基因与载体ｐＫＴ２１０形成重组质粒ｐＹＬ１，并以其转化大肠杆菌；通过三亲本接合将ｐＹＬ１引入带有利福平抗性的黄单胞菌ＮＫ０１－Ｒ中，通过抗性选择接合子，并测定接合子的淀粉酶水解能力及产胶能力．本文获得一株黄原胶产量比出发菌株提高２０％，且淀粉酶水解能力显著提高的工程菌株．     

β—淀粉酶基因在黄单胞菌中的克隆及表达

广泛寄主范围载体ｐＫＴ２１０可在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的协助下转移进入黄单胞菌（革兰氏阴性）中并能稳定存在；来源于枯草杆菌的β－淀粉酶基因与载体ｐＫＴ２１０形成重组质粒ｐＹＬ１，并以其转化大肠杆菌；通过三亲本接合将ｐＹＬ１引入带有利福平抗性的黄单胞菌ＮＫ－０１－Ｒ中，通过抗性选择接合子，并测定接合子的淀粉酶水解能力及产胶能力。本文获得一株黄原胶产量比出发菌株提高２０％，且淀粉酶水解能力显著提高的工     

黄原胶适宜培养条件的研究

分别研究了野油菜黄单胞菌ＳＤ－２液体种子培养和发酵产胶的适宜条件。液体种子培养的适宜条件为：起始ｐＨ７．０，ＣａＣｏ３ｉ浓度０，培养温度２９℃，５００ｍＬ三角瓶装量１００ｍＬ，发酵产胶的适宜条件为：起始ｐＨ７．，ＣａＣｏ３浓度０．２％，培养温度３１℃，５００ｍＬ。采用适宜条件发酵黄原胶，最终发酵液粘度为８７２０ｍＰａ．ｓ，黄原胶浓度为２．７８％，分别比对照提高了２５．３％和１５．４％。     

甘蔗糖蜜发酵产黄原胶优良菌株的选育

黄原胶是由野油菜黄单胞菌发酵生产的重要的商业微生物多糖产品,实验通过微波诱变处理保藏菌株,筛选到一株能以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产黄原胶的优良正突变株X12,实验结果表明：在初步确定的实验条件下,该菌株发酵生产黄原胶的产量达22.14 g/L,是未诱变菌株20183的1.53倍,传代实验表明,突变菌株X12的黄原胶产量及性状无大变化,遗传性状稳定。     

利福平及杆菌肽抗性突变对黄单胞菌产胶率的影响

黄单胞菌（Xanthomonas Campestris．X．C．）的利福平及杆菌肽抗性突变与产黄原胶（xanthan gum）的能力正相关。从出发菌株X．C．NK-01中筛选自发突变的利福平抗性（rifampicin—resistent．Rif）和抗菌肽抗性（bacitracin—resistent，Baci）菌株，然后通过28℃，200r／min的250ml摇瓶发酵试验，筛选到两株Rifr及两株Bacir菌株。其产量分别比出发菌株提高了20％和30％，黄原胶粘度分别提高了20％-30％。分析了利福平和杆菌肽抗性突变菌株产胶能力提高的可能生化因素。     

野油菜黄单胞菌8004胞外酶及多糖合成正负调控基因在…

利用野油菜黄单胞菌８００４正、负调控胞外酶及多糖合成的基因片断分别经三亲本接合方法导入黄单胞菌ＮＫ０１抗性突变株中，测定接合子四种胞外酶活力和多糖合成能力，确定该正、负调控基因对ＮＫ０１的作用。结果表明，负调控基因作用明显，使ＮＫ０１胞外多糖及胞外酶产量显著降低，正调控基因未见明显的胞外酶及多糖合成的增强作用。本文将对正、负调控基因的作用方式作了初步探讨。     

野油菜黄单胞菌X.c—18的选育及发酵条件的研究

通过人工诱变野油菜黄单胞菌，筛选出１株具有良好抗变异性的突变株Ｘ．ｃ－１８。该突变株能很好地利用蔗糖和玉米淀粉为碳源，蛋白胨和黄豆饼粉为氮源。其最佳黄原胶发酵总糖量与总蛋白质量之比为５：０．５，最适ｐＨ值为７．０，温度为２８℃。摇瓶发酵７２ｙ，黄原胶产量每升发酵液一般可在３０ｇ以上，最高产量达３２．６ｇ，对碳源转化率为７１．５４％。     

以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产黄原胶的研究

以甘蔗糖蜜为碳源生产黄原胶,摇瓶发酵７２ｈ,其产胶量可达３．２６％,碳源转化率为５６．２％,成品粘度１７６０ｍＰａ．ｓ,剪切值６．５３。实验结果表明,甘蔗糖蜜完全可以代替蔗糖、玉米淀粉或葡萄糖为碳源发酵生产黄原胶,从而为完善我国黄原胶生产技术提供了一条新的途径。     

反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸

提出一种利用反向高效液相色谱法(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸的方法。应用反相C18色谱柱 ODS-2 HYPERSIL 250 mm×4．6 mm 5μm,以0．05 mol·L-1NH4H2PO4(用H3PO4调pH2．6)为流动相,发酵液经稀硫酸预处理后直接进样分离定量,每一样品的分析过程不超过5 min,可及时了解丙酮酸发酵过程中丙酮酸的变化,适于发酵液中丙酮酸的检测。     

溶氧对丙酮酸发酵的影响

采用实验室选育的高产丙酮酸菌株TorulopsisglabrataTPl9,在3种供氧方式下,研究了5L发酵罐上的丙酮酸发酵过程,比较了3种供氧方式下丙酮酸发酵、菌体生长、葡萄糖消耗和副产物的生成。发酵48h丙酮酸最高产量为65.1g·L-1;转化率为58.6%,生产强度为1.35g·L-1·h-1。     

发酵液中丙酮酸的HPLC法检测的研究

对高效液相色谱(HPLC)法定性定量测定发酵液中丙酮酸含量进行了研究,确定了最佳操作条件:SCR 101H色谱柱、柱温20℃、高氯酸水溶液为流动相、流速0.8mL/min、pH3.8。通过测定回收率、重现性等项指标及与酶法测定结果的比较,证明此方法对发酵液中丙酮酸的检测具有准确、快速等特点,适于发酵液中丙酮酸的检测。     

原核表达载体pHsaE1αβ的构建和人丙酮酸脱氢酶的表达与纯化

以质粒pQE9为原型载体, 将编码hPDH的α和β亚基的cDNA串联克隆到该载体上, 成功地构建了hPDH基因的表达载体pHsaE1αβ. 并在大肠杆菌中表达了hPDH, 通过 亲和层析法进行纯化, 对一些生物化学性质进行表征.     

补充丙酮酸盐对运动能力的影响

用文献资料法、对比法、逻辑分析法等研究了补充丙酮酸盐对身体一般功能和运动能力的影响.结果表明:丙酮酸盐补充可以降低体重和增加利用脂肪供能;有关丙酮酸盐补充对身体其他机能的影响也有报道,但仅有一些初步的证据证明它在运动员中使用的有效性;丙酮酸盐补充对人体影响的机制和有效性还有争议,推荐运动员使用丙酮酸盐的剂量还不明确.     

Torulopsis glabrata 620在丙酮酸生物合成中的能荷变化和氧化-还原态趋势

建立了用高效液相色谱法同时测定丙酮酸产生菌Toru lop sis g labrata 620中的ATP、ADP、AM P、NAD 和NADH的方法,从而描绘了在整个发酵过程中菌体的能荷变化和氧化-还原态趋势,指出菌体的能荷水平和丙酮酸生物合成密切相关,在菌体的能荷水平降低至0.1时丙酮酸开始大量合成,直至发酵末期能荷水平又重新升高。这为进一步提高丙酮酸的产量、研究Toru lop-sis g labrata中物质与能量代谢的关系奠定了基础。     

丙酮酸钙合成工艺的研究

研究了酒石酸合成丙酮酸钙的工艺，首先选择适宜的丙酮酸生产工艺路线，利用合适的溶剂，得到高质量的丙酮酸，进而确定合成丙酮酸钙工艺条件，提高产品收率，收率达96％，并得到高品质的丙酮酸钙，生产成本大幅度地降低。     

丙酮酸乙酯的合成研究

叙述了以丙酮酸与无水乙醇为原料,在催化剂存在下,反应合成丙酮酸乙酯的过程。选择了合适的原料配比、催化剂、脱水剂用量等反应条件,反应所得到的丙酮酸乙酯收率为82.5%;本实验反应过程简单,适合工业化大生产。     

丙酮酸脱氢酶复合体的研究进展及应用

综述了丙酮酸脱氢酶复合体（PDHc）的组成、结构功能、调控机制、缺陷疾病及在医学和农业中的应用.丙酸酸脱氢酶系是定位在线粒体中的多酶复合体,它是由丙酮酸脱氢酶（E1）、二氢硫辛酸乙酰转移酶（E2）、二氢硫辛酸脱氢酶（E3）和一些辅助因子组成.高等生物中PDHc活性的调节主要是通过对其E1的磷酸化和去磷酸化来实现的,而细菌的PDHc的活性主要是通过别构效应来调节,PDHc缺陷导致代谢障碍,组织受损.     

硫酸亚铁催化乳酸乙酯合成丙酮酸乙酯

丙酮酸乙酯是一种重要的合成中间体,可合成多种新型医药、农药和营养补充剂。本文以双氧水为氧化剂,饱和硫酸亚铁溶液为催化剂,实验考察了催化氧化乳酸乙酯合成丙酮酸乙酯。通过正交实验,确定了合成的最佳条件为：反应温度为35℃,催化剂用量为4mL,反应时间为5h,丙酮酸乙酯的最高产率可达84．3％。