过表达E3泛素连接酶ABRv1通过泛素化CPK3提高拟南芥干旱耐受

拟南芥基因ABRv1编码了一个E3泛素连接酶,其表达量受到干旱胁迫的诱导.为了探究ABRv1功能,我们构建了ABRv1的过表达株系并进行干旱处理,结果显示ABRv1过表达株系OE-3具有90.4%的存活率,ABRv1过表达株系OE-7有88.2%的存活率,野生型Col的存活率则为53.8%,而abrv1突变体仅有7.7%的存活率,说明过表达ABRv1提高了拟南芥对干旱的耐受能力.我们还测定了干旱处理下的失水率,也能得出与上述一致的结论.此外,我们使用纯化的GSTABRv1、His-CPK3蛋白进行了体外pull-down实验和体外泛素化实验,结果证明ABRv1能够和CPK3发生相互作用,ABRv1具有E3泛素连接酶活性并且能够把CPK3单泛素化.结果揭示了ABRv1作为一个正调控因子通过泛素化作用底物CPK3参与了拟南芥的干旱胁迫应答过程.     

泛素连接酶E6AP敲减及过表达稳转细胞株的构建与鉴定

目的旨在筛选出能稳定敲减及过表达泛素连接酶E6AP的细胞株,在这两种情况下比较已知底物Arc的泛素化修饰区别,以期进一步阐明E6AP通过调控底物的泛素化进而影响底物下游功能的机理。方法从人胚肾293细胞中提取RNA再反转录成cDNA,以c DNA为模板通过PCR扩增得到E6AP目的条带,将E6AP基因克隆至p LVXIRES-mCherry质粒,构建过表达质粒;同时,合成可特异性结合E6AP mRNA的shRNA,并克隆至GIPZ质粒,构建敲减质粒。结果通过嘌呤霉素筛选得到敲减及过表达稳转细胞株,通过免疫共沉淀实验比较底物的泛素化修饰区别。结论成功构建E6AP敲减及过表达稳转细胞株,并能相应影响HEK-293细胞中底物Arc的泛素化修饰水平。     

拟南芥AtTR1对AtCPK28和AtCPK32的体外泛素化修饰研究

为了研究E3连接酶AtTR1和非生物胁迫应答的相关蛋白AtCPK28、AtCPK32之间关系,本文构建原核表达载体pET28a-AtCPK28和pET28a-AtCPK32,并在大肠杆菌中表达了AtTR1、AtCPK28和AtCPK32重组蛋白,利用亲和层析纯化相应融合蛋白.将AtCPK28和AtCPK32蛋白分别加入含有ATP、泛素、E1、E2和AtTR1的体外泛素反应体系中,western blot检测到AtCPK28和AtCPK32有多聚泛素化条带,说明AtTR1在体外能多泛素化修饰AtCPK28和AtCPK32.结果表明AtCPK28和AtCPK32可能是AtTR1调控植物抗逆信号中的下游靶蛋白.     

E3泛素连接酶Pellino蛋白的研究进展

Pellino蛋白是近年来新发现的一类E3泛素连接酶,通过靶蛋白泛素化介导蛋白降解、蛋白与蛋白的相互作用、蛋白质细胞定位以及信号传导.目前研究表明Pellino蛋白在固有免疫细胞和获得性免疫细胞中具有重要调控作用,与炎症和自身免疫密切相关.本文总结了近年来Pellino蛋白的表达与活性调控、介导的信号转导途径以及在免疫...     

类泛素化修饰Neddylation在心脏生物学中的作用

Neural precursor cell-expressed developmentally downregulated 8(NEDD8)是类泛素蛋白家族的一员,其结构与泛素相似,通过E1激活酶、E2结合酶和E3连接酶等酶促级联反应对蛋白进行翻译后修饰,这一过程即为neddylation。Neddylation异常已被证实与癌症、神经退行性疾病和先天性心脏病等多种疾病密切相关。近年来,neddylation和deneddylation(底物上的NEDD8在deneddylation酶的作用下被去除,称为deneddylation)在心血管系统中的作用备受关注,本文将主要阐述neddylation的生物学过程及其在心脏生物学中的作用。     

小麦TaUBC基因泛素结合酶活性分析

已报道的RNA水平研究表明TaUBC可能是小麦产量相关基因,生物信息学分析显示该基因属于泛素结合酶家族.荧光定量PCR显示TaUBC在小麦根茎叶中均有表达.为了验证TaUBC蛋白是否具有泛素结合酶活性,本文利用原核系统表达野生型TaUBC及三种点突变TaUBC~(C21S)、TaUBC~(C85S)、TaUBC~(C107S)蛋白,并对这些蛋白进行体外泛素化活性分析.结果证实TaUBC是一个有活性的泛素结合酶.另外,点突变C85S使得TaUBC丧失E2活性,C21S和C107S则对活性没有影响,证明其UBC结构域中第85位Cys是结合泛素的关键作用位点.     

利用CRISPR/Cas9慢病毒系统敲除人源HOIP基因

泛素化修饰是一种能调节诸多细胞功能的重要蛋白质翻译后修饰,近几年研究发现了一种新的泛素化修饰即线性泛素化修饰,LUBAC(linear ubiquitin chain assembly complex)是目前已知唯一的导致蛋白质发生线性泛素化修饰的E3酶。目前LUBAC复合物的底物和功能所知甚少。为了探索LUBAC复合物新的底物和功能,利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建稳定敲除LUBAC核心组分HOIP基因的HeLa细胞系,通过质谱鉴定此细胞系和对照细胞的差异泛素化修饰蛋白质,即可能是LUBAC新的底物。首先将靶向HOIP基因的不同CRISPR序列插入lenti CRISPRv2载体中,制备慢病毒质粒感染He La细胞,然后使用嘌呤霉素压力筛选,用Western Blot方法检测HOIP基因的敲除效果,最后成功地构建HOIP基因稳定敲除HeLa细胞系。此稳定细胞系的构建为日后深入研究LUBAC的功能提供一个人类细胞模型。     

油菜中—未知BnRCH蛋白的E3连接酶活性分析

利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RING-variant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTK-BnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GST-BnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.     

E3泛素连接酶Nedd4-1在肿瘤发生与发展过程中的双重作用研究

<正>多种肿瘤的发生、发展与E3泛素连接酶Nedd4-1水平和功能的失调存在密切关系,但一直以来,学术界对其分子机理的研究并不深入.寻找鉴定Nedd4-1的底物蛋白,建立相对完整的相关蛋白质水平的调节信号网络,深入研究探讨Nedd4-1对于肿瘤发生、发     

油菜中一未知BnRCH蛋白的E3连接酶活性分析

利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RINGvariant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTKBnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GSTBnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.     

三维适形放射治疗计划中的三维可视化系统

在进行三维适形放射治疗之前，需要运用三维医学可视化技术，获取有关病灶区的三维视觉信息（病灶的体积、空间定位、病灶与重要器官间的相对位置等），并确定靶区，以供治疗与方案评估，从而实现精确地计划。本文根据三维适形放射治疗计划的需要，开发了用于三维适形放射治疗计划的三维可视化系统。实验证明，运用该三维可视化系统，可以达到预期目标。     

可视化类库VTK在三维建模中的应用

采用VC＋＋6．0作为开发平台，引入三维可视化类库VTK，实现了散乱数据和体数据的建模．通过数据压缩、平面分割来减少数据量，分别采用不同的建模方法，如Delaunay三角化建模、轮廓线建模、MarchingCubes建模，实现了三维数据的建模．     

三维分形树木模型在3D GIS中的应用

基于分形理论，分别论述了用迭代函数系统和L系统进行三维树木实体建模的方法。同时，从树木实体在3D GIS(Dimension Geographical Information System)中的应用角度出发，对两种建模方法进行比较，确定L系统是3D GIS中构建树木实体的最佳方法，并从面向对象角度出发，给出基于L系统的树木实体对象类，从而使树木实体作为3D GIS中的对象之一融合到系统之中，为3D GIS领域中关于树木实体的表达寻找到一条有效的解决途径。     

三维形象和二维图形

论述了三维形象和二维图形的关系，使用扭矢相容修正的双三次Ｂｅｚｉｅｒ曲面方法研究物理三维图。     

OpenGL与3D Studio MAX结合实现三维仿真

介绍了一种利用OpenGL与3D Studio MAX结合在MFC下实现三维仿真的快捷方法，View3ds是把3D Studio MAx制作的*．3ds格式的三维模型转换成OpenGL格式的较好的软件，并且着重说明了其过程，该方法已经在OpenGL开发的用于舰船网络的三维视景仿真软件中实现，并且可以利用该方法实现虚拟现实。     

三维集成图像技术及其在发展三维电视上的应用

集成图像技术是一种通过微透镜阵列来记录和显示全真的三维场景的三维图像技术。在众多三维图像技术中，这一技术十分有前景应用于三维电视的研制和开发中。本文对集成图像系统及它在三维电视工业中的应用给予了详细的描述。     

三维WebGIS中三维模型格式的研究与应用

针对现阶段三维WebGIS系统在浏览器端无法加载传统的桌面端大数据量三维模型文件的问题,提出了一种利用新型的glTF文件格式,借助生成转换工具,将原始的模型文件转换为新的模型格式,实现在浏览器端有效快速加载的方法.这一方式实现了快速生成glTF模型的需求,并且传统的三维建模人员即可独立完成,较好地平衡了转换效率与人员成本之间的矛盾,同时能够保证与原始模型文件的一致性和完整性.这种转换方法是基于开源的转换插件,与传统的创作工具相结合,提高三维复杂模型的加载效率,使三维复杂模型在三维WebGIS系统应用中发挥更大作用.     

Fabrication and characterization of 3D scaffold using 3D plotting system

In this paper, we design and fabricate a 3D scaffold using rapid prototyping (RP) technology for tissue engineering. The scaffold should have a three-dimensional interconnected pore network. We fabricate a polycaprolactone (PCL) scaffold with interconnecting pores and uniform porosity for cell ingrowth using a 3D plotting system. In order to keep the three dimensional shape under mechanical loading while implanted, we design an oscillating nozzle system to increase elastic modulus and yield strength of PCL ...     

一维子空间的三维重建方法

为了从图像序列中恢复三维物体,假设相机为正投影模型,提出了一种基于一维子空间的三维重建方法.利用所有图像序列构成的行向量生成的子空间之和与三维空间点构成的行向量生成的子空间是同一线性子空间、同时由所有图像点构成的2个行向量外加一个行向量就可以组成该子空间的一个基底的特性,线性地求取子空间中的行向量,最后完成三维重建.模拟和真实实验结果表明,该重建方法具有鲁棒性好、重投影误差小等优点,而且能够将图像平等地对待.     

基于三维激光扫描技术的建筑物三维建模方法

以拓普康GLS1500扫描仪作为实验设备,从数据采集、点云处理、三维模型建立和纹理映射等方面探讨了利用三维激光扫描技术进行建筑物三维建模的方法。