酒精对PC12细胞凋亡的诱导作用

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及其与线粒体凋亡途径的关系.结果显示,采用50、100、200、400和800mmol/L浓度的酒精处理去血清培养的PC12细胞24h后,细胞存活率分别是单纯去血清培养细胞存活率的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%,呈浓度依赖性,与对照组比较差异显著(P0.05).Hoechst 33342/PI染色法观察到典型凋亡现象,如核型固缩、染色质凝集等.DNA琼脂糖凝胶电泳可见100~400mmol/L浓度酒精处理组呈现凋亡细胞典型梯状DNA.酒精能使PC12细胞线粒体膜电位下降并呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞凋亡过程中,凋亡关键蛋白Caspase-3、Caspase-9表达量升高.上述结果表明,酒精能够诱导PC12细胞凋亡,诱导作用随浓度升高而增强且酒精诱导PC12细胞凋亡与线粒体凋亡途径有关.     

去乙酰化酶抑制剂TSA对间充质干细胞C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响

采用MTT和流式细胞术分别检测不同浓度的TSA对C3H10T1/2细胞活性和细胞周期分布的影响;油红O染色检测TSA对其成脂分化的影响,实时定量PCR检测TSA对成脂分化的关键转录因子PPAR-γ,以及成脂分化标志物Fabp4和Adipoq mRNA转录的影响.研究去乙酰化酶抑制剂TSA对间充质干细胞C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响及其可能的作用机制.结果显示TSA浓度为1、10和30 nmol/L呈浓度依赖性地抑制C3H10T1/2细胞活性,改变细胞形态,并将其细胞周期抑制在G0/G1期;TSA浓度为10nmol/L明显抑制C3H10T1/2细胞的成脂分化作用,并呈浓度依赖性地抑制PPAR-γ、Fabp4和Adipoq mRNA的转录.表明TSA呈剂量依赖性地抑制间充质干细胞C3H10T1/2的增殖和成脂分化,除转录水平调控外,非组蛋白如细胞骨架相关蛋白可能也参与TSA的抑制作用.     

云芝多糖影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡的研究

研究云芝多糖(CVP)对宫颈癌HeLa细胞系的增殖、凋亡及产生途径。采用MTT法测定了CVP对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,qRT-PCR检测P53、Bcl-2和Fas基因在细胞处理前后表达量的变化。结果显示：CVP以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长。作用时间在24 h,48 h和72 h时对细胞抑制的抑制率分别为92%、95%和98%;当CVP浓度达到1.25 mg/L时,作用24 h、48 h和72 h时的IC50值分别为0.2507±0.01 mg/L、0.2720±0.04 mg/L和0.2736±0.03 mg/L;当CVP浓度为0.5 mg/L时,作用24 h和48 h后细胞凋亡率分别为26.36% 和63.81%;CVP处理HeLa细胞24 h后,Bcl-2基因的表达被显著下调。研究表明：CVP促进HeLa细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2基因的表达下调有关,推测是通过Bcl-2介导的途径促进细胞凋亡。图4表1参30     

姜黄素促进紫杉醇抑制肿瘤细胞的增殖

培养的人喉癌细胞 Hep‐2及肝癌细胞HepG‐2,分别用不同浓度姜黄素（CUR ,0～50μmol／L）和紫杉醇（PTX ,0～5 nmol／L ）单独处理或联合处理（5μmol／L CUR＋0．5 nmol／L PTX、10μmol／L CUR＋0．5 nmol／L PTX）．处理48 h后,用WST‐1细胞增殖试剂盒检测细胞增殖情况,再用结晶紫染色检测活细胞的密度,最后用Hoechst 33258凋亡染色试剂盒检测细胞凋亡情况．结果显示：姜黄素或紫杉醇单独处理对 Hep‐2细胞和 H epG‐2细胞的增殖均有抑制作用,并呈现出一定剂量效应关系;姜黄素与紫杉醇联合处理后细胞的增殖速率要比紫杉醇单独处理的明显降低;同时,姜黄素与紫杉醇联合处理后细胞的凋亡要比紫杉醇单独处理的更为明显．上述研究结果说明,姜黄素对紫杉醇抑制肿瘤细胞H ep‐2和H epG‐2的增殖有促进作用,并能促进紫杉醇诱导细胞的凋亡．     

靶向Livin反义核酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡并提高其对卡铂、表柔比星敏感性

目的:探讨靶向livin反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高卡铂、表柔比星的敏感性。方法:用靶向livin基因反义寡核苷酸(ASODN),随机寡核苷酸(random oligodeoxy-nucleotide,RODN)分别转HepG2细胞,流式细胞术碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期和凋亡情况;Hoechst 33258染色法检测靶向livin反义核酸作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;采用靶向livin反义核酸联合卡铂(CBP)、表柔比星(EPI),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用。结果:PI单染检测显示靶向livin反义核酸处理组S期细胞百分率明显增加,400 nmol/L浓度组为(37.2±1.6)%,存在S期细胞阻滞;不同浓度的livinASODN均可诱导HepG2细胞凋亡,并随着其浓度的增大而凋亡率增高,100 nmol/L、200 nmol/L、400 nmol/L凋亡细胞百分率分别为(13.2±1.7)%,(13.9±2.1)%和(18.9±1.4)%;靶向livin反义核酸作用后出现细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;100 nmol/L的靶向livin反义核酸与不同质量浓度的化疗药物(CBP,EPI)联合作用于HepG2细胞48 h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为3.61和9.57倍。结论:靶向livin反义核酸可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提高HepG2细胞对CBP,EPI的敏感性。     

异甘草素诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡的研究

为探讨异甘草素对小鼠黑色素瘤B16F0细胞诱导凋亡的影响。采用SRB法检测异甘草素对B16F0细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞致死率;吖啶橙/溴乙啶荧光染色法观察细胞凋亡形态;AO/EB和Hoechst 33258染色观察药物处理后细胞形态的变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染发检测细胞凋亡率;caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸蛋白酶-3的活性;QPCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2,Bcl-2相关X蛋白的m RNA表达。结果显示,异甘草素能有效抑制B16F0细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性,作用于B16F0细胞后呈现出明显的凋亡形态,同时随着异甘草素浓度的增加(0、24、45、65μg/m L),细胞凋亡率增加;caspase-9,caspase-3活性逐渐升高;Bax/Bcl-2比率上调(P0.05或P0.01)。由此可知,异甘草素能够显著诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

山奈酚抑制人胆囊癌细胞增殖及其对mTORC1通路的影响

目的:探讨山奈酚对人胆囊癌细胞(SGC-996细胞)增殖的影响及其机制.方法:采用浓度为0、25、50、75、100、125、150、175μmol/L的山奈酚干预SGC-996细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测SGC-996细胞的体外增殖能力;干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测P-S6K1及P-S6等哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)途径相关蛋白的表达.结果:干预24 h时,浓度为0～175μmol/L的山奈酚对SGC-996细胞增殖的抑制作用不明显;干预48 h时,浓度为75μmol/L及以上的山奈酚可明显抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05);干预72 h时,浓度为50μmol/L的山奈酚也可显著抑制SGC-996细胞的增殖(P0.05).浓度为100μmol/L山奈酚干预48 h,可显著诱导细胞凋亡(P0.05),显著降低P-S6K1和P-S6蛋白的表达水平(P0.05).结论:在一定浓度范围内,山奈酚随浓度的增加和时间的延长而明显抑制SGC-996细胞的增殖,并诱导其凋亡,而对细胞增殖的抑制作用可能是通过影响mTORC1信号通路实现的.     

枸杞叶中总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

研究枸杞叶中总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖抑制及其细胞凋亡的影响.用不同质量浓度的枸杞叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测HepG2细胞存活率,通过Hoechst33258染色法、AV/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,利用免疫细胞化学法、Western blot方法分析枸杞叶中总黄酮对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达的影响.结果表明,枸杞叶中总黄酮分别作用于人肝癌细胞HepG2 48,72h均可明显抑制其增殖,并呈现显著的时间、剂量依赖性.高质量浓度枸杞叶总黄酮作用人肝癌细胞HepG2 48h后,HepG2细胞呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率达67.3%.枸杞叶总黄酮作用于HepG2细胞一定时间后,可引起促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达上调.枸杞叶中总黄酮可明显抑制人肝癌细胞HepG2增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过有效上调促凋亡蛋白Bax,破坏细胞内稳态环境,继而激活凋亡蛋白Caspase-3,最终引发人肝癌细胞HepG2凋亡.     

莱菔硫烷通过线粒体诱导HepG-2细胞凋亡

探讨莱菔硫烷 (SFN)通过线粒体途径诱导HepG-2细胞凋亡的机制.不同剂量SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48 h,流式细胞仪检测SFN对HepG-2细胞凋亡率影响;采用Western Blot法测定SFN对HepG-2细胞Cyt-c蛋白表达的影响;酶活性检测试剂盒测定SFN对HepG-2细胞内caspase-3和caspase-9酶活性的影响.SFN能够有效地诱导HepG-2细胞凋亡,10、20、40 μmol/L的SFN 作用于HepG-2细胞48 h后,与对照组比较凋亡率显著升高(P<0.01),并呈剂量依赖性;SFN可使HepG-2细胞胞浆中Cyt-c蛋白含量升高,与对照组比较差异显著(P<0.05);同时使细胞内caspase-3和caspase-9的活性升高,并呈一定的剂量依赖性.SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞的凋亡,可通过促进Cyt-c的释放,进而激活caspase-9,再激活下游caspase-3,最终引起细胞凋亡.     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

壳聚糖酶产生菌筛选及产酶培养优化

以胶体壳聚糖为唯一碳源和DNS酶活鉴定法从烟台近海土壤中分离得到一株高产壳聚糖酶菌株,初步鉴定为白色链霉菌.经发酵培养组分与条件优化,获得最佳培养组分(g.L-1):葡萄糖55,壳聚糖0.5,胰蛋白胨1,尿素8,(NH4)2SO42,NH4Cl 1,KH2PO43,FeSO4·7H2O 1,ZnSO4·7H2O 2,CaCl2·6H2O2,MnSO4·H2O2,NaCl2.最适产酶pH 7.0,温度28℃,装液量50 mL,接种量2%.优化后菌株培养48 h时产酶量为51.65 U.mL-1.     

Na_5SeV_5O_(18)·3H_2O对K562细胞线粒体凋亡和NF-κB/IκBα信号转导途径的影响

通过MTT比色法和Western blot法检测Na5SeV5O18.3H2O的抗肿瘤活性及作用机理.结果表明,Na5SeV5O18.3H2O(0.625~20 mg.L-1)能抑制K562细胞增殖(p<0.05);药物处理K562细胞24 h,可使胞浆细胞色素C,IκBα含量明显增多,核内NF-κB含量减少.结果提示Na5SeV5O18.3H2O能体外抑制K562细胞增殖,其机理可能与线粒体凋亡和NF-κB/IκBα信号转导有关.     

Effects of hydrogen peroxide on in vitro infection of Cryptosporidium parvum

The effect of hydrogen peroxide (H2O2) on Cryptosporidium parvum infection and the protective function of free radical scavengers were studied in cultured bovine fallopian tubes epithelial cells. H2O2 treatment at 500 μmol/L and 1 mmol/L significantly inhibited excystation of bleach-treated oocysts (p ＜ 0. O1 ). At 48 h postinoculation,H2O2 at 500 and 750 μmol/L resulted in a significant (p ＜ 0.01) decrease of C. parvum infection by 35.77% and 58.16% respectively in the cultured cells, when compared with the untreated control. Surprisingly, the infection was significantly increased from 22.21% to 39.33 % ( p ＜ 0.05) with lower concentration of H2 O2 (50 ～ 200 μmol/L). The inhibitory and stimulatory effects of H2O2 treatment on C. parvum infection were, to a certain extent, abolished in the presence of reduced glutathione or mannitol. These observations indicate that reactive oxygen species, such as H2O2, may play an important role in C. parvum infection.     

抗生素对小麦根际优势微生物生长的影响

研究了小麦根际6株优势菌,包括4株细菌(B1,B2,B3,B4)和2株放线菌(F1,F2)对常用饲料用抗生素金霉素(CTC)和青霉素(PNC)的敏感性.在两种抗生素浓度分别为0μg.L-1,10μg.L-1,100μg.L-1,500μg.L-1,1 000μg.L-1的液体培养基中,6株菌的生长情况有较大差异:其中B1和F1在1 000μg.L-1的金霉素浓度下能正常生长,而B4和F2分别在100μg.L-1和500μg.L-1的金霉素浓度下生长完全受到抑制;另外,B3在1 000μg.L-1青霉素浓度下生长情况良好,而F1,F2和B4在青霉素环境中的生长受到明显抑制.     

大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化

目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将0.75μL和1.5μL的脂质体LipofectamineTM3000分别与20、40、60、80nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60nmol/L,脂质体为1.5μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5μL LipofectamineTM3000与60nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

长链非编码 RNA H19 在多发性骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用研究

摘要:目的 探讨长链非编码 RNA H19( lncRNA H19)在多发性骨髓瘤( multiple myeloma, MM)硼替佐米耐药中的作用。 方法 选取我院 2017 年 2 月― 2018 年 12 月治疗的初诊 MM 患者 26 例、硼替佐米化疗缓解 MM 患者 25 例及硼替佐米化疗后耐 药 复 发 MM 患 者 22 例。 siRNA-H19 和 慢 病 毒 转 染 人 多 发 性 骨 髓 瘤 OPM2 细 胞。 荧 光 定 量Real-time PCR 检测 lncRNA H19 表达。 CCK-8 细胞活力检测 OPM2 细胞对硼替佐米敏感性。 结果 对照组、初诊MM 组、缓解 MM 组和耐药 MM 组 lncRNA H19 的 2^{-△ △ Ct} 值分别为(0.107±0. 032) 、(0. 324±0. 067) 、(0. 218±0. 042)和(0. 486± 0. 095 ) , 各 组 间 具 有 显 著 性 差 异 ( P < 0. 01 ) 。 其 中, 初 诊 MM 组 显 著 高 于 对 照 组 和 缓 解 MM 组( P<0. 01) ,耐药 MM 组又显著高于初诊 MM 组( P< 0. 01) 。 对照组、OPM2 / si-H19 组、OPM2 / NC 组、OPM2 / H19 组和 OPM2 / Blank 组 细 胞 的 IC₅₀ 值 分 别 为 ( 17. 86 ± 1. 64 ) nmol / L、 ( 6. 83 ± 1. 05 ) nmol / L、 ( 18. 04 ± 1. 72 ) nmol / L、(31. 14±3. 57) nmol / L 和 ( 17. 75 ± 1. 68) nmol / L。 其 中, 对 照 组、 OPM2 / NC 组 和 OPM2 / Blank 组 无 显 著 性 差 异( P>0. 05) ,OPM2 / si-H19 组硼替佐米 IC50 值显著低于对照组( P<0. 01) ,OPM2 / H19 组硼替佐米 IC₅₀ 值显著高于对照组( P<0. 01) 。 结论 MM 患者 lncRNA H19 显著升高,高表达 lncRNA H19 可能参与了硼替佐米耐药过程。     

乙草胺对泥鳅肝脏组织超氧化物歧化酶活性的影响

为探讨低毒除草剂对水生生物的危害,用急性染毒法研究了0．125,0．250,0．500,1．000,2．000μL／L5个浓度组的乙草胺处理液在24,48,96h对泥鳅肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响．结果表明,在24和48h,处理液对泥鳅的半数致死浓度分别为4．7和4．4μL／L．不同浓度的乙草胺处理对泥鳅肝脏中SOD活性都具有诱导作用,因此可以用泥鳅肝脏中SOD活性变化作为水环境监测的生物学指标来评价水生生物的生态环境．     

甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用

研究甜菜碱对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用.应用MTT法观察体外甜菜碱在不同浓度、不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,应用流式细胞仪（FCM）测小鼠脾淋巴细胞在不同时间周期的变化.结果表明,甜菜碱终浓度0.4、4、20 mmol/L均可促淋巴细胞增值,但终浓度4 mmol/L效果最为明显,在甜菜碱刺激24、48、72 h后,淋巴细胞均可显著增值,但随时间的加倍,增值幅度并不明显,综合考虑,24 h效果更好.终浓度4 mmol/L甜菜碱不同时间均可促进淋巴细胞由G0/G1期进入S期,且作用18 h效果最明显,其G0/G1期由97.03%下降到89.99%,S期由2.58%升高到9.08%.到24 h后,其诱导作用反而有些下降.因此,甜菜碱4 mmol/L作用24 h促淋巴细胞增殖最为理想.4 mmol/L的甜菜碱18 h促进淋巴细胞由G0/G1期进入S期的作用效果最好.