抗体亲和肽配基的高通量筛选和理性设计

抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白,在疾病治疗和检测方面应用前景广阔.目前抗体的分离纯化是其生产的瓶颈.高选择性的亲和色谱技术在抗体纯化过程中发挥着越来越重要的作用,而配基的高通量筛选和设计是亲和色谱技术应用的关键因素.短肽是一种常见的亲和配基类型.本文根据近年来国内外抗体亲和肽配基的研究情况,综述了抗体亲和肽配基的高通量筛选和理性设计方法,重点介绍其作用机理、发展现状以及目前存在的主要问题.最后展望了短肽配基仿生设计技术.     

蛋白质芯片——蛋白质高表达及固定技术研究进展

就近年来国际上蛋白质芯片的高通量蛋白质生产及固定技术的研究进展进行了系统的总结和分析。蛋白质芯片是一种大规模、高通量的蛋白质组学研究技术,目前己广泛运用于基础研究(如蛋白质/蛋白质相互作用)和应用研究(如病理诊断,药物开发),而该技术的关键步骤是实现蛋白质高表达及固定。及时把握蛋白质高表达及固定技术的研究动向是开展蛋白质芯片研究的基础。     

藻红蓝蛋白连接/异构酶重组体系

把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A，E和F基因分别克隆在表达载体pET30中，转入大肠杆菌表达了相应蛋白质，利用pET3载体表达的蛋白质具有6个连续组氨酸亲和标记，用Ni^2 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质，用这些纯化的蛋白质建立了藻红蓝蛋白α亚基体外重组系统，从而证明藻红蓝蛋白操作子E和F基因编码层鞭枝藻红蓝蛋白为连接／异构酶。     

新型仿生亲和介质纯化工艺生产效率分析

抗体的捕获层析的成本在整个抗体纯化工艺中占有相当的比例.分析比较了新型小分子仿生亲和介质和常规蛋白A的动态载量、循环使用次数和线性流速等参数,并计算了相应的生产效率,发现新型小分子仿生亲和介质最高生产效率能达到蛋白A亲和层析介质最高生产效率的3⁶.9倍.     

植物半胱氨酸可逆氧化修饰蛋白质组学技术研究进展

活性氧(ROS)介导的蛋白质半胱氨酸(Cys)可逆氧化修饰对于调控植物发育和逆境应答过程具有重要意义.近年来新发展起来的高通量氧化还原蛋白质组学技术包括:基于荧光素、生物素-巯基特异性试剂、同位素亲和标签(ICAT)、巯基特异性串联质量标签(CysTMT/iodoTMT),以及iodoTMT与同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)试剂联用等标记技术.这些技术的发展完善为系统研究植物蛋白质氧化还原修饰提供了重要手段.综述了植物Cys可逆氧化修饰蛋白质组学技术的研究进展.     

壳聚糖-聚醚共混超滤膜的制备与性能

研究了壳聚糖与聚醚共混超滤膜的制备工艺,探索了该超滤膜对发酵产物十二烷基二元酸中蛋白南的分离性能。实验表明,壳聚糖－聚醚共混超滤膜可用作蛋白质亲和分离膜,当膜孔径在１０～５０ｎｍ之间时,对二元酸中蛋白质的截留率大于９５％。     

麻疯树逆境蛋白(curcin 2)基因的原核表达

将编码麻疯树逆境蛋白curcin 2成熟蛋白的M片段和编码前体蛋白的P片段分别定向克隆到质粒载体pQE-30、pQE-31后,获得重组质粒pQE-30-M、pQE-31-P.该重组质粒转化大肠杆菌M15菌株,经IPTG诱导后M片段表达的蛋白质主要以包涵体形式存在,蛋白质的表达量与IPTG浓度及诱导时间有关.重组蛋白可与RGS-His抗体及curcin抗体分别发生专一性抗原抗体反应并被His TrapTMHP柱亲和纯化.体外抗真菌活性实验表明,复性处理后的curcin 2融合蛋白使玉米弯胞杆菌[Curvul     

生物芯片研究现状及应用前景

生物芯片(Biochip)是以预先设计的方式将大量的生物讯息密码(寡核苷酸、cDNA、基因组DNA、蛋白质等)固定在玻片、硅片等固相载体上组成的密集分子阵列,可分为基因芯片、蛋白质芯片、芯片实验室三类。生物芯片技术的本质是生物信号的平行分析,它利用核酸分子杂交、蛋白分子亲和原理,通过荧光标记技术检测杂交或亲和与否,再经过计算机分析处理可迅速获得所需信息。在医学、分子生物学等领域,生物芯片技术以其高效、高信息量的优势,显现出巨大的应用价值和商业市场,其发展前景非常乐观。     

基于8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐的糖基化蛋白质标记方法

发展了基于荧光试剂8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐(ANTS)的糖基化蛋白质选择性标记和荧光检测的新方法.实验中以标准蛋白质细胞色素c和核糖核酸酶b为样品,优化了pH和反应时间.在优化的条件下,核糖核酸酶b的检测灵敏度可提高22倍,而非特异性的标记仅为1％,显示了这种衍生方法极好的选择性.进一步将该方法应用于卵清蛋白的衍生,通过结合二氧化钛(TiO2)亲和富集,共鉴定到14个蛋白质,其中超过85％的蛋白质具有一致的N-X-T/S(X为除脯氨酸以外的其他氨基酸)序列,为潜在的糖基化蛋白,进一步验证了该方法的高选择性.     

蛋白质芯片技术的研究及应用现状

蛋白质芯片技术是采用微阵列方法 ,对样品蛋白进行高通量、髙灵敏度、高特异性的分析技术,作为一种新的技术,日益受到人们的关注.它不仅是蛋白质组学研究中强有力的工具,也是临床应用中疾病早期诊断、预后和治疗效果评测的新手段,其研究成果拓宽了与人类健康更加贴近的应用领域.就蛋白质芯片的原理、分类、制备过程、在疾病诊断中的应用、优缺点和发展前景进行了阐述.