用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马…

利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３＇端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行＾３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶ ＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测。结果表明，＾３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高。可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低     

马铃薯卷叶病毒中国分离株外壳蛋白基因及其上游先导序列的cDNA克隆和序列分析

按照马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）核苷酸序列，针对ＣＰ基因及其上游基因间隔区全长约０．８ｋｂ的区段设计合成两个特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ＣＤＮＡ第一条链，再经ＰＣＲ扩增合成ｃＤＮＡ，将ＣＤＮＡ克隆于ｐＵＣ１９质粒．限制性酶切分析和核苷酸序列测定表明克隆的ＰＬＲＶ－Ｃｈ外壳蛋白（ＣＰ）基因及其上游基因间隔区的全长ＣＤＮＡ共８２４个核苷酸，与国外报道的４个ＰＬＲＶ分离株的核苷梳序列相比具有高度同源性．ＰＬＲＶ的外壳蛋白基因序列与其上游基因间隔区相比保守性更强．     

用长臂光敏生物素标记的cDNA探针核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒

用长臂光敏生物素标记含有马铃薯纺锤块茎类病毒（Ｐｏｔａｔｏｓｐｉｎｄｌｅｔｕｂｅｒｖｉｒｏｉｄ，ＰＳＴＶｄ）双拷贝ｃＤＮＡ的重组质粒ｐＳＴ－Ｂ１４，制备成光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针，用核酸斑点杂交检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片和块茎提取物均出现较强的阳性杂交信号，而健康马铃薯为阴性．试验结果表明：光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最高稀释度为１１２８     

利用叶圆片法获得CMV_（CP）转基因烟草植株

利用叶圆片法得到ＣＭＶＣＰ转基因烟草植株ＤＮＡ，ＲＮＡ与ＣＭＶＣＰ放射性标记探针点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交的结果表明：ＣＭＶＣＰ基固可整合到烟草转基固株并且表达．叶面病毒接种后，转基因植株对ＣＭＶ病毒具有高抗性．     

侵染马铃薯的一种短杆状病毒的分离鉴定

从马铃薯“紫花白”叶片中分离到一种短杆状病毒,病毒粒体直径为１９±１．９ｎｍ,长度在１８０～２２０ｎｍ之间,ＯＤ２６０／２８０比值为１．２３,病毒核酸为ｓｓＲＮＡ,单一组分．用提纯的病毒免疫家兔,制备抗血清,微量沉淀法表明此病毒与ＰＬＲＶ,ＰＶＸ,ＰＶＹ,ＰＶＳ,ＴＭＶ均无血清学关系．病毒分离物可摩擦接种茄科,苋科、藜科植物,并在不同指示植物上引起不同的症状,但只在普通烟上产生系统感染．电镜观察和ＤＡＳ－ＥＬＬＳＡ检测证实此病毒可摩擦回接马铃薯“紫花白”,但不引起明显症状．病毒的稀释限点为１０－４～１０－５,体外存活期为６ｄ,致死温度为８０～８５℃．与目前已报道的侵染马铃薯的各种杆状ＲＮＡ病毒比较分析证明,此病毒是侵染马铃薯的一种新病毒,命名为马铃薯短杆状病毒（Ｐｏｔａｔｏｒｏｄ－ｓｈａｐｅｄＶｉｒｕｓ,ＰＲＶ）．     

针对马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的突变酶的克？…

根据特异性切割马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的锤头状核酶，设计、合成了编码与其相应的突变核酶的ｃＤＮＡ，并克隆到质粒ｐＧＥＭ－４Ｚ中，经序列分析及体外转录表明得到寒带的突变核酶基因重组质粒，从而为突变核酶的转基因及进上频琛麦在转基因马铃薯中表达引韦的抗性及机理创造的条件。     

应用Digoxigenin标记的cDNA探针检测香蕉束顶病毒

用非放射性的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ，标记克隆的ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂｃＤＮＡ，制备成探针．通过核酸斑点杂交对粗提取的ＢＢＴＶ，ＢＢＴＶ－ＤＮＡ，感染ＢＢＴＶ的香蕉植物的拟茎，球茎处的组织，新生叶片以及成熟后的叶片进行了检测．结果表明：ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１ｃＤＮＡ探针特异性强，不与ＣＭＶ—ＲＮＡ、无毒香蕉组培苗提取的核酸发生杂交反应；仅与粗提ＢＢＴＶ、ＢＢＴＶ－ＤＮＡ、ＢＢＴＶ侵染的香蕉组织的核酸提取物发生杂交反应．此探针灵敏度高，可检出含有ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂ的质粒ＤＮＡ的最小量为１０ｐｇ；测定感病香蕉植株的拟茎汁液的最高稀释度可达１∶１２８，相当于０．４ｍｇ病蕉组织中的病毒含量．测定同一病株不同部位的结果表明，ＢＢＴＶ在植物体内的分布不均匀，拟茎处组织中病毒含量最高，球茎处的组织以及新生叶片中的病毒含量次之，成熟后的叶片中的病毒含量最低     

Detection of PSTVd with a New Nonradioactive Method──Digoxigenin Labeled cDNA Probe

使用非放射性标记ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ进行核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰＳＴＶｄ）．结果表明，ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记具有灵敏度高，操作简单快捷，无放射性污染等优点．可检出含有ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最大稀释度及含有ＰＳＴＶｄ全序列的质粒ＤＮＡ的最小量分别为１３００和１０ｐｇ．同时该探针也用于检测了不同马铃薯品种及ＴＰＳ亲本中的ＰＳＴＶｄ感染情况，结果显示，其中一些品种及ＴＰＳ亲本已不同程度的被ＰＳＴＶｄ感染．     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征, 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ, 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ , 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段, 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ , 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 该病毒株为一种新型的蜜蜂囊状幼虫病病毒株     

马铃薯野生种和原始栽培种在现代马铃薯育种利用的研究进展

近１０年国外对马铃薯野生种和原始栽培种起源及育种利用研究取得了实质性进展．野生种Ｓｏｌａｎｕｍｄｅｍｉｓｓｕｍ、Ｓ．ａｃａｕｌｅ、Ｓ．ｃｈａｃｏｅｎｓｅ、Ｓ．ｓｐｅｇａｚｚｉｎｉｉ、Ｓ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒｕｍ、Ｓ．ｖｅｒｎｅｉ和原始栽培种Ｓ．ｐｈｕｒｅｊａ、Ｓ．ｓｔｅｎｏｔｏｍｕｍ、Ｓ．×ｃｈａｕｃｈａ均分离出极端抗线虫（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａｐａｌｌｉｄａ）、抗干腐病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、抗青枯病（Ｐｓｅｕ－ｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、抗晚疫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｉｎｆｅｓｔａｎｓ）及抗Ｘ、Ｙ、Ｌ病毒的类型．目前，世界上５０％马铃薯品种含有Ｓ．ｄｅｍｉｓｓｕｍ血缘．     

马铃薯育性和非育性、倍数性和杂种优势研究概况

世界各国近１０年的马铃薯育性和非育性、二倍体和四倍体、杂种优势现象研究取得实质性进展，本文对这些研究进行评述。     

马铃薯淀粉的综合开发利用

论述了马铃薯及马铃薯淀粉的生产概况、马铃薯淀粉的特性及在食品中的应用状况,并简要概述了马铃薯变性淀粉的特性.讨论了我国马铃薯淀粉行业的发展前景.     

马铃薯双单倍体及在育种中应用研究进展

用大量资料论述了马铃薯双单倍体、四倍体再合成、２ｎ配子在育种中应用研究进展概况．并论述了近１０年２ｎ配子育种成就．     

马铃薯专性寄生真菌内生集壶菌的研究进展

内生集壶菌是引起马铃薯癌肿病的一种低等专性寄生真菌。本文首先对国内外马铃薯癌肿病病原菌的分布及危害、生物学特征、致病型及检测、分子生物学研究现状、病害防控等方面的研究进行了综述。针对该病菌是专性寄生真菌,至今仍未见全基因组序列的报道,提出加紧研究不同发生地病原菌的基因组序列,了解基因组序列差异及其与抗病马铃薯品种间的关系的展望,这将有利于推动马铃薯癌肿病抗性基因研究及相关育种工作的开展,为马铃薯癌肿病的发生防患于未然。     

马铃薯和甘薯营养改良基因工程的研究进展

概述基因工程在马铃薯和甘薯的淀粉、 氨基酸、蛋白质及风味等营养品质的遗传改良方面的最新研究进展,并提出该研究领域存在的问题及应采取的对策。     

马铃薯脱毒种薯的工厂化生产研究

以马铃薯的茎尖为外殖体，经脱毒处理，并检测无病毒的苗进行快速繁殖，生产种薯，组培生产的培养基分别为：（1）茎尖培养基：MS＋GA30.1mg/L 6-BA0.5mg/L NAA0.01mg/L；（2）壮苗培养基：MS＋B90.8g/L。     

马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究

运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术.     

悬浮液技术--FAAS法测定甘薯及马铃薯中钙镁

用悬浮液技术处理样品制成琼脂悬浮液,以火焰原子吸收法成功地测定了甘薯及马铃薯中钙、镁.用La3+作为释放剂以消除化学干扰.通过在样品悬浮液及与空白溶液中加入适量琼脂溶液,可配制成与试液粘度一致的参比溶液.对背景吸收干扰、检出限及特征浓度进行了考察.测定结果的相对标准偏差小于2.3%,测定结果与灰化法一致,相对误差小于±2.1%.