重庆西南医院骨科感染金黄色葡萄球菌的分子分型及耐药性研究

目的:了解骨科感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率,分析其分型特点和耐药特征,为临床治疗和流行病学研究提供依据.方法:从重庆西南医院骨科患者送检标本中分离出162株金黄色葡萄球菌,以mec A-fem B双重聚合酶链式反应(PCR)鉴定MRSA,应用葡萄球菌染色体mec耐药盒(SCCmec)对金黄色葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型、多位点序列分型(MLST)方法确定菌株序列型别,并检测所有菌株对青霉素、苯唑西林、庆大霉素、利福平及四环素等13种抗菌药物的耐药情况.结果:162株金葡菌中共检出34株MRSA(20.99%),包括SCCmecⅠ型16株,SCCmecⅣ型17株,SCCmecⅤ型1株,未检测到SCCmecⅡ、Ⅲ型.spa及MLST分型结果显示,所有MRSA菌株共分为14个spa型,9个ST型.药敏试验显示菌株多重耐药现象较少,未发现耐万古霉素的MRSA.结论:西南医院骨科MRSA主要为SCCmecⅠ、Ⅳ型,ST59-MRSA-Ⅳ-t437为主要流行克隆,其对克林霉素、红霉素耐药率较高.     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。     

520株金黄色葡萄球菌的耐药性变迁与分析

采用K—B法进行药敏实验并用琼脂扩散法对苯唑西林耐药的菌株做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)测定,对2000-2004年韶关市铁路医院临床检出的520株金黄色葡萄球菌进行耐药性变迁情况的分析.结果表明:测定菌株对β-内酰胺类和氟喹诺酮类抗菌药的耐药性总体上呈逐年上升趋势,对氨基糖苷类则有下降趋势,对苯唑西林耐药率逐年增高,出现耐万古霉素的菌株,提示临床医生在治疗金黄色葡萄球菌引起的感染中,应根据不同感染情况参考耐药性监测选用适宜的抗菌药.     

某院金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)在医院的临床分布特征及耐药情况,该文以四川某医院2018年收集的539株S.aureus为研究对象,采用微量肉汤稀释法测定其对15种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),并用统计学方法进行分析。结果显示,539株S.aureus中有142株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA);MRSA主要分布于皮肤性病科(30株,21.1%);S.aureus对青霉素、红霉素、克林霉素耐药率较高,分别为96.10%、63.50%、60.30%,但对利奈唑胺、万古霉素等敏感;MRSA菌株对苯唑西林、青霉素、红霉素等的耐药率均明显高于甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)菌株;在预防和治疗S.aureus感染时,需根据药敏实验合理选择使用抗菌药物。     

276例临床分离金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的 分析住院患者金黄色葡萄球菌的耐药特点,为临床合理用药提供依据.方法 细菌鉴定应用VITEK32全自动微生物分析鉴定系统,采用K-B法对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株进行药物敏感性试验;头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA.结果 276株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 165株占59.8％;金黄色葡萄球菌(MSSA) 111株,占40.2％.MRSA对青霉素G、氨苄西林100％耐药;对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁100％敏感;对氯霉素、呋喃妥因、利福平耐药率分别为9.1％、15.2％、17％;其他耐药率都在60％以上.MRSA的耐药率明显高于MSSA,且呈逐年上升趋势.结论 金黄色葡萄球菌对多种抗菌药均具有较高的耐药性,临床应根据药敏结果确定患者的治疗方案.糖肽类抗生素(万古霉素、替考拉宁)可作为MRSA重症感染患者的首选药物.     

秦皇岛地区貂源肠外致病性大肠杆菌四环素类耐药表型与基因型相关性分析

为分析秦皇岛地区貂源肠外致病性大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因之间关系,对秦皇岛地区分离的20株貂源肠外致病性大肠杆菌采用K-B药敏纸片法,选择常见的3种四环素类药物进行耐药性的检测,并通过PCR扩增对其耐药基因进行判定。结果表明:20株肠外致病性大肠杆菌中,多重耐药菌株占75%,多重耐药基因的菌株占100%,耐药基因检出和耐药性结果比较表明,四环素、强力霉素、土霉素对5种耐药基因的符合率在88.89%～100%之间。     

成都地区骨科患者伤口金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学及耐药性分析

目的:分析四川成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌的分子流行病学特征与耐药现状.方法:收集2016年9月至2019年9月成都地区西部战区总医院骨科分离自伤口分泌物的金黄色葡萄球菌,进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定及其SCCmec分型、各菌株MLST分型和spa分型.聚合酶链式反应(PCR)检测20种金黄色葡萄球菌常见毒力因子,并对12种常用抗菌药物进行药敏分析.所有结果同时进行MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间的比较.结果:195株细菌MRSA检出率为21.0%,MRSA以SCCmecⅠ(41.5%)、Ⅳ(36.6%)型为主, MLST型别主要为ST59 (58.5%)和ST630 (17.1%),spa型别主要为t437 (43.9%);MSSA的MLST主要型别为ST188 (22.1%)和ST6 (13.6%),spa型别主要为t189 (19.5%)和t701 (10.4%).MRSA菌株hlb(P0.01)和seb(P0.01)基因携带率较高,而cna(P0.01)和ebpS(P0.05)基因携带率较低,且这一结果与分子分型相关.耐药分析提示某些抗生素可在经验性抗金黄色葡萄球菌中优先选择.结论:成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌主要为ST59/ST630-t437-MRSA-SCCmecⅠ/Ⅳ和ST188-t189-MSSA.分子分型结果与毒力因子携带情况密切相关,本研究结果对本地区抗菌策略的制定有一定参考作用.     

秦皇岛地区狐源致病性E.coli对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测

为了确定秦皇岛地区狐源大肠杆菌(E.coli)对四环素类药物的耐药性和耐药基因分布,采用常规的鉴定方法,从不同养狐场送检的腹泻的狐狸体内分离鉴定出20株E.coli。致病性试验表明,该菌为致病性E.coli。药敏试验结果表明:分离菌株对四环素和强力霉素药率分别达到95%和90%。通过PCR方法检测分离菌株四环素类药物的耐药基因,结果显示,tet A和tet B基因的检出率分别为100%和95%。本研究为秦皇岛地区防治狐源致病性大肠杆菌病提供实验基础。     

我院血流感染的细菌分布及耐药性分析

为了解血流感染的分离菌对常用抗菌药物的敏感性和耐药性。收集酒泉市第二人民医院2017-2019年的血培养分离菌株,采用自动化仪器法或纸片扩散法(K-B法)进行细菌药物敏感性试验,按照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)2017年版标准判断结果,使用WHONET5.6软件进行数据统计分析。共分离细菌280株,其中革兰阳性菌80株,占28.6%,革兰阴性菌200株,占71.4%。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株的(MRSA和MRCNS)检出率分别为13.0%和78.6%,未发现万古霉、素替考拉宁及利奈唑胺耐药菌株。肠杆菌科细菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、阿米卡星的耐药率较低,未发现亚胺培南、美罗培南耐药菌株。酒泉市血流感染的分离菌以革兰阴性菌为主,耐药趋势不容忽视,应加强抗菌药物合理应用及院内感染防控措施,微生物实验室应加强细菌耐药监测工作,及时向临床通报检验结果。     

耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价

目的评价三种方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性.方法根据NCCLS的判定标准,采用mecA基因PCR扩增法检测临床分离的85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌,并与苯唑西林琼脂稀释法和头孢西丁纸片扩散法进行比较.结果苯唑西林琼脂稀释法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别93.75%(95.35%)、95.24%(54.05%);头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别为98.43%(95.35%、)、90.48%(64.86%).结论对于MRSA的检测,选用PCR扩增法,该法具有快速、灵敏和特异性强的特点,且纸片法与PCR扩增法检测结果符合率很高;对于MRCNS的检测,通过表型法筛选后,最好能得到mecA基因的确证.     

苯唑西林和万古霉素对金葡菌的抑菌圈直径和最低抑菌浓度的关系

目的分析苯唑西林和万古霉素对金黄色葡萄球菌的纸片扩散法抑菌圈直径和E-test法最低抑菌浓度间的关系。方法用纸片扩散法检测苯唑西林和万古霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径,用E-test法检测最低抑菌浓度(M IC)。结果纸片扩散法和E-test法检测金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性,敏感率分别为85.0%和86.5%,中介率分别为2.3%和3.0%,耐药率分别是12.7%和10.5%,个别经K irby-Bauer法判定的中介株或耐药株经E-test法M IC证实为敏感或中介株;所有的菌株都对万古霉素的敏感,其中抑菌圈直径≥15 mm的菌株占91.7%。结论用K irby-Bauer法和E-test法检测金黄色葡萄球菌对万古霉素和苯唑西林的敏感性,其药敏结果基本一致,但纸片扩散法结果处折点值附近或万古霉素对菌株的抑菌圈低于超出敏感值下限时,应测量相应抗生素的最低抑菌浓度。     

84株支原体耐药情况分析

目的:了解支原体对抗茵药物的耐药性。方法:从慢性生殖系统感染患者的分泌物中检出解脲支原体(UU)56株,人型支原体(MH)28株,对强力霉素、氧氟沙星、阿奇霉素、壮观霉素等十种抗生素的耐药性进行监测。结果:UU对司帕沙星的耐药性最高为64.3%,对氧氟沙星的耐药性最低为35.7%,56株UU有九种耐药类型,最高型为九耐占5.3%,最多的耐药型为六耐占21.4%;MH对强力霉素、美满霉素耐药性最高分别为89.3%、67.8%,对壮观霉素的耐药性最低占17.8%。28株MH有六种耐药类型,最高耐药型为八耐占14.3%,最多的耐药型为三耐占28.6%。结论:支原体耐药性和耐药类型多样化,有不断增加的趋势,进行支原体药敏试验,有目的地选择治疗药物和规范治疗方案是减少支原体耐药性和耐药类型多样化产生的重要手段。     

多重耐药UPEC细菌毒力基因分布特征及进化分型分析

本研究对临床尿路感染病例病原菌耐药情况、毒力基因分布及其进化分型特征,以期为耐药性尿路感染病原防控提供参考。通过对收集的尿样进行细菌分离培养,结合革兰氏染色镜检、16S rDNA对细菌进行鉴定,利用K-B纸片扩散法对细菌进行药敏试验,并通过PCR扩增进行毒力基因及系统发育和进化分型分析。本研究成功检测出20株尿路致病性大肠杆菌（Uropathogenic Escherichia coli, UPEC）,药敏试验显示多数菌株具有多重耐药特征,该批UPEC对青霉素、红霉素、万古霉素耐药率达100%;对羧苄西林、氨苄西林、阿奇霉素耐药率达90%以上;对四环素、诺氟沙星、链霉素、耐药率达80%以上;对环丙沙星、 庆大霉素、卡那霉素、氟氧沙星、头孢曲松耐药率达70%以上;对头孢噻肟、呋喃妥因、氯霉素耐药率在35%以上;对阿莫西林与多粘菌素B耐药率低,分别仅为10%与5%。六个毒力基因（iutA、fimH、hly、fyuA、tsh、traT）检出率分别为85%、95%、85%、75%、25%、10%。其系统发育分型中,归属B2群的细菌最多,占比40%（n=8）;D群次之,占比35%(n=7);其次为A群,占比25%（n=5）;未检测到B1群菌株。通过MLST分型分析,20株大肠杆菌涉及10个ST型,其中ST131、ST648、ST744、ST1193型别较多。CRISPR序列扩增结果显示其中6株细菌含有CRISPR序列,提示不同菌株的进化差异。本研究通过对临床多重耐药UPEC进行毒力和分型特征分析,为临床有效防控耐药菌导致的尿路感染提供重要依据。     

结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药性的检测及耐药基因突变位点分析

为检测结核分枝杆菌链霉素(streptomycin,SM)耐药性,分析耐药基因突变,探讨DNA测序分析技术在结核分枝杆菌链霉素耐药性检测中的应用价值。采用方法:1、用传统的比例法药敏试验对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测。2、用DNA测序分析技术对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药相关基因Rpsl和rrs的突变位点分析,筛查耐药相关突变位点。3、探讨DNA测序分析技术对结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测的效率。结果:1、传统比例法药敏试验结果显示,49株实验菌株中16株为链霉素耐药株,33株为链霉素敏感株。2、Rpsl基因DNA测序。结果显示:Rpsl基因只存在一个突变位点,为第43位密码子AAG的突变,突变形式为AAG→AGG,氨基酸由赖氨酸(Lys)变为精氨酸(Arg)。rrs基因DNA测序结果发现:rrs基因共存在5个突变位点,分别为第513位碱基A突变为G、第523位碱基A缺失、第598位碱基A突变为G、第599位碱基A缺失、第612位碱基A缺失,其中第513位碱基突变只存在于链霉素耐药株中,其余4个突变位点在耐药株和敏感株中均存在。即初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。3、分析Rpsl基因和rrs基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性之间的关系,结果显示:16株链霉素耐药株中13株存在Rpsl基因第43位密码子的突变,1株存在rrs基因第513位碱基的突变。以传统的比例法药敏结果为参照,以DNA测序分析Rpsl基因或rrs基因发现Ppsl基因发生第43位密码子或rrs基因第513位碱基突变为判断菌株耐药的标准,DNA测序分析技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性检测的敏感性为87.5%,特异性为96.97%。由此可知,初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。用DNA测序分析结核分枝杆菌Rpsl基因和rrs基因链霉素耐药相关突变,判断结核杆菌链霉素耐药性具有较好的灵敏度和特异性,耗时短,在链霉素耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。     

肠球菌临床耐药性分析及耐药基因vanM在屎肠球菌中的检测

目的了解肠球菌临床分离株耐药性及vanM基因在屎肠球菌的分布情况,为临床合理用药及探讨耐药机制提供依据.方法采用VITEK60全自动微生物分析仪对肠球菌进行鉴定及药敏试验,按NCCLS/CLSI标准判断并统计分析结果;PCR法检测耐万古霉素、替考拉宁菌株中的耐药基因vanM,并对阳性基因进行测序,分析耐药基因与耐药性的关系.结果临床分离肠球菌共506株,其中屎肠球菌277株,粪肠球菌229株.尿液标本来源比例最高,为167株（33%）;粪便标本114株（22.5%）;痰液标本78株（15.4%）;胆汁标本57株（11.3%）;脓液标本54株（10.7%）;其他来源36株（7.1%）.药敏结果显示：肠球菌对大部分临床抗菌药高度耐药,屎肠球菌对β-内酰胺类抗菌药物（氨苄西林）、喹诺酮类（左氧氟沙星）、糖肽类（万古霉素、替考拉宁）的耐药率明显高于粪肠球菌（P〈0.05）.vanM基因在耐万古霉素菌株中的检出率为100%,耐替考拉宁菌株检出率为90%.结论屎肠球菌可引起临床各类感染,屎肠球菌对大多数抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌,且呈多重耐药趋势.vanM基因可能在糖肽类药物万古霉素、替考拉宁耐药机制中发挥重要作用.     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带金属酶与整合酶基因特征及同源性分析

目的了解吉林地区多重耐药鲍曼不动杆菌(Multidrug-resistant Acinetobacter baumanni,MDRAB)金属酶与整合酶基因的类型,并对菌株进行同源性分析.方法收集吉林地区2所三级甲等医院临床标本分离鉴定的鲍曼不动杆菌38株.多重耐药株携带金属酶的初筛实验-双纸片协同试验:金属酶与整合酶基因的检测-聚合酶链反应(PCR),并对其进行同源性分析.结果在所有MDRAB菌株亚胺培南-EDTA协同试验中,15株(39.4%)阳性,16株(42.1%)携带整合酶基因Ⅰ,2株(5.2%)携带整合酶基因Ⅱ,2株(5.2%)携带blaVIM型金属酶基因,1株(2.6%)携带blaNDM-1型金属酶基因,未检测出金属酶基因blaIMP,blaSIM-1和整合酶基因Ⅲ.结论该地区临床分离的MDRAB耐药率高,可能与其携带金属酶基因和整合酶基因有关,A型MDRAB为医院感染主要流行株.     

患病牦牛源沙门氏菌对氟喹诺酮类、氨基糖苷类和β-内酰胺类药物敏感性试验

采用K-B纸片扩散法对分离的36株牦牛源沙门氏菌进行氟喹诺酮类、氨基糖苷类和β-内酰胺类药物药敏试验,试验数据采用Whonet5.4软件统计以分析沙门氏菌分离率和耐药谱型.实验结果表明36株沙门氏菌对阿莫西林、庆大霉素和左旋氧氟沙星的耐药性比较强,耐药率分别为100%、27.78%和25%,其他13种药物的耐药率均在15%以下,其药表型菌株比较分散.     

动物源大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素耐药关系研究

为检测动物源性大肠杆菌染色体ampC基因突变与头孢菌素类药物耐药性的关系,选取22株头孢菌素类药物耐药菌作为受试菌株,采用K-B纸片法测定了其对7种头孢菌素的敏感性,采用PCR测序的方法进行受试菌染色体ampC基因调控区和部分编码区碱基突变分析.结果表明:受试菌对7种头孢菌素的耐药率均在50%以上,20株受试菌ampC基因调控区和部分编码区碱基发生了突变,占90.9%;共有10种突变组合,突变频率最高的为+185,+58,+122,+126,-88,-82,-18,-1位.ampC基因调控区和部分编码区碱基突变与β-内酰胺类药物耐药性有关.     

STEC的耐药性监测和分析

目的了解各种标本来源的产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)对常用抗生素的敏感性.方法采用WHO推荐的K-B法,进行分鉴定菌株对18种抗生素的药物敏感试验,依照NCCLS判定结果.结果各种来源产志贺样毒素的大肠杆菌共46株,O157型23株,其余为非O157型.全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%(13株),氨苄西林为30.4%(14株),红霉素为69.6%(32株),而且有5株对至少4种以上抗生素产生多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-红霉素-氨苄西林.非O157型STEC耐药菌次为122,而O157型为63.结论非O157型STEC对抗生素可能较易形成耐药性.