粟酒裂殖酵母--一种良好的真核模式生物(Ⅰ)

粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)虽然与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)同属于子囊真菌,但许多研究表明两种酵母在系统分类、细胞周期、rRNA的生物合成和基因的组织、结构及基因的表达调控等方面并不相同,在某些方面粟酒裂殖酵母与高等动物却有一定的相似性,因此,粟酒裂殖酵母也是一种良好的研究真核生物的模式生物.     

粟酒裂殖酵母麦芽糖酶基因的克隆及在大肠杆菌内的表达

利用PCR的方法，以粟酒裂殖酵母菌的染色体DNA为模板，扩增得到粟酒裂殖酵母的结构基因，其开放阅读框1740 bp的序列，可以编码579氨基酸，分子量为67.7 kD.利用NCBI对它的蛋白序列进行比对，发现这个蛋白序列与Aspergillus oryza、Candida albicans、Hansenula polymorpha、Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces pastorianus的麦芽糖酶相比分别具有40.6%、41.6%、37.9%、34.7%、34.5%的相似性.而与粟酒裂殖酵母的α-葡萄糖苷酶具有99.8%的相似性，由此可以得出克隆得到的结构基因应该是粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶结构基因.将克隆的粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶基因克隆到pQE30表达载体中在大肠杆菌中进行诱导表达，然后测定其麦芽糖酶的活力，其酶的比活力是野生菌株的21倍，诱导条件下麦芽糖酶的比活力是非诱导条件下的10倍.     

alg3、vps1301、rad51基因缺失对粟酒裂殖酵母接合生殖的影响

为探寻alg3、vps1301、rad51基因缺失对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)生长及接合生殖的影响,在25 ℃条件下,培养野生型和3种基因缺失的粟酒裂殖酵母,统计并分析其生长情况;将野生型和3种基因缺失菌株分别各自交配产孢,分析对比野生型和基因缺失菌株的接合生殖情况. 结果显示,生长实验中,25 ℃条件下,12 h内,野生型菌株、alg3Δ菌株、vps1301Δ菌株和rad51Δ菌株的平均生长速度分别为0.042 5 、0.009 8 、0.019 3 、0.036 9 OD₅₉₅/h. 结果提示,粟酒裂殖酵母缺失alg3基因后,其生长速度受影响最大.在细胞接合生殖实验中,3种基因缺失菌株产孢数目都出现异常,其中alg3Δ菌株产孢数与野生型表现出显著差异.同时,alg3基因和vps1301基因缺失后孢子长度与野生型存在极显著差异.结果表明,alg3基因缺失对粟酒裂殖酵母的接合生殖影响最大.综上所述,缺失上述3种基因都对粟酒裂殖酵母的生长和接合生殖有不同程度的影响,其中alg3基因缺失对其影响最严重,其次是vps1301基因,rad51基因对其影响最小.     

两个新的粟酒裂殖酵母box H/ACA snoRNA的鉴定、功能分析及进化意义

通过构建粟酒裂殖酵母核小分子RNA的cDNA文库,发现并鉴定了两个新的非编码RNA,分别命名为Sp15-70和Sp18-61.生物信息学分析揭示这两个RNA均具有典型的box H/ACA snoRNA二级结构特征和与rRNA互补的配对区,推测Sp15-70具有指导25S rRNA中U2401和U2298假尿嘧啶修饰的功能;Sp18-61具有指导18S rRNA中U208和25S rRNA中U2341假尿嘧啶修饰的功能.采用CMC-引物延伸法证实:在粟酒裂殖酵母rRNA中,这4个预测位点确实为假尿嘧啶修饰核苷酸.Sp15-70和Sp18-61均由单拷贝基因编码,分别位于粟酒裂殖酵母染色体工和Ⅲ上蛋白质基因的间隔区,在其5'端上游均发现了典型的TATA box元件,表明它们都是独立转录的基因.比较分析这两个snoRNA在不同生物中的功能性同源分子,发现snoRNA基因在进化的过程中发生了广泛的分子重组和转位.     

粟酒裂殖酵母SnoRNA snR90基因缺失株的筛选鉴定

snR90是在粟酒裂殖酵母中发现的一种单基因编码的box H/ACA类snoRNA.在利用遗传手段在粟酒裂殖酵母基因组中敲除了snR90基因后,通过选择性培养基、PCR、Northern杂交这一系列方法筛选鉴定出snR90基因缺失株.该基因缺失株ΔsnR90的成功构建对snR90功能的分析很有的意义.     

粟酒裂殖酵母--一种良好的真核模式生物(Ⅱ)

粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe)虽然与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)同属子囊真菌，但许多研究表明两种酵母在系统分类，细胞周期，rRNA的生物合成和基因的组织、结构及基因的表达调控等方面并不相同，在某些方面粟酒裂殖酵母与高等动物却有一定的相似性，因此，粟酒裂殖酵母也是一种良好的研究真核生物的模式生物。     

Ca~(2 )对酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

SD培养基中外加不同浓度的Ca2 可促进酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞的增殖 ,但在促进增殖方式上存在明显差异 .随SD培养基中外Ca2 浓度增加 ,酿酒酵母到达稳定期的细胞终浓度也越高 ;而粟酒裂殖酵母生长到达稳定期细胞终浓度随Ca2 浓度增加而增加的效应不明显 .同时SD培养基中外加Ca2 对酿酒酵母的促进作用主要是通过加快生长对数期细胞分裂速度 ;对粟酒裂殖酵母主要是靠缩短生长延滞期来促进增殖 .     

辅酶Q_(10)生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生研究

研究对辅酶Q10生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生条件进行了优化,确定了原生质体制备及再生的最佳条件为:茵龄20 h,蜗牛酶浓度2 g/L,酶溶液pH值6.5,酶解温度25℃,酶解时间2 h.通过对粟酒裂殖酵母原生质体制备及再生条件的研究,建立了制备粟酒裂殖酵母原生质体的方法,以期进一步通过原生质体诱变获得辅酶Q10高产菌株.     

粟酒裂殖酵母snR41 snoRNA的鉴定及其结构进化的意义

采用计算机分析和分子生物学实验的方法,在粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe中发现和鉴定了一种新的反义snoRNA,命名为snR41,与酿酒酵母Sacharomyces cerevisiae snR41同源分子比较,粟酒裂殖酵母snR41只具有一个指导rRNA核糖甲基化的反义序列,这一发现进一步揭示了反义snoRNA同源分子在一级结构上的多样性,为研究反义SnoRNA结构及进化提供了新的线索。     

Ca^2＋对酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

ＳＤ培养基中外加不同浓度的Ｃａ＾２＋可促进酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞的增殖,但在促进增殖方式上存在明显差异。随ＳＤ培养基中外Ｃａ＾＋浓度增加,酿酒酵母到达稳定期的细胞终浓度也越高;而粟酒裂殖酵母生长到达稳定期细胞终浓度随Ｃａ＾２＋浓度增加而增加的效应不明显。同时ＳＤ培养其中外加Ｃａ＾２＋对酿酒酵母的促进作用主要是通过加快生长对数明细胞分裂速度;对粟酒裂殖酵母主要是靠缩短生长延滞期来促进增殖。     

水稻Hsp70基因第一个内含子中snoRNA基因簇的保守性及分布特点

对水稻、野生稻和茭白Ｈｓｐ７０基因第一个内含子进行ＰＣＲ分析及部分序列测定，分析结果表明植物Ｈｓｐ７０基因内含子编码多个ｓｎｏＲＮＡ的基因组织具有一定的保守性和分布范围，揭示了植物内含子编码的ｓｎｏＲＮＡ在进化过程中具有比脊椎动物和酵母更加丰富的多样性和移动性．     

Two closely linked rice U14 boxC/D snoRNAs

By analysis of the conserved elements in yeast U14 boxC/D snoRNA. the conserved elements in rice U14 boxC/D snoRNA have been speculated. Through computer search of the international rice genome database, two rice U14 snoRNA gene candidates are obtained. These two putative U14 snoRNA genes are closely linked on rice chromosome 2. The coding sequences of these two snoR-NAs exhibit the hallmark structure of boxC/D antisense snoRNA. They both have conserved boxC and boxD sequences and a 14nt-long complement to the sequence between 414nt and 427nt of rice 18S rRNA (according to GenBank accession no. X00755). The experimental evidence shows that these two snoRNAs are involved in the methylation of the complementary sequence of rice 18S rRNA. The existence and localization of these two snoRNAs are proved by RT-PCR and Northern blot. Further analysis shows that both of the newly found rice snoRNAs have high homology with maize U14 snoRNA. and they are named rice U14.1 snoRNA and U14.2 snoRNA respectively. The gene sequence encoding these two snoRNAs has been deposited in the GenBank database under accession number of AF332622.     

酵母snoRNA基因簇启动子的比较分析

报道对酿酒酵母ｓｎｏＲＮＡ基因簇启动子序列的研究结果．通过计算机分析,发现酿酒酵母中Ｚ２Ｚ８和ＳｎＲ１９０Ｕ１４ｓｎｏＲＮＡ基因簇有相似的启动子结构．这两个ｓｎｏＲＮＡ基因簇都是由一个上游的启动子负责整个基因簇的转录,产生多个顺反子ｓｎｏＲＮＡ的前体,然后再加工成熟为各个独立的ｓｎｏＲＮＡ．在启动子保守序列ＴＡＴＡｂｏｘ的上游还发现２个ＲＡＰ１序列,表明ｓｎｏＲＮＡ基因簇的表达可以通过ＲＡＰ１元素与核糖体蛋白基因的表达协同调控．这是在ｓｎｏＲＮＡ基因的启动子中首次发现ＲＡＰ１调控元素．对ｓｎｏＲＮＡ基因簇的进化特点也进行了讨论．     

Identification and characterization of two novel box H/ACA snoRNAs from Schizosaccharomyces pombe

Ineukaryotes,alargenumberofsmallnucleolar RNAs(snoRNAs)accumulatedwithinthenucleolus playimportantrolesinprecursorribosomalRNA(pre RNA)processingandmaturation[1].AllsnoR NAs,withtheexceptionofRNaseMRP,canbe broadlydividedintotwoexpendinggroups,boxC/D andH/ACAsnoRNAs,basedonconservedsequence elements[2].BoxC/DsnoRNAscontaintwocon servedshortsequencemotifs,boxC(UGAUGA)and boxD(CUGA),locatedonlyafewnucleotidesaway fromthe5′and3′ends,respectively,generallyas partofatypical5′3…     

醇酒酵母反义snoRNA一级结构的分析

对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae基因组中发现和鉴定的41个反义snoRNA进行一级结构的分析表明：酿酒酵母snoRNA基因富含AT：41个反义snoRNA全都有boxC'和boxD'结构元素；根据反义snoRNA保守结构元素及反义序列的数目和位置的特点，将反义snoRNA分为5种结构类型，认为snoRNA具有两个主要的功能区；在snR57、snR59、snR71和snR75不具有指导甲基化反义序列的功能区中，发现有一段长10－12个核苷酸的序列与rRNA互补，为进一步研究反义snoRNA的结构与功能提供了重要线索。     

Identification and functional analysis of 23 novel box C／D snoRNAs from Oryza sativa

In a cDNA library generated from rice small nuclear RNAs,30box C/D small nucleolar RNAs (snoRNAs) were identiffied through preliminary screen.Except 7 known snoRNAs such as U14,all snoRNAs were identified in rice for the first time experimentally.Among the 23 novel snoRNAs,11 snoRNAs appear rice-specific,6 snoRNAs are unique to plants,the remaining 6 snoRNAs have their counterparts in both Arabidopsis and yeast or mammals according to the conserved antisense sequencs that guide 2‘-O-ribose methylation of rRNA,17 of the 23 novel snoRNAs were predicted to guide 24 2‘‘-O-ribose methylations at the specificsites of rice 5.8S,18S,25S rRNAs,among which 19 methylated sites were determined by primer extension at low dNTP concentrations.The remaining 6 snoRNAs devoid of rRNA antisense elements may represent novel snoRNA species in rice.The results show that constructing a cDNA library from small nuclear RNAs is an effective experimental approach for novel snoRNA is identification.The novel snoRNAs are important in elucidating the genomic organization and expression of plant snoRNA genes and the mechanism through which 2‘‘-O-ribose methylations took place in rRNAs.     

Requirement of either of a pair of ras-related genes of Saccharomyces cerevisiae for spore viability

Cells of the yeast, Saccharomyces cerevisiae, containing disruptions of either of two genes that are members of the ras oncogene family are viable, but haploid yeast spores carrying disruptions of both genes fail to grow.