肺支原体抗原快检试剂盒的研制

用不同抗体建立快检肺支原体抗原的夹心ＥＬＩＳＡ方法，并以培养汪评价，研制相应的试剂盒。结果表明夹心ＥＬＩＳＡ检测方法与培养法相符经为１００％，检出极限为１０００菌／ｍＬ，该方法特异性高，与其它相关抗原交叉反应低于３３％，度剂盒稳定性好。     

两种抗原不同方法检测猕猴B病毒抗体的初步探讨

分别以人单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）作抗原，采用玻片免疫酶法（ＥＩＡ）和以Ｂ病毒作抗原，采用ＤＩＡｄｏｔ法检测了６０份猕猴血清中的Ｂ病毒抗体。结果ＥＩＡ法检测的阳性率为５％，ＤＩＡｄｏｔ法检测的阳性率为１０％，两者的符合率为９５％。这一结果可为猕猴生产和出口单位提供参考。     

高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系。用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测。纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析,呈现一条分子量约９２００的蛋白带;建立的ＥＬＩＳＡ方法批内平均变异系数（ＣＶ）为５．８％,批间ＣＶ值为９．６％,ＥＬＩＳＡ抑制试验最高抑制率达８７．２％;临床检测结果表明,在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中分别有１７．４％～３７．３％的抗ＨＭＧ－１７抗体的阳性检出率（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,而在其他自身免疫病和内科疾病者中,抗ＨＭＧ－１７抗体均为低水平。抗ＨＭＧ－１７抗体ＥＬＩＳＡ测定法具有较好的特异性和重复性,便于常规检测,该类抗体的存在似与某些自身免疫病（尤其是ＳＬＥ）的关系较为密切     

人免疫缺陷病毒2型(HIV-2)穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ Ｈ Ｉ Ｖ２） 的原病毒基因组为模板,通过套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增得到了 Ｈ Ｉ Ｖ２ 的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ５ Ｘ１ ,获得了重组表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３６ Ｅ Ｎ Ｖ． Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 对重组表达菌株诱导后, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生     

检测CyPA自身抗体滴金免疫测定法的建立

建立一更快速、简便的检测人血清抗ＣｙＰＡ自身抗体的方法．用重组人ＣｙＰＡ和胶体金标记的蛋白Ａ建立了检测抗ＣｙＰＡ自身抗体的滴金免疫测定法．将ｒｈＣｙＰＡ点样包被于硝酸纤维素膜,抗体在血清渗滤过程中与膜上抗原反应而固定,通过胶体金标记的蛋白Ａ直接显色,阳性结果在膜中央出现一红色斑点．整个测定过程在５ｍｉｎ内完成．与ＥＬＩＳＡ法对比检测了４５份ＳＬＥ病人血清,两法均阳性２０份,均阴性２３份,总符合率为９５．６％．本法简便易行,耗时短,试剂安全、灵敏、特异,便于常规应用     

运用HSV－tk／ACV系统进行肿瘤基因治疗研究

构建了含ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，将ＨＳＶ－ｔｋ基因转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞（命名为ＳＨＧＬＮＴＫ）及小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６（命名为Ｂ１６ＬＮＴＫ）．体外实验证实核着类似物ＡＣＶ对ＳＨＧＬＮＴＫ细胞和Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞的杀伤敏感性分别高于亲本细胞１０００和４００倍．转ＨＳＶ－ｔｋ基因细胞与亲本细胞按不同比例共培养时，亲本细胞对ＡＣＶ的敏感性明显增高，存在旁观者效应．首次应用人脑胶质瘤细胞株进行裸鼠体内实验，结果表明：ＡＣＶ能完全抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠体内肿瘤的形成，对裸小鼠体内已形成的ＳＨＧＬＮＴＫ肿瘤的治疗效果与对照ＳＨＧ４４肿瘤相比，肿瘤体积缩小８０％；用Ｂ１６ＬＮＴＫ细胞接种同系Ｃ５７／ＢＬ小鼠，经ＡＣＶ治疗后，Ｂ１６ＬＮＴＫ组小鼠的肿瘤较对照组Ｂ１６肿瘤小９５％．ＨＳＶ－ＴＫ／ＡＣＶ系统原位基因转移治疗ＳＨＧ荷瘤裸小鼠、Ｂ１６荷瘤小鼠，原位注射病毒悬液／ＡＣＶ治疗组的ＳＨＧ肿瘤、Ｂ１６肿瘤分别较对照组肿瘤小５０％，４３％，原位注射ＰＡ３１７／ＬＮＴＫ细胞，ＡＣＶ治疗的ＳＨＧ肿瘤较对照组肿瘤小９０％，以上实验结果，统计学上差异极显著，Ｐ＜０．０１．实验     

广西地区恒河猴(Rhesus Monkey)B病毒相关抗体的检查研究

采用玻片免疫酶法（ＩＥＡ）和酶联免疫吸附试验法（ＥＬＩＳＡ），检查了来自广西不同来源恒河猴Ｂ病毒的相关抗体。结果表明：广西野生恒河猴受Ｂ病毒的感染较为普遍，来自龙虎山及扶绥保护区的猴，Ｂ病毒相关抗体阳性率分别是７９．７％和７５．３％。来自穿洞河及布柳河保护区的猴，Ｂ病毒相关抗体阳性率分别是２６．１％和２８．９％。大新保护区猴阳性率为５７．１％。在不同组猴中，小群关养组猴相关抗体阳性率最高，野生猴次之，自繁猴最低。三组间，猴Ｂ病毒相关抗体阳性率的差异极显著（Ｐ＜０．０５），经ＥＬＩＳＡ检查确定为阴性的猴，用ＩＥＡ检查出７．５％（１５／２００）的猴被判定为阳性猴     

云南省烟草病毒病的调查与研究

采用ＥＬＩＳＡ，免疫电镜，常规电镜及田间症状观察法对云南省３４个县市烟草病毒病害进行了调查。云南省烟草病毒病害主要病原为ＴＭＶ，ＴＥＶ，ＣＭＶ，ＰＶＸ，ＰＶＹ。其分别占病毒病发病率的４２．４８％；６０．４２％；５６．４８％；３７．２０％；３７．７３％；ＴＥＶ发病率最高。另外混合侵染的现象非常突出，有两种至两种病毒复合侵染的现象，表现出非常复杂的田间症状。     

循环伏安法中铂对乙醇定量吸附特性的研究

本文论述循环伏安法（ＣＶ）中铂（Ｐｔ）对乙醇（ＥｔＯＨ）的定量吸附特性,及其对葡萄酒中ＥｔＯＨ测定的应用问题。用自制的Ｐｔ梳状工作电极。在０．１Ｍ的ＮａＯＨ溶液中,ＥｔＯＨ的氧化峰电位为－２４０ｍＶ（相对Ａｇ／ＡｇＣｌ参比电极）。以３σ背景值计,检出限为０．０２３％（Ｖ／Ｖ）。样品分析结果准确度为９５．２－１０４．７％重现性范围２．８－３．１％ＲＳＤ（ｎ＝８）。校准曲线的线性动态范围０．１－８％（     

浅论高校教师业务档案的建立与管理

浅论高校教师业务档案的建立与管理童晓风（浙江水产学院院长办公室，舟山３１６１０１）ＯＮＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴＡＮＤＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴＯＦＥＤＵＣＡＴＩＯＮＡＬＤＯＣＵＭＥＮＴＳＦＯＲＣＯＬＬＥＧＥＴＥＡＣＨＥＲＳＴｏｎｇＸｉａｏｆｅｎｇ（ＺｈＥ...     

快速全血凝集试验在中国不同人群HBsAg检测中的应用

为了评价本实验室建立的快速全血凝集法检测HBsAg的效果,检测了河北省不同人群534份全血样品,得到了满意结果.来自不同人群的369份样品(其中62份来自乙肝患者,180份来自献血者,127份来自正常人群),经快速全血凝集法和国家认证的市售ELISA试剂盒平行检测后,总符合率为96.7%,灵敏度为90.99%,特异性为98.7%.乙肝患者、献血者和正常人群中阳性率分别为52.6%,4.3%和8.9%.实验结果说明快速全血凝集法不仅简单快速、不需要特殊设备,而且具有高的敏感性和特异性,因此它可以广泛应用于基层卫生机构和临床HBsAg的检测,尤其适用于病人的床边诊断.     

两种国产与一种进口小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的 本研究拟对比小鼠肝炎病毒( MHV)抗体 ELISA 检测试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度,以筛选出既经济又可靠的检测试剂盒。 方法 选择两种国产与一种进口的 ELISA 试剂盒检测 MHV 抗体和以下 5 种病毒阳性血清:小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、小鼠细小病毒(MVM)、小鼠鼠痘病毒(MPV)及小鼠呼肠孤Ⅲ型病毒(Reo-3),并进行敏感性、特异性、精密性及可信度实验比较。 结果 ELISA 国产 B 试剂盒的敏感性是国产 A 试剂盒的 400 倍,进口试剂盒的敏感性是国产 B 试剂盒的 4 倍;特异性实验显示国产 A 试剂盒与 MPV 无交叉反应,但与其他 4 种病毒阳性血清均有交叉反应,国产 B 试剂盒和进口试剂盒与 MPV 以外的 5 种病毒阳性血清均无交叉反应;精密性实验显示进口试剂盒批内平均变异系数为 5. 667%,国产 A 和国产 B 试剂盒批内平均变异系数分别为13. 825%和 13. 827%;可信度实验显示国产 B 试剂盒和进口试剂盒的阳性和阴性检测符合率均为 100%,国产 A 试剂盒的阳性和阴性检测符合率分别为 40%和 80%。 结论 ELISA 检测国产 B 试剂盒除敏感性和精密度低于检测的进口试剂盒外,其特异性和可信度均良好,国产 A 试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度均低于检测的进口试剂盒。     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂的评价

对丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂(IEA)检测丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的性能、结果等技术参数进行评价,为实验室的选用提供参考.采用IEA法、ELISA法和胶体金法对中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”和3297份血清或血浆标本同时测定,对IEA的敏感性、特异性、重复性和检测时间等结果进行评价.结果表明:IEA可通过中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”检验;与ELISA法比较,IEA的检出率为99.06%,灵敏度与ELISA相当,胶体金的检出率为86.01%,灵敏度比ELISA低;IEA检测所需时间15～25min.IEA既有ELISA的敏感性、特异性,又有胶体金简便、快速的特点.适用于献血员及高危人群中HCV抗体的筛查和临床诊断HCV感染,以及门诊、急诊和基层医疗单位的现场检测.     

ELISA在梅毒检测中的价值

对ELISA在梅毒检测中的价值作了评价，比较了TRUST和ELISA两种方法用ELISA法检测TRUST阳性标本83份，TRUST阴性标本1536份，结果出现梅毒-ELISA和TRUST不一致结果13份，用TPPA进行确认．13份确认结果显示，梅毒-ELISA与TPPA的符合率为83．3％，TRUST与TPPA的符合率为8．3％．梅毒-ELISA的敏感性、特异性分别为100％、99．9％，TRUST的敏感性、特异性分别为89．9％、99．8％．梅毒-ELISA的敏感性、特异性都优于TRUST，与TPPA的符合率高，是用于梅毒检测和筛查的一种良好方法．     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.     

抗大肠癌组织差异表达蛋白(SCAP47)抗体的制备及初步应用

制备一种新的大肠癌组织差异表达蛋白质抗体(抗SCAP47),用于检测大肠癌相关肿瘤抗原SCAP47。采用本室制备的大肠癌组织差异表达蛋白质(SCAP47)免疫新西兰纯种兔,制备兔抗SCAP47抗体,用双向免疫扩散法和ELISA法测定抗体效价;并用ELISA法检测129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织的可溶性SCAP47抗原。用SCAP47抗原免疫新西兰纯种兔,获得抗SCAP47抗体,经检测其最高效价：双向免疫扩散法为1：32;ELISA法为1：6400。129例患者的胃肠道肿瘤和疾病及正常对照组织可溶性SCAP47抗原ELISA法检测结果显示：诊断大肠癌的敏感性52．4％,特异性95．4％,阳性预示值84．6％,阴性预示值80．6％,似然比11．4,约登指数0．47。本实验制备的抗SCAP47抗体是一种新的大肠癌相关抗原SCAP47抗体。由于SCAP47不同于CEA、P^27、CCA等大肠癌肿瘤标志物,且在大肠癌中呈现高度表达,推测其可能是一种新的大肠癌相关抗原。因此,制备抗SCAP47抗体为用于多种指标联合检测早期大肠肿瘤提供了一种新的检测工具。     

液相芯片技术检测马立克氏病病毒方法的建立

目的 建立检测马立克氏病病毒的双抗夹心液相芯片技术方法。方法 将捕获抗体偶联到19号微球,分别确定捕获抗体的偶联量、检测抗体和SA-PE抗体的工作浓度,用建立的液相芯片方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的分析。结果 1×106个荧光编码微球的抗体偶联量为2 μg,最佳的检测抗体与SA-PE的工作浓度分别为2 μg/mL和4 μg/mL。该方法特异性强,只检出马立克氏病病毒,其他病毒未检出;灵敏度为125 pfu/mL;批内批间的变异系数分别为0.85%和2.4%;对58份临床样品检出率为31%。与PCR方法比较,符合率为94.8%。结论 建立的马立克氏病病毒液相芯片检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好等优点。该方法可用于马立克氏病的监测,也可用于SPF鸡的筛选。     

氯霉素残留胶体金免疫层析快速检测法的研制

建立一种快速、简易的检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析法.将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸-醋酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的结果.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了...     

食品中磺胺类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

在常规酶联免疫法的基础上,将磺胺类母核与牛血清白蛋白合成免疫抗原后免疫小鼠制得磺胺类单克隆抗体,并进一步优化抗体工作浓度、反应时间等实验参数,建立了一种简便、快速、精确的磺胺类残留一步式化学发光酶联免疫检测方法.结果表明该方法最佳检测范围为1.0～81.0 ng/mL,检测IC50达3.047 ng/mL,对猪肉的最低检测限为0.74 ng/g,可检出国际规定的SAs残留标准底限值以下的残留量.与常规ELISA方法相比,检测限和灵敏度基本一致,但反应时间缩短了60 min.证明采用一步式化学发光酶联免疫检测磺胺类残留可以大幅度缩减检测时间,符合快速检测的要求.