丝状真菌原生质体技术研究(Ⅵ)——高脚小伞原生质体的制备与再生

报道高脚小伞菌丝体原生质体制备及再生的结果．多种因素影响原生质体的产量及再生率，在最适条件下，原生质体产量可达２．５４×１０６个／ｍｌ，再生率达２３．６％，还对原生质体的活力及核数进行了测定，本研究为进一步的原生质体融合及外源基因转化工作打下了基础     

Bacillus licheniformis原生质体形成及再生最佳条件的研究

研究了多种因素对Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ原生质体形成及再生的影响。在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体，原生质体的形成率和再生率分别达到９９．７％和３０．９％。     

丝状真菌原生质体技术研究（V）──原生质体融合的形态学观察

本文报道了台湾根霉、黑曲霉、米曲霉、草菇、银丝草菇和糙皮侧耳等，几种丝状真菌原生质体释放、再生和融合过程的形态学观察结果，并对其机制进行了讨论．原生质体释放有顶位、侧位和原位释放３种方式；原生质体分无核、单核、双核和多核４种类型．原生质体的再生过程由壁的再生、修复和萌发３个阶段组成．原生质体萌发可成芽管状、念珠链状和３个以上方向分裂形成的不规则状．原生质体融合分为两个、３个和原生质体再融合３种类型，无核原生质体、原生质修复不完整、遗传物质不完全整合性和细胞壁合成机制不协调，是造成种间融合再生率低的重要因素．     

丝状真菌原生质体技术研究——培养条件对原生质体的影响(VII)

研究了培养基成分、培养方式和培养时间对台湾根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｆｏｒｍｏｓａｅｎｓｉｓ）、糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、草菇（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌａｖｏｌｖａｃｅａ）和银丝菇（Ｖ．ｂｏｍｂｙｃｉｎａ）原生质体分离再生的影响．分离原生质体培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,银丝菇以ＣＹＭ培养基,糙皮侧耳以２０％平菇子实体浸出液配制的ＰＱＡ培养基为好．原生质体再生培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,糙皮侧耳以ＢＭ培养基为好．不同培养方式对不同菌种原生质体再生率的影响是不同的．台湾根霉的原生质体在液体再生培养基上的再生率为４５％,而在固体培养基上再生率为０．０９％;草菇的原生质体以固体和液体两种培养方式再生无明显差异．试验过的所有丝状真菌,夹层固体再生较单层固再生率高．菌龄影响原生质体的分离和再生．不同真菌分离原生质体的菌龄不同,台湾根霉的菌龄以１４～１６ｈ（３２℃）、草菇以４８ｈ、银丝菇以７２ｈ（３０℃）为最适培养时间     

丝状真菌原生质体技术的研究(Ⅷ)——渗透压稳定剂对原生质体的影响

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响．分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好．ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果．就浓度而言,分离原生质体０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度．草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／ＬＫＣｌ和ＭｇＳＯ４效果较好．渗透压稳定剂的种类和浓度不仅影响原生质体的数量而且影响原生质体的质量．０．６ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ对台湾根霉和黑曲霉原生质体分离有好的效果,而对草菇和银丝菇效果就比较差．０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ对草菇、银丝菇和台湾根霉原生质体再生有很好的效果,而对黑曲霉效果则相当差．     

G-8菌株原生质体形成和再生条件的研究

以浮游球衣细菌Ｇ－８菌为出发菌株,有杉甘氨酸－溶菌酶－ＥＤＴＡ方法,研究了各种因素对原生质体形成和再生的影响。在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,Ｇ－８菌原生质体形成率和一率分别达９６．８％和２９．８％,通过光学显微镜技术,观察了原生质体形成和再生的过程。     

丝状真菌原生质体技术研究

研究了培养基成分,培养方式和培养时间对台湾根霉、糙皮、侧耳、草菇和银丝菇原生质体分离再生的影响。分离再生质体培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,银丝菇以ＣＹＭ培养基,糙皮侧以２０％平菇子实体浸出液配制的ＰＱＡ培养基为好,原生质体再生培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,糙皮侧以ＢＭ培养基为好,不同培养方式对不同菌种原生质体再生率的影响是不同的。台湾根霉的原生质体在液体再生培养基上的再生率为４５％,而在固     

Rhizoctonia solani Kuhn原生质体的制备和再生

应用市售商品酶,从立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)菌丝体中,成功地分离出高产的原生质体。日本产Cellulase “onozuka”R—101%与上海产蜗牛酶1～1.5%或者与上海产溶菌酶1～1.5%组合,在35℃,0.6M MgSO_4·7H_2O条件下,菌丝酶解效果很好。菌龄,酶及酶解条件以及培养基的成分等因素与原生质体的形成及再生密切相关。对原生质体的形成过程及再生过程的形态学变化进行了观察。二种原生质体再生转化形式,在再生培养基中能够观察得到。     

酿酒酵母W5原生质体制备及再生条件的初步研究

对影响酿酒酵母W5制备与再生的一系列因素做了初步的研究,确定了原生质体制备与再生的最佳条件:菌龄为12h,脱壁预处理剂作用20min,在30℃,pH为偏酸或者偏碱的条件下,选用2%(m/v)的蜗牛酶用10mL试管摇床温育15min;渗透压稳定剂采用17%(m/v)蔗糖,原生质体制备率和再生率可达到95.11%和14.66%。     

植物原生质体培养与融合的研究进展

对原生质体的分离、培养、融合及植株再生方面进行了简要的论述.并根据对有关文献的分析,讨论了原生质体研究中存在的问题及今后的发展趋势,指出植物原生质体的游离、培养和融合技术在近20多年来得到了迅速的发展,今后在进一步加强原生质体培养基础理论研究的同时,重点放在利用原生质体融合技术进行遗传性状的改良,以获得优良性状的个体并通过无性途径固定下来.     

侧耳属食用菌原生质体制备与再生试验

原生质体分离与再生,是进行原生质体融合育种的先行工作。本文报告食用菌侧耳属四个种六个菌株原生质体分离与再生的试验结果。六菌株平板培养五天的幼龄菌丝体,在混合酶液中32℃摇瓶酶解5～7小时,即可全部离解。经过滤、离心、洗涤等净化的原生质体悬液,原生质体浓度多数可达2·10~5(个/毫升)以上。原生质体采用固液两种培养基进行再生培养时,菌株S_1、S_2仅在液培中获再生菌株,而S_3、S_4、S_5、S_6在固液两种培养基均获再生菌株。     

枯草杆菌(B.subtilis)原生质体融合的方法学研究

利用改良的HM制备液,在适宜的条件下酶解制备亲本株的原生质体,在DNase存在的条件下,用PEG(MW6000)做为聚合剂,经低温短时间处理,将枯草杆菌(B.subtilis)Ki—2—132衍生株与BR_(151)衍生株的原生质体融合。再在适宜的条件下使用改良的DM_3再生培养基,补加适量经处理的人血清白蛋白,同时加入适量适合于枯草杆菌细胞壁再生的引物进行再生,使再生率达到了55～58.15％左右。融合率高达1.82×10~(-2)。筛选出51种不同类型的融合子923株,经传代8代测得其融合子的稳定率达32.46％,从而在工业菌株的选育中使获得高产菌株成为可能。     

丝状真菌原生质体技术的研究（Ⅷ）：渗透压稳定剂对？…

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响。分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好。ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果。就浓度而言,分离原生质体０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度。草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ和ＭｇＳ     

枯草杆菌(B.subtilis)ki—2—132原生质体化及其活性的研究

本文探讨了原生质体制备液的种类、渗透压、PH值、酶解温度、酶量、细菌生长时期等条件对枯草杆菌原生质体化及其活性的影响。首次将Fodor等对巨大芽孢杆菌(B.megaterium)的原生质体制备液(HM)用于供试菌株,并经改良其渗透压,使再生率可达13.3％。经再改良,于HM液中加入适量的牛血清白蛋白,并同灭活的产气杆菌(E.aerogenes)混合后倾注再生平皿培养,可使再生率提高至32.4％,为进一步开展细菌细胞融合提供有益的资料。     

组织培养和原生质体培养在林木上应用的现状

组织培养和原生质体培养已成为生物工程的重要技术．并在农业、花卉等方面取得了很大的成就．林木与其他草本植物相比，进展较为缓慢，但近几年来，亦取得了令人鼓舞的成果，本文就国内外林木的组织培养和原生质体培养的现状作以评述．     

食用真菌原生质体无性繁殖株产菇优势及出菇性状研究

本研究以十一菌株为材料，对原生质体无性繁殖株的单、双核比例、产菇优势及出菇性状进行了研究。结果表明：（１）平菇、香菇原生质体无性繁殖株，以“锁状联合（ｃｌａｍｐｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）”的有无可区分为无Ｃ．Ｃ．的单核株和有Ｃ．Ｃ．的双核株，但其比例因菌株不同而迥异。（２）同一菌株的单、双核林的菌丝体生长速度、出菇期及菇产量等性状有较大差异，双核株多优于单核株；但双核株与其原始异核株相比，其优劣因菌株而异。（３）无性单核株是进行细胞融合或常规杂交育种的理想材料，而双核株可用于选出优质高产菌株。     

脂肪酶产生菌的筛选及其原生质体的制备

实验采用加有维多利亚蓝或若丹明-B染料指示剂的油脂鉴定平板，在室温条件下从长期接触油脂的土壤中分离挑选产脂酶菌种，经琼脂块平板初筛和摇瓶复筛后获得一酶活较高的白色丝状真菌-地霉(Geotrichum,Sp)GS，为对该菌株进行原生质体诱变育种，将菌丝经DTT溶液预处理后，用混合脱壁酶液处理制备原生质体，并加入0．6mol／L MgSO4溶液离心后收集呈絮状飘浮的原生质体团，从而获得大量不带菌丝的原生质体供诱变使用。     

小白链霉菌(Streptomyces albulus)的原生质体制备研究

广谱天然防腐剂ε-多聚赖氨酸产生菌Streptomyces albulus的育种工作目前仅处于常规育种水平,为对其进行原生质体技术的育种改造,对影响S.albulus原生质体制备的几个重要因子进行了详细研究。测定了S.albulus的生长曲线,确定制备原生质体的最佳菌龄为稳定期初期即培养40h;S发酵液中添加2·0%甘氨酸可使原生质体形成率最高;以破坏链霉菌细胞壁效果最好的溶菌酶进行酶解,确定最佳酶解温度为为35℃、最佳酶解时间为180min、最佳溶菌酶浓度为2.0mg·mL-1;在以上最佳原生质体制备条件下可获得纯净且量多的S.albulus原生质体,形成量达1.74×108cfu·mL-1,为S.albulus原生质体的进一步遗传育种奠定了良好的基础。     

原生质体膜的发育特征

通过对黑麦(Secale Cerenle.L.)、向日葵(Helianthus Annuus.L)幼苗叶片的分段取材,利用扫描电镜技术研究了植物叶肉原生质体质膜的发育特征。我们发现(从叶片基部开始到叶尖)双子叶、单子叶植物原生质体的质膜发育具有相似的规律性。原生质体幼龄时,质膜表面出现了各种突起组成的球状“微区”,随着细胞的成熟,质膜表面逐渐变得多皱,进而光滑,其方式在单、双子叶植物略有不同。本文详细地描述了质膜的形态发育特征,同时讨论了这些特征与叶肉原生质体其它特征的关系。     

丝状真菌原生质体技术——(Ⅰ)黑曲霉原生质体灭活

在GM玻璃纸平板上接种10~6数量级的孢子悬液,31℃培养17～18hr,收集菌丝于1.5%Lywallzyme中酶解4hr,过滤离心收集原生质体,原生质体经50℃,5min处理,并20W紫外灯40cm照射,150s,0.1MHNO_2,pH4.6.再经31℃恒温处理7min,原生质体可达到全部灭活.