丝状真菌原生质体技术研究——培养条件对原生质体的影响(VII)

研究了培养基成分、培养方式和培养时间对台湾根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｆｏｒｍｏｓａｅｎｓｉｓ）、糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）、草菇（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌａｖｏｌｖａｃｅａ）和银丝菇（Ｖ．ｂｏｍｂｙｃｉｎａ）原生质体分离再生的影响．分离原生质体培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,银丝菇以ＣＹＭ培养基,糙皮侧耳以２０％平菇子实体浸出液配制的ＰＱＡ培养基为好．原生质体再生培养基,草菇以ＰＤＡ＋稻草浸出液,糙皮侧耳以ＢＭ培养基为好．不同培养方式对不同菌种原生质体再生率的影响是不同的．台湾根霉的原生质体在液体再生培养基上的再生率为４５％,而在固体培养基上再生率为０．０９％;草菇的原生质体以固体和液体两种培养方式再生无明显差异．试验过的所有丝状真菌,夹层固体再生较单层固再生率高．菌龄影响原生质体的分离和再生．不同真菌分离原生质体的菌龄不同,台湾根霉的菌龄以１４～１６ｈ（３２℃）、草菇以４８ｈ、银丝菇以７２ｈ（３０℃）为最适培养时间     

丝状真菌原生质体技术的研究(Ⅷ)——渗透压稳定剂对原生质体的影响

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响．分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好．ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果．就浓度而言,分离原生质体０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度．草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／ＬＫＣｌ和ＭｇＳＯ４效果较好．渗透压稳定剂的种类和浓度不仅影响原生质体的数量而且影响原生质体的质量．０．６ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ对台湾根霉和黑曲霉原生质体分离有好的效果,而对草菇和银丝菇效果就比较差．０．６ｍｏｌ／ＬＫＣｌ对草菇、银丝菇和台湾根霉原生质体再生有很好的效果,而对黑曲霉效果则相当差．     

丝状真菌原生质体技术的研究（Ⅷ）：渗透压稳定剂对？…

报道用五种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂,对草菇、银丝菇、台湾根霉和黑曲霉原生质体分离和再生的影响。分离原生质体以ＫＣｌ、ＮａＣｌ和ＭｇＳＯ４等无机盐渗稳剂较有机糖醇效果好。ＫＣｌ和蔗糖对四种真菌原生质体再生都有较好的效果。就浓度而言,分离原生质体０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、蔗糖和甘露醇对黑曲霉和台湾根霉都是最佳的浓度。草菇和银丝菇以０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ和ＭｇＳ     

丝状真菌原生质体技术研究（V）──原生质体融合的形态学观察

本文报道了台湾根霉、黑曲霉、米曲霉、草菇、银丝草菇和糙皮侧耳等，几种丝状真菌原生质体释放、再生和融合过程的形态学观察结果，并对其机制进行了讨论．原生质体释放有顶位、侧位和原位释放３种方式；原生质体分无核、单核、双核和多核４种类型．原生质体的再生过程由壁的再生、修复和萌发３个阶段组成．原生质体萌发可成芽管状、念珠链状和３个以上方向分裂形成的不规则状．原生质体融合分为两个、３个和原生质体再融合３种类型，无核原生质体、原生质修复不完整、遗传物质不完全整合性和细胞壁合成机制不协调，是造成种间融合再生率低的重要因素．     

丝状真菌原生质体技术的研究——去壁酶对丝状真菌原生质体形成的影响(Ⅱ)

本文研究了几种丝状真菌原生质体形成的最佳酶类和酶浓度(W/V).结果表明:台湾根霉为2％的溶壁酶(Ⅱ);黑曲霉,平菇,草菇,银丝草菇为1.5％的溶壁酶(Ⅰ);放线菌的红霉素链霉菌为0.025％的溶菌酶.     

丽格海棠的组织培养与快速繁殖

以丽格海棠的叶片为外植体,对离体再生培养技术进行了研究．结果表明,最佳诱导培养基为MS＋BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L,诱导率为95％;增殖培养基为MS＋BA1．0mg／L＋NAA0．05mg／L,增殖系数为4．8;适宜的生根培养基为MS,生根率为100％．     

枯草杆菌(B.subtilis)原生质体融合的方法学研究

利用改良的HM制备液,在适宜的条件下酶解制备亲本株的原生质体,在DNase存在的条件下,用PEG(MW6000)做为聚合剂,经低温短时间处理,将枯草杆菌(B.subtilis)Ki—2—132衍生株与BR_(151)衍生株的原生质体融合。再在适宜的条件下使用改良的DM_3再生培养基,补加适量经处理的人血清白蛋白,同时加入适量适合于枯草杆菌细胞壁再生的引物进行再生,使再生率达到了55～58.15％左右。融合率高达1.82×10~(-2)。筛选出51种不同类型的融合子923株,经传代8代测得其融合子的稳定率达32.46％,从而在工业菌株的选育中使获得高产菌株成为可能。     

高效絮凝剂产生菌的筛选、鉴定及培养条件优化

从实验室好氧活性污泥中分离出1株高效解凝刑产生菌株，鉴定为新月弯孢霉，命名为M—26。旨次发现了新月弯孢霉可产生微生物解凝剂。通过设计正交实验找出其影响因素的重要性顺序及较佳的培养条件。实验结果表明，该菌株在高氏培养基，初始pH值为7．0，转速为200r/min和水浴温度为35℃的条件下能产生高效解凝剂，对高岭土悬浊液的解凝率达到97％以上。     

Ca^2,Mg^2＋总浓度对磁化水抑垢效果的影响

通过动态模拟实验,确定了不同Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾＋总浓度对磁化水抑垢率的影响,并分析了磁化水抑垢机理,实验结果表明,对于碳酸盐型水应用磁化水抑垢效果好,抑垢率均在５４％以上。     

兔眼蓝莓组织培育苗高效快繁技术

为获得兔眼蓝莓高效快繁的技术体系,以杰兔幼嫩茎段为试验材料,对增殖培养基、叶片再生体系、生根培养基、炼苗基质等组培苗生产的几个关键因素进行了优化.结果表明,WPM(改良)+1.0mg/LZT增殖培养基能使新梢增殖率达6倍以上,丛生苗生长速度快,而且株型健壮.在无菌苗叶片离叶尖1/3处,沿垂直叶片主脉方向将叶片切成二部分,叶片背面朝下接种于WPM(改良)+1.7mg/LZT培养基中,先暗培养20 d后光照培养,结果叶尖端和叶柄端的再生率分别达到93.8％和79.5％;1/4 WPM(改良)+1g/L活性碳+0.1 mg/L IBA生根培养基能使试管苗生根率达95％;以水苔藓为炼苗基质可使幼苗成活率高达100％.因此,本研究从叶片再生、增殖培养、生根培养到炼苗这一系列环节进行了优化,建立了一种可高效、快速、稳定获得优良的兔眼组培种苗的技术.     

一株高效稻草纤维素降解真菌的筛选与鉴定

采用刚果红羧甲基纤维素钠培养基法、滤纸条降解法和胞外酶活性测定法从长白山原始森林的腐烂枯木和落叶腐质土中筛选一株高产纤维素酶的真菌,结合菌落形态学和分子生物学方法鉴定该菌株为产黄青霉,命名为CBS-1.滤纸崩解实验说明在24h该菌对滤纸就具有明显的崩解能力,6d后滤纸的失重率达到24.1％;以稻草粉为底物发酵120 h...     

药用植物蚬壳花椒的离体培养及再生体系的建立

为了研究蚬壳花椒的离体培养并建立再生体系,用蚬壳花椒的二年生植株的幼茎作为起始外殖体,接种在含不同激素的MS培养基上,结果为最佳腋芽诱导培养基为:Ms+2.0 mg.L-16-BA+O.05 nag.L～1NAA,诱导率达64.O%;最佳丛生芽诱导培养基为:MS+2.0 mg.L-1ZT+0.2 mg.L-1NAA,诱导率达90.O%;最佳增殖培养基为:MS+6.BA0.5 mg.L-1+NAAO.05rag.L-1+生物素1.0 mg.L-1,增殖系数可达到4.O;最适生根培养基为:1/3MS+IBAO.3mg.L-1+NAA O.05 rag.L-1,生根率达78%.     

不同小麦基因型愈伤组织诱导和植株再生能力的变异性研究

该项研究考查了39个冬小麦(Triticam aestivum L)基因型组织培养应用的可能性。组织培养材料是12日龄未成熟种胚。愈伤组织诱发在每升含有1.0mg2.4—D的改性Mwrashige和Skooge培养基上进行,在每升含有0.5mg2.4—D的同一培养基上进行培养。然后转移到2.4—D含量0.1毫克/升培养基上诱发茎,在不含2.4—D培养基上形成整株小麦。本研究对小麦不同基因型的愈伤组织诱导、愈伤再生体形成、(继代培养以及对分培的反应和再生植株的能力几方面的变异性作了观察。在4次分培(90—125)后,有18种基因型具有再生能力。240天后有五种基因型的培养材料仍保持全能性。420天后ND7532和Roughrider的组织培养物仍具全能性。选系ND7532,愈伤体诱导,愈伤再生体形成百分率、离体培养下的生长速度和具有全能性的愈伤组织的比率,均高于其他基因型。如果选用适当的基因型材料,是肯定能够由未成熟种胚组织诱导出来小麦植株的。本研究的结果,由愈伤组织再生出532株,其中510株结实。看来栽培小麦对组织培养中的反应因材料的基因型而异,因而适于用做组织培养的好品系是可以鉴选出来的。由禾谷类作物体细胞和性细胞形成植株的技术,为作物改良开拓了新的发展领域。目前,主要禾谷类作物的细胞培养,已经取得了不同程度的成功。这些禾谷类作物包括玉米、燕麦、珍珠粟、高粱、水稻、大麦和小麦。尽管如此,从体细胞愈伤体(Calli)形成大量的期望再生植株是困雄的,只在玉米和燕麦上有过报导。由作物组织培养形成大量再生植株,是作物改良运用的前提。植株细胞可在体外培养,且其再生株可育,这是禾谷类作物细胞水平上选种是否成功所必须具备的两个条件。六倍体小麦(2n=6×7=42)的许多组织能迅速形成愈伤组织,但其茎分化率低,据最近报导,由未成熟种胚培养再生植株成功,并观察在被试小麦栽培种中,形成愈伤组织的能力有差异。我们相信,既然观察到在组织培养或原生质体培养中有种内变异的存在,只要对大量的基因型进行试验一定能鉴定选出适于用作组织培养的小麦栽培品种。本研究的目的是探讨冬小麦基因型对离体培养的各种反应及由愈伤组织诱发、培养和再生为植株的技术。     

烃降解菌HL-6的分类鉴定、降解性能及应用研究

从新疆油田石油污染土壤中分离到一株烃降解细菌HL-6,经生理生化实验和分子生物学方法初步鉴定为红球菌(Rhodococcussp.).研究表明,利用乙醇无机盐培养基培养液体种子是适宜的,菌体浓度可达108CFU/mL.在以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中,25℃振荡培养3d,烃降解率达到78.5%.该菌降解烷烃的范围很广泛,对C11~C36均有不同程度的降解.将乙醇制备的种子液与沸石按照2∶1的比例制备成固体菌剂加入以柴油为唯一碳源的无机盐培养基中进行25℃振荡培养7d,同时与以相同菌浓液体菌剂接种的降解情况进行对照,最终降解率液体菌剂达到82.8%,固体菌剂达到74.6%.固体菌剂和液体菌剂可分别用于海洋滩涂和土壤石油污染的生物修复研究.     

瓠瓜子叶离体培养的研究

系统地研究了瓠瓜子叶外植体直接发生不定芽,以及不定芽生根壮苗培养的各种影响因子．实验结果表明：不同部位的子叶外植体其不定芽发生的频率高低依次为子叶基段〉子叶中段〉子叶顶段;具有较多创口的外植体（打孔或切开伤口）其不定芽发生频率较高;6种供试基本培养基用于诱导瓠瓜子叶直接发生不定芽的效果依次为MS〉1／2MS〉1／3MS〉B5〉N6;在KT、6-BA和ZET等3种外源细胞分裂素的不同质量浓度处理中,以1．0mg·L^-16-BA的处理对于诱导瓠瓜子叶外植体直接分化出不定芽有比较理想的效果;VB1的效果不明显;VB6有较好的促进作用,其中以附加0．5mg·L^-1VB6的处理效果最好（不定芽发生率53．3％）．附加1．0mg·L^-1NAA的MS培养基用于不定芽的生根壮苗培养可获得健壮的完整植株．其根系发育良好．平均单株根数达5.3条．