SUMO-1在ApoE -/一小鼠PM2.、暴露中调控血管HIF-1a/VEGF信号通路的研究

以气管滴注方法研究了ApoE-/一小鼠经PM2.5暴露后，其主动脉弓中SUMO-1, HIF- la、血管内皮生长因子(VEGF)表达变化规律及HIF- la的SUMO化修饰情况.实验结果显示:PM2.5暴露后，小鼠主动脉SUMO-1,HIF-la,VEGF的表达上调;PM2.5暴露诱导了SUMO-1对HIF- la的SUMO化修饰;低氧条件下SUMO-1敲低导致HIF-la表达的下调结果提示PM2.5暴露通过上调细胞中SUMO-1的表达，稳定或者上调HIF- la的表达，进而影响血管内皮生长因子(VEGF)的表达，造成动脉粥样硬化斑块的不稳定.     

VEGF、COX-2、HIF-1α在子宫内膜癌中的表达及其意义

应用免疫组化SP法检测46例子宫内膜癌、22例子宫内膜不典型增生和19例正常子宫内膜组织中VEGF、COX-2与HIF-1α蛋白的表达情况.结果显示：VEGF、COX-2与HIF-1α在子宫内膜癌中表达升高,且随分级分期的升高而升高,三者在子宫内膜病变发生、发展中起促进作用;在子宫内膜组织中,COX-2和HIF-1α可能分别对VEGF起调控作用,有望成为内膜肿瘤抗血管治疗的有效靶标.     

香青兰总黄酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化及TGF-β 1/Smad通路的影响

目的探索香青兰总黄酮对高脂饲料诱导ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化及TGF-β 1/Smad通路的影响。方法C57BL/6J小鼠为正常对照组,ApoE-/-小鼠随机分为模型组、香青兰总黄酮低、中、高剂量组(21、42、84 mg/kg/d)和辛伐他汀组(3.5 mg/kg/d)。小鼠给药12周后处死,观察主动脉病理形态学变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测了血清中白介素1β(IL-1β),白介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测了各组主动脉TGF-β1,Smad2/3及P-Smad2/3蛋白的表达情况。结果与模型组相比,各给药组动脉粥样硬化病变减轻,斑块面积与管腔面积比值明显降低(P0.05或P0.01),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1浓度显著低于模型组(P0.05或P0.01)。Western Blot显示各给药组主动脉中TGF-β1、p-Smad2/3以及Smad2/3的蛋白水平显著低于模型组(P0.01)。结论香青兰总黄酮具有抗动脉粥样硬化的作用,其机制可能与抑制炎症因子表达和干预TGF-β 1/Smad信号通路的转导有关。     

人参皂苷Rg1对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其机制

本研究旨在探讨人参皂苷Rg1对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其机制。雄性ApoE~(-/-)小鼠给予高脂饲料饲喂,建立动脉粥样硬化模型,造模结束后随机分组并给药。给药结束后,通过油红O染色观察小鼠主动脉动脉粥样硬化病变,并检测血清中TC、TG水平。免疫荧光检测主动脉斑块处促炎型巨噬细胞,Western blot检测主动脉IκBα、p-IκBα、NF-κB p65及p-NF-κB p65等蛋白变化。结果显示,人参皂苷Rg1 50、100 mg/kg组均可显著降低ApoE~(-/-)小鼠动脉粥硬化病变面积;免疫荧光检测发现,人参皂苷Rg1 50、100 mg/kg组均可显著减少促炎型巨噬细胞。Western blot结果显示,人参皂苷Rg1低、高剂量组均可显著抑制p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白的表达。综上所述,人参皂苷Rg1对ApoE~(-/-)小鼠主动脉动脉粥样硬化具有较好的抑制作用,其作用机制可能与通过抑制NF-κB信号通路异常活化进而抑制巨噬细胞向促炎型巨噬细胞转化有关。     

急性高浓度PM2.5暴露对小鼠认知能力的影响

流行病学证据表明,老年人长期接触PM2.5可能导致记忆障碍.为了探究短期、严重雾霾天气对人们健康的影响,以C57BL/6J小鼠为研究对象,用不同浓度的PM2.5(0、193、1 930、19 300 μg·kg－1·day－1),通过鼻腔滴注的实验,染毒1 w,探究急性高浓度PM2.5污染所造成的神经毒性.首先通过Morris水迷宫实验对小鼠认知能力进行检测,暴露结束后对小鼠脑组织进行组织病理学检测(H&E)、氧化应激水平测定(ROS、MDA、SOD).实验结果表明,急性高浓度PM2.5暴露虽然不影响小鼠大脑的生长发育,但会导致小鼠认知能力下降,高剂量19 300 μg·kg－1·day－1PM2.5染毒组小鼠与空白对照组小鼠5 d逃避潜伏期的平均值有显著性差异(为P＜0.05);小鼠脑组织海马区出现病理学损伤;小鼠脑组织中的ROS水平、MDA含量上升,SOD活性下降.实验揭示了急性高浓度PM2.5暴露对小鼠脑组织能造成氧化损伤,破坏海马神经中枢细胞结构,影响小鼠的学习记忆能力.     

ApoE基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠血脂及主动脉组织病理学的对比观察

目的高脂饲养的雄性载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化模型的建立。方法选取8周龄雄性ApoE-/-小鼠,以C57BL/6J小鼠为对照组,高脂饲养8周后测定血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度胆固醇脂蛋白、低密度胆固醇脂蛋白含量;小鼠心脏主动脉根部石蜡切片,常规HE染色,观察和测量动脉粥样硬化斑块的组织学特点及病变面积。结果ApoE-/-小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的含量显著高于同年龄同性别C57BL/6J小鼠,高密度脂蛋白的含量显著低于同龄同性别C57BL/6J小鼠;高脂饲养下16周龄ApoE-/-小鼠主动脉根部切面可见明显的脂质斑块。结论在该浓度的高脂饲料饲养条件下,ApoE-/-小鼠在16周龄已形成脂质斑块,是研究动脉粥样硬化等心血管疾病较佳的动物模型。     

大气细颗粒物暴露对肽基-脯氨酰顺/反异构酶及调节丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B激活磷酸化的影响

为探讨大气细颗粒物(PM_(2.5))对肽基-脯氨酰顺/反异松酶(PIN1)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)在肿瘤发生中的影响,揭示PM_(2.5)对人体健康的不利影响,为日后研究提供有益资料。本研究将Wistar大鼠暴露于PM_(2.5)中2～4周,使用MAS-SON染色的方法观察其肺组织胶原产生情况,用Western blot、Real-time q PCR检测肺组织以及H292细胞中PIN1的mRNA和蛋白质变化情况;不同浓度PM_(2.5)(0、100、200μg/m L)处理H292细胞24 h后,使用Western blot方法检测p-Akt的表达情况。结果显示随PM_(2.5)暴露时间的延长大鼠肺组织中胶原产生受到抑制,PIN1的蛋白表达在组织和细胞中随暴露时间的延长和浓度的增加均下调(P0.05),PIN1的mRNA表达均上调(P0.05);p-Akt表达随PM_(2.5)浓度的浓度的增加受到抑制(P0.05)。研究发现PM_(2.5)能够在蛋白水平抑制PIN1以及p-AKT的表达。     

HIF-1α对宫颈癌细胞迁移能力的影响

将表达野生型HIF-1α(fl HIF-1α)和抑制性HIF-1α(dn HIF-1α)的重组质粒pcDNA3.1-fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染入SiHa细胞中表达,采用免疫细胞化学法和Western blot检测重组质粒转染SiHa细胞后其HIF-1α与CXCR4表达水平的变化;划痕试验测定细胞迁移情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果重组质粒pcDNA3.1fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染SiHa细胞后,pcDNA3.1-fl HIF-1α转染组(fl组)HIF-1α蛋白表达水平与其他三组比显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.05),而pcDNA3.1dn HIF-1α转染组(dn组)与pcDNA3.1组和未转染组相比无统计学差异(P＞0.05).但fl组和dn组其CXCR4蛋白水平的表达与pcDNA3.1组和未转染组相比均有较明显的差异(P＜0.05).fl组迁移能力略高于对照组(P＞0.05),dn组迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).HIF-1α能提高CXCR4蛋白的表达,从而加快SiHa细胞的迁移;而dn HIF-1α的作用正好相反.     

PTA-1~（-/-）/ApoE~（-/-）双基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的建立（PTA-1-/-/ApoE-/-）双基因敲除小鼠（double-gene knockout,DKO）模型,探讨该小鼠的繁育及鉴定方法,为进一步利用该小鼠研究相关疾病奠定基础。方法将引进的PTA-1-/-及ApoE-/-基因敲除小鼠通过杂交和互交的方法进行繁殖,以得到DKO小鼠。结果经过PCR基因鉴定的方法证实PTA-1-/-/ApoE-/-双基因敲除小鼠繁育成功。结论正确的饲养繁殖及鉴定方法是获得该DKO纯合子小鼠的有效途径。     

雪莲黄酮胶囊对低压低氧模型小鼠行为学影响及脑组织的保护作用

目的 探讨雪莲黄酮胶囊对低压低氧模型小鼠行为学的影响及其抗低氧作用机制。方法 将小鼠随机分为正常组、低氧模型组、乙酰唑胺组和雪莲黄酮胶囊组,单次灌胃给药后,在模拟海拔8 000 m环境停留9 h,采用水迷宫记录小鼠行为学变化情况,并检测线粒体膜电位及线粒体复合物,RT-PCR法检测缺氧相关基因转录水平,Western blot法检测缺氧相关基因表达情况。结果 与正常组相比,模型组潜伏时间延长,路径杂乱无序,进入原平台次数减少、运动距离百分比缩短、有效区域次数及穿越平台次数减少(P<0.05),线粒体膜电位及线粒体复合物I的活性显著降低,HIF-1α、VEGF mRNA表达水平显著提高,SOD mRNA、CAT mRNA水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,雪莲黄酮胶囊组可缩短潜伏时间,且进入有效象限的次数、运动距离百分比、有效区域次数、穿越平台次数均显著高于模型组(P<0.05),线粒体膜电位及线粒体复合物I的活性显著升高(P<0.01),HIF-1α、VEGF mRNA表达以及水平下降,SOD、CAT mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论 雪...     

热浪对Apoe基因缺陷小鼠ET-1、NO及体温的影响

对比热浪过程前后健康小鼠与ApoE-/-小鼠ET-1、NO及体温的变化,探讨热浪对ApoE-/-小鼠体温的影响机制。选取南京2001～2010年间一次实际热浪天气过程,运用气象环境模拟箱模拟,将健康小鼠与ApoE-/-小鼠分为对照组和热浪组(n=6),测定其热浪前后血管内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的含量以及体温的变化。结果显示热浪刺激后,ApoE-/-小鼠的体温、NO含量上升明显,体重、ET-1水平及NO/ET-1比值变化不大,体温变化、NO含量及NO/ET-1比值相对于健康小鼠差异显著。研究结果 ApoE-/-小鼠在热浪过程中更易受到热浪的影响,是冠心病患者更易受高温热浪影响的可能机理之一。     

Effect of UPP on the expression of VEGF and its receptors in mouse uterus during peri-implantation

On day 3 of gestation ,one uterine horn of female pregnant mouse was injected intraluminally with 5 μL 0.1μg/mL lactacystin,a specific inhibitor of ubiquitin-pro-teasome pathway (UPP),while the contralateral horn served as control ,Animals were sacrificed by cervical dislocation on day 5,6,7 of gestation ,respectively,Then the number of implanted embryos in each uterine horn was calcuated,and the expression of VEGF and its receptors was examined,The data showed that the number of implanted embryos was decreased significantly after treatment with lactacystin ,The results of RT-PCR and Western blot indicated that expression of VEGF and its receptors at mRNA and protein levels was significantly decreased in the treated uterus,menawhile,the expression of HIF-1α(the α subunit of HIF ,a transcrip-tional factor of VEGF) was reduced at both mRNA and protein levels,These data suggested that the effect of UPP on VEGF expression was realized through regulating HIF-1α expression .In addition ,UPP is likely to take part in the modulation of VEGF receptors expression ,These changes may be one of the reasons for the reduction of implanted embryos.     

PM2.5暴露诱导Wistar大鼠急性脾损伤

目的 探讨大气细颗粒物PM2.5暴露对Wistar大鼠急性脾损伤的影响。方法：PM2.5冬夏混合膜由实验室保留。将大鼠随机分为实验组和对照组（n = 8）,实验组4 h /天750 g·mL-3 PM2.5口鼻暴露处理,对照组生理盐水,5 d / 周,共2周,染尘结束24 h后处死,称重收集脾脏上清和细胞,HE染色观察脾组织形态学变化。检测脾上清H2O2含量水平。cell viabitity assay和qRT-PCR仪器检测脾细胞的Bax、BcL-2水平的表达情况。结果：HE染色结果发现,PM2.5可增加脾生发中心的淋巴细胞。PM2.5染尘后实验组大鼠体重明显低于对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。PM2.5染尘可增加脾上清H2O2含量水平。脾细胞活力和凋亡结果表明,PM2.5暴露可抑制脾细胞的增值能力以及上调Bax和Bcl-2基因表达。结论：PM2.5染尘可引起脾脏氧化损伤,促使氧化应激水平上升,发生炎症反应,增加脾细胞的增值能力,最终对脾产生一定的损害作用。     

南京地区PM2.5和PM10浓度分布特征及与相关气象条件的关系

利用2014年12月至2015年5月南京市PM_(2.5)和PM_(10)的质量浓度以及天气观测数据,研究南京市颗粒物浓度空间、时间分布特征及其与相关气象因子的关系。研究表明PM_(2.5)和PM_(10)同季节内高度线性相关,时间分布具有明显的季节性差异;PM_(2.5)与风速呈负相关关系,与降雨清除量呈正相关关系;相对湿度达到75%左右时污染最严重。研究首次将其他污染气体和相关气象因子结合起来,用逐步回归法建立PM_(2.5)预测模型,能较好地拟合冬春两季PM_(2.5)变化趋势,较准确地反映南京市PM_(2.5)的污染特征,具有一定的理论和实用价值。