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1.
转多个抗真菌蛋白基因水稻植株的获得及其抗稻瘟病菌的初步研究 总被引:20,自引:4,他引:16
用基因枪法将水稻碱性几丁质酶(RC24)基因、苜蓿葡聚糖酶(βGlu)基因、大麦核糖体失活蛋白(BRIP)基因和潮霉素(hpt)基因同时导入籼稻品种(七丝软占)中,获得了7个潮霉素抗性再生系,Southernblot证明2~3个抗真菌蛋白基因已整合到水稻基因组中.初步抗性鉴定表明R0代转基因水稻植株对稻瘟病菌的抗性有所提高 相似文献
2.
含编码类铁氧还双亲性蛋白ap1基因的转基因水稻植株的获得 总被引:1,自引:0,他引:1
利用基因枪法将含有潮霉素抗性基因(hpt),gusA报告基因和ap1基因的2个质粒(pJIMB15和pBiSAP1)共同转化同转化由粳稻品种鄂宜105号种 子在胚诱导的愈伤组织(2-3周龄)。ap1基因编码一种双亲性的蛋白。该蛋白能延缓因假单孢菌感染所引起的非寄主植物中的过敏反应。经过2轮潮霉素(30mg/L)筛选,抗性愈伤组织被转入含30mg/L潮霉素的再生培养基中再生植株。从轰击的186块愈伤组织中共再生出32株独立的转基因水稻植株(转化率为17.2%),PCR/Southern blot分析显示84%的转基因植株含有所有3个基因。 相似文献
3.
用基因枪法转化水稻获得转基因植株 总被引:13,自引:2,他引:13
从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织.将分别含有苏云金杆菌δ-内毒素基因[CryⅠA(b)]、潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织.经过筛选和再生培养,得到92个系的潮霉素抗性再生植株.点杂交结果表明97.8%的抗性植株含有hpt基因,73.9%的植株同时含有CryⅠA(b)基因和hpt基因.Southernblot杂交分析进一步证实外源CryⅠA(b)基因已经整合到水稻基因组中. 相似文献
4.
以水稻(丹粳-5号)愈伤组织为受体材料,采用基因枪法将含有GUS和HPT基因的CM2质粒导入水稻细胞.经过50mg/L的潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织,并在同样筛选压力下诱导分化成苗,获得抗性苗.共获得17个抗性克隆.GUS组织化学检测表明,有12个克隆为GUS阳性,GUS和HPT基因共表达率为70%左右.Southern分子检测证明HPT基因已整合到水稻基因组中. 相似文献
5.
生物鉴定和喂养试验证明GNA赋予转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性 总被引:1,自引:0,他引:1
参照Rao等(1998)的褐飞虱生物鉴定和喂养方法,用水稻褐飞虱生物Ⅰ型的-龄若虫食喂,用基因枪法获得2个转基因水稻纯系。这2个纯系均含有并表达潮霉素抗性基因(hpt),gusA报告基因和雪花莲凝集素基因(gna)。褐飞虱生物鉴定和喂养试验表明,水稻纯系对褐飞虱具有显著的抑制作用。具体表现为降低褐飞虱成活率和繁殖力、延缓褐虱发育以及减少褐飞虱进食是。通过褐飞虱生物鉴定和喂养试验证明,表达GNA的转基因水稻纯系对严重危害水稻生产的褐飞虱具有抗性作用。 相似文献
6.
含多种抗真菌病基因植物表达载体的构建 总被引:9,自引:2,他引:7
含有大麦核糖体失活蛋白(BRIP) 编码序列的质粒pRC24/BRIP改造后, 依次与含有水稻碱性几丁质酶基因RCH10 和水稻酸性几丁质酶基因RAC22 编码序列的质粒pABC2 以及含有苜蓿β1 , 3葡聚糖酶编码序列的质粒pAAG89 连接, 得到了中间载体pRAS10 .pRAS10再与根癌农杆菌双元载体pCAMBIA1300 连接, 得到了适合水稻转化的双元载体pRAS1300 . 利用冻融法将此表达载体导入根癌农杆菌LBA4404 中, 并准备将pRAS1300 转入水稻, 以期获得对真菌病有广泛且较强抗性的水稻品种 相似文献
7.
根癌农杆菌介导的绿色荧光蛋白基因在水稻植株中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将改良的绿色荧光蛋白(EGFP)基因插入到植物表达载体中,构建了ubi启动子驱动下的植物表达载体p13UEGFP.通过根癌农杆菌介导转化水稻的胚性愈伤组织,经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株.对T2代植株进行PCR分析、激光共聚焦显微镜检测和RT—PCR分析,结果表明,绿色荧光蛋白基因已经在转基因植株中稳定表达. 相似文献
8.
抗除草剂旱稻转基因植株的获得 总被引:10,自引:0,他引:10
以旱稻丹粳旱5-55、6-24、6-37的悬浮细胞及未成熟胚为受体材料,采用基因枪法将含BAR基因的pDM302质粒DNA导入旱稻细胞中,经PPT筛选获得抗性愈伤组织,筛选出的愈伤组织在分化培养基上再生出完整的旱稻转基因植株。Southern分子杂交分析表明,外源BAR基因已整合到水稻基因组内,抗除草剂试验结果表明,转化植株对0.01%Basta(有效成分为PPT)有一定程度的抗性,说明外源BAR 相似文献
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10.
实验对大肠杆菌PPAW-1质粒的DNA(含乙酰乳酸合酶基因)进行了提取分离与纯化,并以此质粒DNA为模板,用乙酰乳酸合酶基因的3个引物5′-B.n.、3′-MW-1和3′-B.n.,通过PCR扩增得到了乙酰乳酸合酶基因的大片段,克服了用2个引物不能扩增合成乙酰乳合酶基因的困难. 相似文献
11.
绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒pGL2-GS导入农杆菌菌株LBA4404(pTOK233),两个质粒发生同源重组,形成一个元载体pTOK233-GS,农杆菌菌株LBA44024(pTOK233-GS)经叶盘法转化烟草,筛选具有卡霉素抗性的愈伤组织,诱导成苗、PCR扩增发现,绿色荧光蛋白基因在90%的再生存在,在荧光显微镜下,使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现,80%以上的再生植株 相似文献
12.
类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体基因的克隆与鉴定 总被引:3,自引:2,他引:1
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从大肠杆菌TB1中扩增出类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体(SLTⅡe)的A亚单位基因(slt-ⅡeA)的960bp的编码序列和B亚单位基因(slt-ⅡeB)的107bp的编码序列,将这两个PCR扩增产物在EcoR1和BamH1位点分别克隆进PUC18质粒载体,并转化到大肠杆菌TG1中,再根据生内切酶酶切分析筛选到含有slt-ⅡeA的重组质粒P18slt-ⅡeA和含有slt- 相似文献
13.
转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
利用基因枪法将含潮霉素抗性基因、GUS报告基因和雪花莲凝集基因的2个质粒pWRG1515和pRSSGA1共同转化粳稻品种鄂宜105的成熟胚诱导的愈伤组织,从轰击的152块愈伤组织中共再生出26株独立转基因植株,PCR/Southern印迹法分析发现,73%的转基因植株含有所有3个外源基因,遗传分析证实外泊基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传,从其R1代亲本为孟德尔3:1方式遗传的R2代中,鉴定出 相似文献
14.
大肠杆菌pheA与tyrB基因的克隆与串联表达 总被引:3,自引:0,他引:3
为探讨用基因工程的手段改良苯丙氨酸的发酵菌株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法,从大肠杆菌总DNA中克隆得到了编码苯丙氨酸合成途中的两个关键酶基因-即分枝酸变位酶(CM)/预苯酸脱水酶(PD)基因pheA与苯丙氨酸转氨酶(PAT)基因tyrB,在大肠杆菌中进行了这两个基因的单个和串联表达。pheA和tyrB基因分别都能在λ噬菌体的PR启动子之后得到较大量的表达,在SDS-PAGE上出现清晰的条带, 相似文献
15.
蓝藻 Synechococcus sp.PCC7942 HCO3 - 高亲和转运蛋白操纵子基因 cmpABCD 是其CO2浓缩机制中的调控基因之一.本研究用携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hygromycin B pho transferase, hpt) 筛选标记的同源双臂整合载体pUC-HATH转化蓝藻Synechococcus sp.PCC7942,以潮霉素B作为筛选试剂筛选出具潮霉素B抗性的转化藻,运用引物PCR方法证实潮霉素B磷酸转移酶基因表达盒通过质粒pUC-HATH的介导已定点插入蓝藻 Synechococcus sp.PCC7942 基因组中,成功地构建了具有潮霉素B抗性的cmpBCD 基因插入失活突变藻株.并最终通过比较野生藻Synechococcus sp.PCC7942 和突变藻Synechococcus sp.PCC7942 在不同 Na2CO3浓度的改良BG-11培养基中生长特性,探讨了HCO3 -高亲和转运蛋白操纵子 cmpABCD 基因失活对藻体生长的影响. 相似文献
16.
水稻花发育相关MADS-box基因的克隆 总被引:1,自引:1,他引:0
以水稻幼穗总RNA为模板,利用3′-RACE克隆了8个接近于全长的水稻MADS-box 基因的cDNA.在GenBank 的数据库中查询表明,其中2个FDRMADS1,FDRMADS2分别与已报道的水稻MADS-box 基因Os-MADS5和OsMADS45有极高的同源性,另外6个为新的尚未见报道的水稻MADS-box 基因.系统进化树分析表明FDRMADS1,FDRMADS2和FDRMADS4可能与C组基因的功能相关;FDRMADS3,FDRMADS6和FDR-MADS7可能与A 组基因的功能相关 相似文献
17.
大豆花叶病毒Sc株系外壳蛋白基因的部分序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
采用多聚酶链式反应(PCR)扩增技术,体外扩增SMV-Sc株系的外壳蛋白基因并进行部分测序。结果表明:所测5'端150个核苷酸序列同已发表的SMV-BJ(北京分离物)、Sa株系同源率分别为95%和93%,3'端非编码区同BJ株系同源率为84%。 相似文献
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19.
通过酶切、连接、转化等技术,将大麦黄矮病毒抗性基因制酶基因ORF2插入Ti质粒pGA482的T-DNA区,从而提供了新的目的基因转化小麦的农杆菌/质粒系统。 相似文献
20.
以来源于苏云金芽孢杆菌的Bt-Cry1Ab/Ac基因为目的基因,以潮霉素Hyg为抗性标记基因,以绿色荧光蛋白基因GFP为报告基因的真菌表达载体,采用农杆菌介导真菌遗传转化(ATMT)法,将Cry1Ab/Ac基因插入白僵菌基因组中,先后用潮霉素B抗性筛选、荧光检测、真菌基因组PCR分子检测法、Bt-Cry1Ab/Ac基因检测试纸条多种方法进行转基因工程菌株鉴定,结果证实了目的基因成功插入白僵菌基因组,为白僵菌杀虫活性的深入研究奠定了基础. 相似文献