海洛因对大鼠胚胎发育的影响

为探讨海洛因对大鼠胚胎发育的影响.研究雌性Wistar大鼠受孕后的不同时间给予不同剂量的海洛因,于妊娠第20天,剖腹观察胚胎发育的情况.结果表明:给予海洛因20mg/kg组胎鼠中脑导水管和左右脑室增宽,大脑半球、腰椎骨、肋骨、肢掌骨发育不全,胎鼠侧脑室扩大、大脑皮质、颞叶、双侧被盖区及结合臂发育不全,枕骨缺如,脑膨出,椎骨裂开,肋骨骨化不全,四肢远端骨未骨化;30mg/kg组未见胚胎形成.结果表明:海洛因对大鼠胚胎脑及骨骼发育有明显的毒性作用,致畸程度随给药剂量增加而增大.     

气道高反应大鼠水通道蛋白与呼吸道粘液分泌的相关性研究

为观察气道高反应大鼠肺组织AQP4和AQP5的表达对呼吸道粘液分泌量和质的影响,取24只SPF级Wister大鼠随机分为3组:正常对照组；气道高反应组；气道高反应+糖皮质激素治疗组；每组8只.各组依次检测大鼠的气道粘液分泌总量、肺组织AQP4和AQP5的表达量、肺组织MUC5B的表达量,分析AQPs(AQP4、AQP5)的表达和粘液分泌量、MUC5B的表达之间的关系.结果显示,气道高反应组大鼠AQP4、AQP5的表达明显低于正常对照组,气道高反应组大鼠的气道粘液分泌总量和MUC5B的表达明显高于正常对照组,较气道高反应组经糖皮质激素治疗后肺组织AQP4、AQP5含量增多,MUC5B表达有下降,气道粘液分泌总量减少.以上结果提示,在气道高反应过程中,AQPs(AQP4、AQP5)的表达下调可增加粘蛋白MUC5B的表达和气道粘液分泌量.     

复方苦参联合5-氟尿嘧啶调控细胞周期蛋白D1抑制乳腺癌生长作用的研究

为了解苦参联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡及对Cyclin D1表达的影响,采用流式细胞术观察联合用药组(复方苦参+5-Fu)和对照组(二甲基亚砜DMSO+5-Fu)处理后MCF-7细胞凋亡的情况;采用免疫印迹法(Western Blot)观察两组MCF-7细胞Cyclin D1的表达;采用CCK-8细胞增殖实验观察两组MCF-7细胞增殖情况;采用RT-PCR观察两组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA的表达;建立裸鼠荷瘤模型,并观察两组肿瘤组织中Cyclin D1的表达.结果联合用药组处理的MCF-7细胞凋亡(12.7%)高于对照组(6.2%),差异显著.联合用药组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的蛋白表达均低于对照组;联合用药组MCF-7细胞的增殖能力低于对照组(P0.05);裸鼠荷瘤后,联合用药组的直径为(79.8±10.3)mm,明显小于对照组的直径(176.7±26.2)mm(P0.05).说明苦参可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中Cyclin D1的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖,加速MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与抑制Cyclin D1的表达有关.     

GAS41基因在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱

为了深入研究GAS41在胚胎发育中的作用机理,应用生物信息学软件分析了斑马鱼GAS41基因的序列特征;采用RT-PCR、整体原位杂交和整体免疫组织化学方法检测其在斑马鱼胚胎发育中的时空表达谱.结果显示斑马鱼GAS41蛋白与人类、小鼠、大鼠同源蛋白都有91.2％的同源性,具有高度的保守性.RT-PCR结果表明GAS41在检测的成体组织中均有表达,表达丰度相当.而GAS41在胚胎受精后一直持续表达,其中受精4h后表达量升高.整体原位杂交和免疫化学结果显示GAS41特异性表达于胚胎头部,尤其是中脑、间脑(眼部)、小脑和后脑表达明显.这些都提示GAS41是一个高度保守基因,在斑马鱼中枢神经系统发育过程中可能起重要作用,同时也为GAS41在胚胎发育调控中的作用机制提供实验基础.     

青春期大鼠接触雌激素下调乳腺癌中NF-κBP65表达

为观察青春期大鼠接触雌激素如辛基酚（OP）或三羟异黄酮对乳腺癌中NF-κB的影响,通过免疫组织化学、RT-PCR、Western blotting和电泳迁移率改变实验（EMSA）等方法观察雌激素影响大鼠乳腺癌中NF-κB P65的改变.结果表明NF-κB P65在细胞胞浆和胞核中均有表达,在乳腺癌组织中以胞核表达多见.与模型组（mod）比较,给予40 mg/kg辛基酚（OP40）或500 mg/kg三羟异黄酮（GEN）处理的大鼠乳腺癌中NF-κB P65 mRNA表达明显降低,且细胞核中NF-κB P65蛋白表达也明显减少,NF-κB DNA结合活性明显降低.OP及GEN降低大鼠乳腺癌发病可能与减少NF-κB P65核转位、降低NF-κB的DNA结合活性有关.     

Src真核表达载体的构建与表达

构建酪氨酸蛋白激酶Src真核表达载体,并检测其在HEK293T细胞中的表达.根据Genebank（GI：4574718）提供的大鼠Src的cDNA序列设计特异性引物,以大鼠海马总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Src的目的基因,然后克隆至真核表达载体pcDNA3.1.将筛选的阳性重组子转染入HEK293T细胞系,免疫印迹检测Src的蛋白表达水平,经限制性内切酶双酶切及测序分析,扩增的Src的cDNA成功连接入pcDNA3.1,并且序列与Genebank中一致.免疫印迹结果表明,构建的Src-pcDNA3.1可在HEK293T细胞中表达.成功构建了Src-pcDNA3.1真核表达载体,并且可在HEK293T细胞中高效表达.     

乔松素对心肌缺血再灌注后血管收缩功能的影响机制研究

揭示乔松素对心肌缺血再灌注后血管收缩功能影响的潜在机制.培养大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC),通过PDTC介导ETB受体增加,分为对照组、模型组、乔松素组(高、中、低剂量).通过分子水平与蛋白水平检测分析血管内皮相关因子ETB、AT1R、BAX、NF-κB p65、ERK的表达,并通过对各实验组别细胞凋亡率、细胞存活率、细胞迁移数等分析研究其在细胞水平的变化情况.结果显示:乔松素高剂量组细胞凋亡率显著低于模型组与其他乔松素组(P<0.05);乔松素高剂量组细胞存活率与细胞迁移数显著高于模型组与其他乔松素组(P<0.05);乔松素高剂量组ETB、AT1R、BAX、NF-κB p65、ERK在mRNA水平和蛋白表达量方面显著低于模型组与其他乔松素组(P<0.05);在血液、脑组织和肝组织中模型组ROS表达量显著高于对照组及其他乔松素组(P<0.05).研究表明乔松素可能通过抑制血管内皮相关因子ETB、AT1R、BAX、NF-κB p65、ERK的表达使得平滑肌细胞引起的血管收缩能力减弱.     

非受体酪氨酸激酶BMX对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响

为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过表达的细胞株,利用细胞成球实验检测BMX对C-33 A细胞成球能力的影响。免疫细胞化学染色显示,BMX主要在细胞浆中表达,在细胞核中也有部分表达,在HeLa、SiHa、HT-3及CaSki细胞系中BMX高表达,而在C-33A细胞中低表达。Western blot检测也得出同样的结果。将BMX过表达质粒载体转染至C-33A细胞系中,鉴定稳定过表达的细胞株(C-33 A-AcGFP,C-33 A-BMX)。对照组和BMX过表达组细胞成球实验显示,对照组球体较为松散而过表达组较为密实,两组细胞成球率无明显差异(P0.05),但是过表达组球体直径明显大于对照组(P0.001)。上述结果表明:非受体酪氨酸激酶BMX促进宫颈癌C-33 A细胞的成球能力。     

染料木素对CUMS诱导的抑郁症的抑制作用及机制

为探讨染料木素(Genistein)在慢性不可预知温和应激(CUMS)诱导的抑郁症模型大鼠中的抗抑郁作用及可能机制,对照组Wistar大鼠给予CUMS处理;溶剂组给予CUMS和1%乙醇处理;低剂量组给予CUMS和5 mg/kg/d Genistein处理;高剂量组给予CUMS和20 mg/kg/d Genistein处理。处理10周后,测定大鼠体重增加量、血液皮质酮、行为、脑源性神经营养因子(BDNF)表达量、细胞外信号调节激酶(ERK)与环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化程度。结果显示,Genistein提高了CUMS诱导的抑郁症模型大鼠体重增加量、蔗糖偏好率及海马与前额皮质的BDNF表达量、ERK及CREB磷酸化程度,同时降低了大鼠水中悬浮时间(P0.05);Genistein对抑郁症模型大鼠的移动距离影响不明显(P0.05)。研究表明Genistein可有效改善CUMS诱导的抑郁症,其机制可能与海马和前额皮质BDNF表达升高、 ERK和CREB磷酸化增加有关。     

帕罗西汀对酒精依赖性抑郁及小胶质细胞激活的影响

探究帕罗西汀对酒精依赖性抑郁及小胶质细胞活化的影响。用连续酒精蒸汽处理法建立酒精依赖大鼠模型,10天造模过程中,每天急性酒精蒸汽处理大鼠模型3 h,第11天开始检测各分组行为学变化。实验结束后取血清测皮质酮含量,取脑组织,行免疫组化及蛋白、mRNA表达分析。结果显示:酒精依赖组与对照组和帕罗西汀治疗组相比,大鼠强迫游泳实验中绝望行为时间明显增加[Wistar:(49±8.5)s比(19±3.6)s、(25.3±2.5)s;WKY:(55.3±7.5)s比(27.7±2.5)s、(36±4)s],且具有统计学意义(P0.01);酒精依赖组与对照组及帕罗西汀治疗组比较,糖水偏爱度显著降低[Wistar:(48.9±7)%比(91.7±5)%、(86.5±8.7)%;WKY:(40.2±4.8)%比(80.5±4.9)%、(77.3±4.6)%](P0.01)。酒精组WKY大鼠血清中皮质酮含量与对照组和帕罗西汀治疗组相比显著升高[Wistar:(491.3±34.8)ng/mL比(400.7±31.9)ng/mL、(292±32.7)ng/mL;WKY:(621.7±29.5)ng/mL比(474±24.2)ng/mL、(297.3±37)ng/mL](P0.05或P0.01)。酒精依赖组与对照组和帕罗西汀治疗组相比,WKY大鼠海马区单位面积小胶质细胞数量无明显变化[(16±2)比(17.3±2.5)、(13.3±2.1)],而小胶质细胞活化程度增加,活化标志蛋白Iba-1表达量酒精依赖组与对照组和帕罗西汀治疗组相比有显著性差异[(1.62±0.2)比(0.55±0.05)、(0.99±0.13)](P0.01)。酒精依赖组与对照组和帕罗西汀组相比,WKY大鼠海马区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量明显增高[TNF-α:(2.45±0.42)比(1±0.25)、(1.27±0.13);IL-1β:(2.95±0.43)比(1±0.21)、(1.76±0.13)](P0.01)。WKY大鼠前额皮质TNF-α和IL-1β含量也明显增高[TNF-α:(2.06±0.15)比(1±0.15)、(1.29±0.15);IL-1β:(3.3±0.6)比(1±0.3)、(1.46±0.32)](P0.01)。研究表明帕罗西汀可缓解酒精依赖引起的大鼠行为学改变,可能通过抑制小胶质细胞激活和炎性因子表达完成。     

关于长寿命mRNA的研究──（Ⅵ）CPA对绿豆种子中预存mRNA转译的调控作用及其诱导胚轴下端膨大的显微结构观察

应用转录抑制剂放线菌素Ｄ和转译抑制剂环己亚胺为工具进行的实验表明，绿豆种子中预存ｍＲＮＡ的转译可以受到ＣＰＡ的调控，表现为诱导过氧化物酶同工酶出现新的酶带和幼苗胚轴下端产生膨大并进而形成愈伤组织，对ＣＰＡ诱导的上述形态效应进行了显微观察．     

原花青素对CIA大鼠足爪组织中MMP-9蛋白表达的抑制作用

研究原花青素对胶原性关节炎（CIA）大鼠足爪组织中基质金属蛋白酶MMP-9表达和CIA大鼠血清中炎症因子含量的影响,探讨其治疗CIA的可能机制．用鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠成功建立大鼠CIA模型,随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组、原花青素（1．2rag／kg、6．0mg／kg和30mg／kg）药物处理组．各组大鼠足爪组织中MMP-9蛋白的表达用免疫组化法检测,大鼠血清中TNF-α、IL-1B和VEGF的含量用ELISA法检测．6．0mg／kg和30mg／kg原花青素能显著下调CIA大鼠足爪组织中MMP-9蛋白的表达（P〈0．01）,明显降低血清TNF-α、IL-1B和VEGF的水平（p〈0．01）,且呈剂量依赖性,而原花青素（1．2mg／kg）对以上指标无明显变化．原花青素（6．0mg／kg和30mg／kg）对大鼠胶原性关节炎有明显抑制作用,其机制可能与其下调胶原性关节炎大鼠足爪组织中MMP-9蛋白表达,抑制促炎性细胞因子TNF-α、IL—B和VEGF的水平有关．     

大鼠睾丸特异表达新基因Lrrc18的克隆及表达谱分析

运用数据库消减杂交(Digital Differential Display,DDD)分析方法,从大鼠睾丸组织中分离出了一个新基因-Lrrc18(GenBank登录号:BC081908).该基因定位于大鼠染色体16p16区带,gDNA在染色体上跨度40 900 bp,含6个外显子,编码一个含256个氨基酸的蛋白,带有4个LRR(leucine-rich repeat domain)结构域.Northern杂交结果显示Lrrc18只在睾丸中表达.对出生后3~56 d不同时期的大鼠睾丸的Lrrc18基因的表达进行检测,结果表明在大鼠出生后21 d时开始在睾丸组织中可检测到Lrrc18的mRNA表达,以后其表达量逐步上升,到42 d时达到最大值.该结果提示:Lrrc18基因在精子的发生过程中可能起重要作用.     

大花杓兰根结构的扫描电镜研究

用扫描电镜观察大花杓兰(Cypripedium macranthon SW)根的解剖结构。大花构兰根为丛生根,根纤细,横断面呈圆形,两层表皮细胞呈正五、六边形,表皮和皮层间无根被。皮层由四～五层较大细胞组成,细胞间有三角形胞间隙。中柱内木质部与韧皮部放射状交替排列,木质部脊有五个,为多原型。     

大白鼠听觉皮层锥体神经元形态学特性的研究

以大白鼠为实验材料，利用Ｂｉｏｃｙｔｉｎ作为示踪素，在Ｖｉｔｒｏ水平上采用细胞内注入的方法，揭示其听觉皮层锥体神经元的形态学特性。     

白芍总苷对NAFLD大鼠肝脏NF—kB／p65蛋白表达及羟脯氨酸含量的影响

目的：观察白芍总苷（TGP）对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝NAFLD大鼠肝组织核转录因子-κB（NF-κB）和羟脯氨酸（Hyp）及血清血清谷草转氨酶（AsT）、谷丙转氨酶（ALT）、还原型谷胱甘肽（GSH）和白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白介素-6（IL-6）水平的影响．方法：结果：TGP200mg·kg-1组能明显降低NAFLD模型组大鼠血清ALT和AST水平和提高GSH含量（P〈0．01）、能明显抑制肝组织中k的阳性表达及Hyp的生成（P〈0．01）、使血清IL-1B、TNF-a和IL-6水平明显降低（P〈0．01）、使肝脏的病理学改变明显减轻．TGP100mg·kg-1对上述指标无明显改变．结论：TGP能明显改善NAFLD大鼠的肝功能及病理性变化,其机制可能是通过下调NF-κB／p65的表达、降低血清IL-1β、TNF-n和IL-6水平、抑制肝脏Hyp的产生,从而对NAFLD大鼠发挥治疗作用．     

LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建

LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达.