应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

应用PCR技术检测柑桔黄龙病

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称PCR技术是近年来国内外应用来检测植物病毒类细菌(BLO)和类菌原体(MLO)最先进、最灵敏的方法。以检测柑桔黄龙病为例,其简单原理及程序如下: 原理:只要植株体内含有极微量的黄龙病原DNA,把     

聚合酶链式反应（PCR）技术研究新进展

聚合酶链式反应(PCR)在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用．文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述,其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用．     

DNA体外扩增技术——聚合酶链式反应(PCR)

PcR(PolymeraseChainReaction)译为聚合酶链式反应,是近年来发展起来的一种DNA体外扩增技术．具有快速,简便和特异性强的优点,在分子生物学研究方面的应用具有广阔的前景．本文简要介绍了PCR技术的原理,影响因素及其应用．     

一步法快速分离鉴定肿瘤干细胞的单细胞微流控芯片

应用多层软光刻技术, 以聚二甲基硅氧烷（PDMS）作为芯片材料, 制作一种新型的可用于单细胞鉴定研究的微流控芯片（60 mm×40 mm×4 mm）. 将肺癌细胞A549无血清悬浮培养富集肿瘤干细胞, 制成单细胞悬液, 与逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)的反应液混合后通入芯片, 细胞随机分布在2 048个微腔室中裂解并进行RT PCR. 该芯片集细胞捕获、 分离、 裂解及聚合酶链式反应(PCR)于一体, 实现了一步法快速鉴定肿瘤干细胞的目的, 通过统计阳性小室数可计算出肿瘤细胞中肿瘤干细胞的比例.     

PCR技术在分子生物学中的应用

PCR方法(Polymerase China Reaction),即聚合酶链式反应,又称体外基因倍增,它在分子生物学中有着广泛的应用。文中主要讨论了PCR技术在辅助构建跳跃及连锁文库(Jumping andLinking Library),染色体走步(Chromosome Walking),基因修饰(Rene Modification),重组PCR(Recombinant PCR),足迹法(Footprinting),进行克隆(Cloning)和亚克隆(Subcloning)诸方面的应用,同时指出了PCR技术存在的不足,尚有待于改进。     

检测细胞色素P-450基因族中CYP1A1基因表达的一个简捷方法

NMR1系雄性小鼠被用来研究肺微粒体细胞色素P450家族中一个同功基因CYPlAl在香烟烟雾的诱导下表达．双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1Al的转录水平．代表CYPlAl蛋白活性的7-乙氧基试卤灵-0-去乙基酶(EROD)的活性被用来检测基因CYPlAl的表达．双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYPlAl的转录水平．测试结果表明在吸入香烟烟雾的情况下。小鼠肺微粒体EROD的活性和基因CYPlAl的转录水平是同步增加的．这个结果不同于以前在同样实验条件的一个自相矛盾的结果，即在CYPlAl蛋白增加时，基因CYPlAl的转录水平却是下降或不变．这说明本文所使用的方法可能要优于以前的实验方法.     

应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应（PCR）的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

原位PCR技术在植物学中的应用

随着聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术和分子水平生物技术的发展,综合了原位杂交(Insitu Hybridize,ISH)和PCR双重优点的原位PCR(Insitu polymerase chain reaction,IS-PCR)在越来越多的领域得到应用,或者具有巨大的应用前景。目前关于IS-PCR的报道主要集中在动物学和微生物学等领域,植物学领域较少。现从植物外源基因的检测、基因定位、高分辨率的DNA物理图谱的构建和植物种属关系的鉴定等方面就IS-PCR技术在植物学中的应用进行了综述。     

聚合酶链式反应递缩基因组文库以克隆抗生素生物合成基因簇

在克隆阿维菌素(avermectin)生物合成基因簇的过程中,探索出了一条运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对链霉菌基因组文库进行递缩法筛选、以克隆抗生素生物合成基因簇的新方法.依次以96孔培养板整板混合质粒、单排混合质粒和单个菌落为模板进行PCR扩增,以逐步递缩的方式定位包含目的基因的克隆.结果表明,与传统的菌落原位杂交方法相比,该方法具有简单、快捷、准确率高等优点.     

新疆绵羊β-乳球蛋白(BLG)5′端调控区的克隆与序列测定

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从新疆绵羊全血中扩增了β-乳球蛋白5′端调控区890bp的片段.通过T4 DNA连接酶将其连接于质粒载体pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中.提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定,证明重组质粒pT-BLG中含有β-乳球蛋白5′端调控区基因片段.经核苷酸序列测定,克隆的片段与发表的基因序列高度一致.     

现代分子生物学技术在环境监测中的应用

以现代分子生物学技术为代表的生物技术由于其快速、便利、特异性高等优点,在环境监测领域具有广阔的应用潜力。通过简要综述聚合酶链式反应技术(PCR)、环介导等温扩增法(LAMP)、核酸分子杂交技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)、生物芯片技术、生物传感器等6种现代分子生物学技术的基本原理和在环境监测中的应用,让广大环保工作者对现代分子生物学技术有一定的了解。     

环境工程中微生物分析方法研究进展

本文阐述了环境工程中常用的微生物分析方法原理及其应用,重点介绍了目前应用较多的聚合酶链式反应(PCR)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、PCR-DGGE分子生物学分析方法原理,探讨了PCR-DGGE技术在国内外环境工程中的应用,分析了微生物分析方法的现状以及PCR-DGGE技术用于生物处理系统中微生物群落多样性和动态性研究的现状、前景和改进的策略。     

中药材人参鉴定技术方法的研究与评价

主要探讨现有的人参鉴定传统方法和分子生物学方法在鉴定过程中的准确性和客观性,综述了聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、随机扩增多态性DNA标记(Randomly Amplified Polymorphic DNA,RAPD)、限制性片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)、扩增片段长度多态性分析(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)、多位点探针DNA指纹图谱和微卫星标记技术(SSR)等在人参物种鉴定中的应用,并对每种技术进行了相应的评价.     

DNA检测方法在鱼类物种鉴定中的应用

总结了近年来在鱼类物种鉴定中常用的DNA序列分析、DNA指纹技术、物种特异性聚合酶链式反应和实时荧光PCR技术等DNA检测方法,同时对各类方法的特点和局限性进行了分析．     

牛肉及其制品中肉类掺假的荧光PCR鉴别体系优化

根据可能用于牛肉及其制品掺假的肉类原料(猪肉、鸡肉和鸭肉),设计了4对引物和探针.经过测试其具有良好的特异性后,对影响各自聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的5个影响因素包括Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶活、dNTPs浓度、引物和探针浓度以及模板DNA用量等进行了优化,确定了最佳的PCR扩增体系.同时,根据优化后的结果,对特异性进行进一步的测试,并使用建立的优化荧光PCR鉴别体系对混合样品和市售样品进行检测,确定整体检出限为0.1%(质量分数),并证明该鉴别体系的实际应用价值.     

中国明对虾ALFFc基因的原核表达与抗血清制备

利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术克隆了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗脂多糖因子(ALFFc)基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-ALFFc原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)筛选法获得了1株高表达量重组菌,并通过实验确定其最佳诱导条件为:菌液初始OD6000.7,IPTG终浓度0.8 mmol/L,培养温度37℃,诱导时间3 h.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,为进一步研究ALFFc的功能奠定了基础.     

PCR法对结核杆菌早期检测的评价

<正> 近年结核病的发病率呈上升趋势,因而结核杆菌的快速诊断给结核病的防治起了重大作用。聚合酶链式反应(PCR)以其快速、敏感、特异等特点从众多结核杆菌检测方法中脱颖而出。我们同时用PCR法与直接涂片法对536例临床标本进行检测,其中54例用培养法进行了检测,对PCR技术在结核杆菌早期检测的价值进行评价,并对PCR假阳性结果产生的原因作初步分析。     

聚合酶链式反应仪基座的热阻建模与分析

对聚合酶链式反应仪(PCR)基座中温度变化规律进行数学建模,求出其过程热阻值,并利用该热阻值对类似模型的温度场进行仿真计算,从而快速地得出考虑若干关键参数的复杂模型的温度场.计算结果显示,PCR仪基座的过程热阻与其自身的导热热阻存在某种关系,进而提出一个对于该关系的假设和数学描述,最后对该假设应用的可行性进行数值计算证明.     

油田硫酸盐还原菌APS-MPN-PCR快速定量检测方法

为了解决现有油田污水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高的问题,应用聚合酶链式反应(PCR)技术与倍比稀释法(MPN)相结合的APS-MPN-PCR法,对硫酸盐还原菌进行快速定量检测.从污水中制备了直接用于PCR扩增的菌液,保证了定量检测的准确性;建立以腺苷酰硫酸还原酶基因(APS)为靶位点的通用探针APS7F和APS8R的反应体系和扩增条件.研究结果表明,与液体稀释培养法相比,该方法检测灵敏度提高了两个数量级,操作时间缩短(整个检测过程只需要3~4 h),检测费用也降低.该方法检测结果非常稳定,真实的表征了污水中实际的SRB菌数量,可以在生产中应用.