青蒿水提液对肺癌A549细胞的影响

目的研究青蒿水提液对肺癌A549细胞株增殖的影响和诱导凋亡的情况。方法不同浓度青蒿水提液作用于细胞不同时间，四甲基氮噻唑蓝（MTT）法检测吸光度值（A490nm）并计算增殖抑制率；AnnexinV-FITC／PI荧光染色后流式细胞仪检测细胞凋亡率；并以荧光显微镜观察细胞形态改变情况；蛋白质印迹法分析细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表这。结果青蒿水提液呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞增殖；荧光显微镜下A549细胞出现不同时期凋亡特征性改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率随着药物浓度增加而升高；A549细胞株的Bax蛋白表达量增多、Bcl-2蛋白表达量下降。结论青蒿水提液促进体外培养的A549细胞株增殖抑制并诱导凋亡，其机制可能与A549细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠情绪行为的影响

目的研究刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠学习记忆行为的影响及可能机制。方法将72只周龄、大小相近的雄性BALB／c小鼠采用随机数字表分为生理盐水对照组与不同数量（3×10^3／ml、3×10^4／ml、3×10^5／m1）弓形虫RH株感染组，每组18只。于感染第5周从每组各随机抽取6只分别进行高架十字迷宫实验、旷场实验及强迫游泳实验，观察各组小鼠在实验中情绪行为变化。并记录各项指标进行统计分析。结果在高架迷宫试验与旷场实验中，3×10^3／ml弓形虫感染组小鼠与生理盐水对照组小鼠比较，各项行为学指标无明显差异。在3×10^4／ml、3×10^5／ml弓形虫感染组小鼠与对照组小鼠比较出现明显降低（P〈0．05）．以3×10^5／ml感染组最为明显，其小鼠运动活力（0E＋cE）、进入开放臂次数比例（OE％）、开放臂停留时间比例（OT％）小鼠爬行总格数、中央格在总格数中比例分别为11．08±2．12、28．73±0．59％、25．62±2．33％、32．30±17．26、2．42±0．65％。在强迫游泳试验中，各弓形虫感染组小鼠游泳的静止时间均高于对照组小鼠（P〈0．05），3×10^5／ml感染组静止时间最长，达226．6±1．9S。结论刚地弓形虫RH株感染可引起小鼠情绪行为改变，具有焦虑抑郁倾向。     

氧化苦参碱对人宫颈癌SiHa细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究氧化苦参碱对体外人宫颈癌SiHa细胞株增殖活性及凋亡的影响。方法对人宫颈癌SiHa细胞株进行体外培养,经氧化苦参碱处理的细胞组为实验组,未经处理组为对照组。采用MTT细胞存活实验检测氧化苦参碱对入宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖影响,并计算IC50;倒置相差显微镜下观察不同浓度的氧化苦参碱作用48h后SiHa细胞的形态改变;Hoechst33258染色法和Western blot法检测氧化苦参碱对SiHa细胞核及凋亡相关蛋白(P53、Bax及Bcl-2)表达水平的影响。结果 MTT结果显示氧化苦参碱剂量-时间依耐性抑制人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖(P0.05),计算24 h、48 h和72 h的IC50分别为(1 028.41±3.57)μg/ml、(701.72±6.01)μg/ml和(406.88±2.15)μg/ml;氧化苦参碱处理48 h后,SiHa细胞的形态特征及数目发生显著变化,且随氧化苦参碱浓度的增加而愈加明显;Hoechst33258染色证实氧化苦参碱处理后SiHa细胞发生凋亡,可见典型的凋亡特征;Western blot结果证实氧化苦参碱(700μg/ml、1 600μg/ml)处理48 h后,和对照组比较,药物处理组细胞凋亡周期蛋白P53、Bax表达上调(P0.05),而Bcl-2表达下调(P0.05),Bax/Bcl-2的比率明显增加(P0.05)。结论氧化苦参碱可抑制体外人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖活性发挥其抗肿瘤作用,其作用机制可能诱导SiHa细胞的凋亡有关。     

齐墩果酸抑制肝癌细胞QGY增殖和诱导凋亡的作用研究

目的研究齐墩果酸对人肝癌细胞QGY增殖的作用及与细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）关系。方法将浓度分别为40、80、100μg／ml齐墩果酸作用肝癌H细胞QGY24h后，DAPI染色，以荧光显微镜观察细胞形态变化；以11组不同浓度齐墩果酸（5—400μg／ml）作用QGY细胞24h后，用四甲基偶氮唑蓝（Myr）法检测QGY增殖情况；分别以不同浓度齐墩果酸（80、100、120μg／ml）作用QGY细胞24h后，流式细胞仪检测细胞周期改变、细胞凋亡率和[Ca2＋]i。结果细胞增殖被抑制并发生凋亡：不同浓度齐墩果酸能够抑制QGY细胞株增殖，且在5—120μg／mL范围内呈剂量依赖性，药物作用细胞24h、48的Ic50分别为76．27μg／mL和66．56μg／mL；处理组细胞周期在s期产生阻滞、细胞内[Ca2＋]i较对照组显著增加，细胞凋亡率和[Ca2＋]i与药物浓度存依赖关系。结论齐墩果酸能够抑制肝癌细胞QGY增殖和诱导其凋亡；诱导凋亡可能与细胞内[Ca2＋]i增加有关。     

儿茶素对晚期糖基化终末产物诱导的内皮细胞凋亡的干预作用

目的探讨儿茶素对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导内皮细胞凋亡的干预作用。方法糖孵育法制备晚期糖基化终末产物，分离肾血管内皮细胞，将内皮细胞分成空白对照组、AGE组、浓度分别为10、15、20μg／ml的儿茶素组共五组。实验末，采用AlamarBlue还原法测定同内皮细胞增生活力，TUNEL法测定细胞凋亡率，生化法测定培养上清中·OH、MDA浓度，RT-PCR测定Bcl-2mRNA表达，Western-Blotting测定Bcl-2蛋白活性。结果与对照组相比，AGE组内皮细胞增生活性、Bcl-2基因与蛋白活性显著降低（P均〈0．01）；凋亡率、·OH与MDA浓度显著增加（P均〈0．01）；与AGE组相比，儿茶素各浓度组内皮细胞增生活力与Bcl-2基因与蛋白活性表达增高，凋亡率、·OH与MDA浓度降低；儿茶素各剂量组之间呈浓度梯度效应。结论儿茶素可降低AGEs引起的血管内皮细胞凋亡，其机制可能是通过有效清除活性氧自由基、上调Bcl-2mRNA与活性蛋白表达，阻断内皮细胞内过氧化物的堆积二种途径实现的。     

MPTP慢性帕金森病小鼠海马内氧化应激与细胞凋亡蛋白的表达

目的 观察 MPTP慢性帕金森病小鼠海马氧化应激指标及细胞凋亡相关蛋白的表达.方法 应用MPTP制备慢性帕金森病模型,观察行为学改变,Morris水迷宫实验,检测模型组和对照组小鼠海马内超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）舍量变化,以及免疫组织化学方法、RT-PCR方法、Western blot方法检测海马Bax和Bel-2蛋白表达.结果 慢性帕金森病模型小鼠行为学特点为震颤、活动减少;水迷宫实验结果提示认知功能降低;与对照组海马比较：模型组海马SOD、GSH含量均下降,而MDA含量升高（P〈0.05）;模型组海马Bax蛋白表达增高,而Bel-2蛋白表达下降（P〈0.05）.结论 氧化应激在慢性帕全森病认知功能障碍发病机制中起重要作用,而Bax和Bcl-2蛋白参与了氧化应激诱导海马神经元凋亡的调控过程.     

姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对bcl-2及survivin蛋白表达的影响

目的 研究姜黄素对HepG2细胞凋亡的促进作用,并探讨其可能的的作用机制.方法 实验分为空白对照组、1 mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml的姜黄素处理组,MTT法检测不同浓度姜黄素对细胞增殖抑制情况；电镜观察细胞形态及其结构变化；流式细胞术检测凋亡率；Western blot检测各组作用24 h后细胞中bcl-...     

新型手性抗肿瘤药物德氮吡格（TNBG）体外抗肿瘤活性初步研究

目的观察手性旋光异构体德氮吡格（TNBG）对6株人体肿瘤细胞增殖的影响，初步探讨其抗肿瘤作用机制。方法运用MTT法检测手性TNBG对6株肿瘤细胞生长抑制情况；油红O染色法观察QGY-7701细胞中脂质聚集情况；流式细胞仪检测手性TNBG对人肝癌细胞株QGY-7701细胞周期分布和凋亡影响。结果手性TNBG能不同程度抑制肿瘤细胞增殖，且呈剂量依赖性；油红O染色提取显示QGY-7701细胞内脂质量与给药剂量呈正相关；流式细胞仪检测到有s期细胞增加，并且手性TNBG还能诱导QGY-7701细胞发生凋亡。结论手性TNBG在体外具有良好的抗肿瘤活性，其抗肿瘤作用机制可能是通过促使肿瘤细胞产生脂质聚集，抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡从而达到抗肿瘤效应。总体看（＋）TNBG体外抗肿瘤活性比（-）TNBG更强。     

香烟烟雾提取物对人内皮细胞细胞色素C氧化酶活性及细胞凋亡的影响

目的探讨香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract，CSE）对内皮细胞细胞色素C氧化酶（cytochmme Coxidase，COX）活性及凋亡的影响。方法体外培养ECV304，分别给予0％、0．5％、1％、5％CSE刺激12h，及5％CSE刺激0h、6h、12h、24h后，生化法检测COX活性；投射电镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果CSE引起COX活性下降，且随着刺激浓度和时间的增加而下降（P〈0．05）；电镜示CSE干预组细胞出现明显的凋亡形态学改变；流式细胞仪结果示不同浓度CSE分别作用12h后凋亡率依次增高，除O％CSE组和0．5％CSE组间比较无统计学意义（P〉0．05），余各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）；5％CSE作用不同时间后，随着干预时间的延长细胞凋亡率逐渐升高（P〈0．05）。结论CSE抑制内皮细胞COX活性，呈浓度和时间依赖性；CSE诱导内皮细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性；COX活性的下降可能在CSE所致的内皮细胞凋亡中具有重要作用。     

结肠腺癌中结肠癌干细胞的分离、鉴定

目的从人结肠腺癌组织中分离、鉴定结肠癌干细胞，并初步观察其生物学特性。方法利用新鲜结肠腺癌组织，无血清悬浮成球培养，流式细胞检测ESA、CD44表达情况，体外观察其诱导分化及CK20、Muc表达情况，Balb／C小鼠移植观察其成瘤情况。结果从人原代结肠腺癌中分离、纯化EpCAM^high CD44^＋结肠癌干细胞，结肠癌原代细胞中EpCAM^highCD44^＋细胞比例为1．7％～38％（平均5．4％）。单克隆形成实验证实结肠癌组织中存在肿瘤干细胞。其比例为（2．07±0．11）％，分离获得的EpCAM^highCD44^＋细胞能在无血清培养基中“成球”，在血清诱导下能贴壁分化；将EpCAM^highCD44^＋细胞移植在Balb／C裸鼠体内，表现出很强的致瘤性，移植瘤中EpCAM^highCD44^＋细胞比例为3．6％～43．2％（平均15．2％），所有的移植瘤经组织学测定，均形成腺管样结构，表达结肠特异性分化标志物CK-20、中性上皮粘蛋白（neutral epithelial mucins，Muc）。结论人结肠腺癌组织中存在EpCAM^highCD44^＋细胞群，具有和普通干细胞相类似的无限增殖、自我更新和分化能力。     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞增殖和凋亡影响

目的 观察川芎嗪对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞的增殖及凋亡的影响.方法 兔原代软骨细胞培养及鉴定,用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,利用流式细胞仪检测各组软骨细胞的周期及凋亡率；利用MTT法检测软骨细胞的生长状态.结果 与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞的凋亡率显著增加,差异具有显著统计学意义(P＜0.01)；加入川芎嗪能明显降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率,有显著统计学意义(P＜0.01)；与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞被明显阻滞在G1期(P＜0.01)；加入川芎嗪能明显降低IL-1β对软骨细胞G1期的阻滞作用,细胞增殖指数明显增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞抑制凋亡并促进生长.     

TRAIL induces proliferation of human glioma cells by c-FLIPL-mediated activation of ERK1/2

TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) induces apoptosis in TRAIL-sensitive human malignant glioma cells. We show for the first time that TRAIL stimulates cell growth in TRAIL-resistant glioma cells. TRAIL-induced cell growth in resistant cells occurred through increased cell cycle progression as determined by flow cytometry and Western blot analysis of retinoblastoma protein phosphorylation. Western blot analysis of TRAIL-treated resistant cells revealed phosphorylation of ERK1/2 proteins and in vitro kinase analysis confirmed the activation of the ERK1/2 kinases. Inhibition of MEK1 eliminated both TRAIL-induced ERK1/2 activation and cell proliferation. In addition, siRNA inhibition of c-FLIP expression eliminates TRAIL-induced ERK1/2 activation and proliferation. Furthermore, overexpression of c-FLIP_L potentiates TRAIL-induced ERK1/2 activation and proliferation of resistant glioma cells. Our results have shown for the first time that TRAIL-induced ERK1/2 activation and proliferation of TRAIL-resistant human glioma cells is dependent upon the expression of the long form of the caspase-8 inhibitor c-FLIP_L. Received 2 November 2007; received after revision 14 December 2007; accepted 21 December 2007     

Non-canonical function of Bax in stress-induced nuclear protein redistribution

Bax and Bak (Bax/Bak) are essential pro-apoptotic proteins of the Bcl-2 family that trigger mitochondrial outer membrane permeabilization (MOMP) in a Bcl-2/Bcl-x_L-inhibitable manner. We recently discovered a new stress-related function for Bax/Bak—regulation of nuclear protein redistribution (NPR) from the nucleus to cytoplasm. This effect was independent of Bax/Bak N-terminus exposure and not inhibited by Bcl-x_L over-expression. Here, we studied the molecular mechanism governing this novel non-canonical response. Wild-type (WT) and mutant versions of Bax were re-expressed in Bax/Bak double-knockout mouse embryonic fibroblasts and their ability to promote NPR, apoptotic events, and changes in lamin A mobility was examined. Our results show that, in this system, Bax expression was sufficient to restore NPR such as in WT cells undergoing apoptosis. This activity of Bax was uncoupled from cytochrome c release from the mitochondria (indicative of MOMP) and required its membrane localization, α helices 5/6, and the Bcl-2 homology 3 (BH3) domain. Moreover, enrichment of Bax in the nuclear envelope by the so-called Klarsicht/ANC-1/Syne-1 homology domain effectively triggered NPR as in WT Bax, but without inducing MOMP or cell death. Bax-induced NPR was associated with impairment in lamin A mobility, implying a connection between these two nuclear envelope-associated events. Overall, the results indicate a new MOMP-independent, stress-induced Bax function on the nuclear envelope.     

枸杞多糖对人肺腺癌 A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对体外培养的人肺腺癌细胞 A549的增殖抑制作用及其可能的作用机制.方法用不同浓度的LBP处理 A549细胞,MTT法检测24、48、72h时间点 LBP对 A549细胞的生长抑制率,实验设为对照组和实验组(1/2IC50作用48小时),MTT法绘制生长曲线、细胞计数计算倍增时间、流式细胞仪检测凋亡率及其细胞周期、RT PCR检测 SurvivinmRNA的变化、Westernblot检测 CyclinB1蛋白的变化,transwell体外侵袭实验观察药物对细胞体外侵袭的影响.结果 MTT显示不同浓度的LBP均能明显抑制 A549细胞的增殖且成剂量 效应关系,实验组细胞的倍增时间、凋亡率与对照组相比,均有统计学意义(P<0.05);LBP使细胞阻滞在 G2期,SurvivinmRNA表达和 CyclinB1蛋白的表达均降低,与对照组相比差异有显著性(P<0.05).结论 LBP可抑制 A549细胞的增殖,其机理可能与 LBP使 SurvivinmRNA表达下降引起细胞凋亡及 CyclinB1蛋白的表达降低造成细胞周期阻滞及抑制细胞的侵袭能力有关