转录抑制因子锌指蛋白57在前列腺癌组织中的表达

目的探讨转录抑制因子锌指蛋白57(ZFP57)在前列腺癌组织中的表达及意义.方法收集行前列腺穿刺活检的石蜡包埋组织标本,其中前列腺癌组织92例,癌旁组织24例,良性增生组织24例,正常前列腺组织24例.使用免疫组化法半定量检测组织标本中ZFP57的表达情况;Western blot定量检测ZFP57蛋白的相对表达量.收集前列腺癌患者TNM分期、Gleason评分、转移情况、前列腺癌特异性抗原(PSA)血清水平,分析与ZFP57表达的关系.结果免疫组化检测显示:前列腺癌组织中ZFP57阳性率明显低于本研究中其他组织标本,差异具有统计学意义(P0.01);ZFP57阳性率在正常前列腺组织、良性增生组织、癌旁组织间比较差异无统计学意义(P0.05).Western blot检测显示:前列腺癌组织中ZFP57的相对表达量明显低于本研究中其他组织标本,差异具有统计学意义(P0.01).不同TNM分期、Gleason评分、转移情况、PSA水平的前列腺癌患者ZFP57阳性率之间差异均具有统计学意义(P0.01),其中,TNM分期增加、Gleason评分增加、癌细胞转移、ρ(PSA)20 ng/m L的前列腺癌患者ZFP57阳性率明显降低.结论前列腺癌组织中ZFP57呈低表达,且与临床病理指标呈负相关;ZFP57可能作为抑癌基因参与前列腺癌的发生与发展.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达情况.方法应用免疫组化SP法检测42例原发口腔鳞状细胞癌患者的癌组织和20例口腔良性肿瘤患者正常黏膜上皮组织中Foxp3的表达,采用χ2检验进行统计学分析.结果 Foxp3阳性的CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的表达显著高于正常口腔黏膜组织,差异具有显著统计学意义(P0.01).Foxp3蛋白表达与肿瘤分化程度相关,在高、中分化组为63.64%,低分化组为100%,差异具有统计学意义(P0.05).且其阳性率与肿瘤TNM分期相关,Foxp3蛋白表达在Ⅲ~+Ⅳ期阳性率为88.24%,在Ⅰ~+Ⅱ期表达的阳性率为60%(P0.05).Foxp3蛋白表达与患者年龄、性别、淋巴结转移未见明显相关性(P0.05).结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞在口腔鳞状细胞癌中的大量浸润与肿瘤的发生、发展、浸润、转移密切相关,可能是导致口腔鳞状细胞癌患者不能进行有效抗肿瘤免疫的重要原因之一.     

人良性前列腺增生组织中基底细胞去分化与雌激素受体α表达的关系

雌激素效应增强在良性前列腺增生(BPH)发生发展中发挥了重要作用.收集20例BPH和10例正常前列腺(NP)组织标本,采用免疫组化染色和免疫荧光方法研究良性前列腺增生组织中上皮细胞角蛋白(CK)、非肌型肌球蛋白(NMMHC)、增殖细胞核抗原(PCNA)和雌激素受体α(ERα)的表达及其定位关系.结果表明,与NP相比,在BPH组织基底细胞中与干/祖细胞相关的CK14和CK5以及与去分化相关的NMMHC和ERα的表达明显增加;而且CK14、NMMHC和ERα有共定位的关系.BPH组织中部分基底细胞去分化为干性细胞;雌激素效应增加使基底细胞发生去分化是BPH发生和发展的重要机制.     

根皮素引起前列腺癌LNCaP细胞发生凋亡的机制研究

根皮素是存在于苹果、梨等水果及多种蔬菜汁液中的天然活性物质,具有抗肿瘤活性,能够有效地诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖.本研究初步探讨了根皮素诱导前列腺癌LNCaP细胞的凋亡和相关分子机制.通过形态学观察、噻唑蓝(MTT)比色实验、CCK-8实验测定前列腺癌细胞活性;采用DAPI染色法测定细胞核凝缩破裂;运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定前列腺癌细胞的凋亡率;再通过PI单染流式细胞术测定前列腺癌细胞的周期变化;以及采用Western blot检测PI3K/AKT信号通路及其下游细胞凋亡相关蛋白和细胞周期相关蛋白的表达.实验结果表明:根皮素诱导前列腺癌LNCaP细胞周期阻滞在G2/M期,并呈浓度依赖性降低细胞活性、增加细胞核凝缩破裂,显著提高前列腺癌细胞的凋亡率.在分子机制上,根皮素呈现浓度依赖性下调PI3K/AKT的活性,从而影响细胞凋亡相关蛋白和细胞周期相关蛋白的表达.因此,根皮素对前列腺癌细胞的生长有显著的抑制作用,对治疗前列腺癌具有潜在的临床应用价值.     

细胞因子IL-17E、IL-17F及其受体在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞因子白细胞介素17E(IL-17E)及其受体白细胞介素17RB(IL-17RB)、细胞因子白细胞介素17F(IL-17F)及其受体白介素17RC(IL-17RC)在正常前列腺组织(normal prostate,NP)、良性前列腺增生组织(benign prostatic hyperplasia,BPH)和前列腺癌(prostate cancer,Pca)组织中的表达差异.方法利用免疫组织化学染色法检测了6例NP、39例BPH和20例Pca标本中IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC阳性表达率,并分析配体与相应受体阳性表达率的相关性,配体阳性表达率与前列腺癌恶性程度的关系.结果在前列腺组织中,IL-17E、IL-17RB、IL-17F和IL-17RC主要表达于腺上皮细胞以及单个核细胞,少部分表达于血管内皮细胞及部分癌细胞.与BPH和NP比较,在Pca组织中,IL-17E表达明显降低,差异具有统计学意义(P0.05),且随着前列腺癌Gleason分级增加,IL-17E的表达降低;与NP比较,IL-17RB在Pca中表达增加,差异具有统计学意义(P0.01);与BPH和NP比较,IL-17F在Pca组织中表达明显增加,差异具有统计学意义(P0.05),随着前列腺癌Gleason分级的增加,IL-17F表达增强;与BPH和NP比较,IL-17RC在Pca中表达也增加,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);在Pca组织中,IL-17F与IL-17RC表达呈正相关性(r=0.633,P=0.021).结论 IL-17F可能具有促进前列腺癌发生发展的效应,而且主要是通过IL-17F—IL-17RC信号通路的激活实现的.     

肺癌患者放疗前后外周血淋巴细胞亚群变化研究

目的探讨肺癌患者放化疗前后外周血淋巴细胞亚群的变化.方法应用流式细胞仪对30例健康正常人群(对照组)和68例肺癌患者(肺癌组)放化疗前后的外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞等进行检测,并比较分析健康人群和肺癌患者的变化情况.结果肺癌组放疗前外周血中CD3~+,CD4~+,CD4~+/CD8~+,CD19~+与对照组相比均有所下降,差异均具有统计学意义(P0.05);CD8~+比例较对照组升高,且差异具有统计学意义(P0.05);而CD56~+比例较对照组升高,但结果无统计学意义(P0.05).肺癌患者放化疗后淋巴细胞亚群CD3~+降低,CD56~+有所升高,差异无统计学意义(P0.05);CD4~+,CD4~+/CD8~+较治疗前降低,CD8~+,CD19~+较治疗前升高,差异均具有统计学意义(P0.05).结论肺癌患者在疾病发生、发展过程中存在淋巴细胞免疫异常和免疫功能紊乱的现象,外周血T,B淋巴细胞及NK细胞的检测对判断患者的免疫功能有一定参考作用.     

前列腺癌的IVIM-DWI及其与MVD的相关性分析

目的:探讨体素内不相干运动弥散加权成像(IVIM-DWI)技术在前列腺癌中的诊断价值,并结合CD34病理染色结果,分析IVIM-DWI各灌注相关参数的病理生理学基础.方法:采用3.0T核磁共振对符合纳入标准的前列腺癌患者(PCa组)24例[平均年龄(74.29±7.77)岁]及良性前列腺增生患者(BPH组)21例[平均年龄(70.48±9.40)岁],行IVIM-DWI检查,应用经典双指数函数模型对所得数据进行处理分析得到相关定量参数D、D*、f值.对行根治性切除手术的前列腺癌及良性前列腺增生患者的病理切片行CD34染色并计算微血管密度(MVD).结果:PCa组中D值及f值较BPH组明显减低,而D*值明显升高,差异有统计学意义(P0.05).PCa组中D*值与MVD显著正相关(r=0.793,P0.05),BPH组中f值与MVD显著正相关(r=0.766,P0.05).结论:IVIM-DWI各相关参数(D、D*、f值)在前列腺癌与良性前列腺增生的鉴别中具有明确的诊断价值.前列腺癌中D*值的升高与前列腺癌组织内微血管密度密切相关,而f值的减低可能与癌灶中血管通透性的异常有关.     

PSAD联合PI-RADS v2在前列腺穿刺活检灰区的效用评估

目的:探讨前列腺特异性抗原密度(PSAD)联合前列腺影像报告和数据系统第2版(PI-RADS v2)在前列腺穿刺活检灰区的价值.方法:回顾分析行前列腺穿刺活检患者85例,穿刺前行多参数磁共振成像(mpMRI)检查且血清前列腺特异性抗原(PSA)质量浓度为4~10 ng/m L的患者纳入研究,进行PI-RADS v2评分和计算PSAD值,再根据穿刺病理结果,基于Gleason评分,对患者的PSAD联合PI-RADS v2评分进行统计学分析,使用受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC),评估PSAD联合PI-RADS v2在前列腺穿刺活检灰区的诊断价值.结果:85例血清PSA质量浓度为4~10 ng/m L的患者中,穿刺活检病理结果显示前列腺良性病变(包括前列腺增生、前列腺肉芽肿性病变和前列腺炎)70例(82.35%,70/85),前列腺癌15例(17.65%,15/85).前列腺癌(PCa)组和前列腺良性组PSAD、PI-RADS v2评分独立样本t检验结果显示PCa组和前列腺良性组间PSAD、PI-RADS v2评分均有统计学差异(P值分别为0.008、0.001,均0.05).PSAD、PI-RADS v2、PSAD+PI-RADS v2在诊断前列腺癌受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)逐渐增高,分别为0.721、0.842和0.869.当以PSAD质量浓度0.17ng/m L/cm3或PI-RADS v2评分≥4分为最佳截断点(cut off)时,PSAD+PI-RADS v2评分联合应用,前列腺穿刺活检灰区诊断PCa的敏感性为86.69%,特异性为64.29%.结论:血清PSA质量浓度为4~10 ng/m L前列腺穿刺活检灰区中,以前列腺穿刺病理Gleason评分为金标准,PSAD+PI-RADS v2评分联合应用,对前列腺穿刺活检灰区诊断PCa有较显著的临床价值,能够优化PSA筛查后的临床决策.     

茜草提取物对训练大鼠不同组织NO含量及血清酶活性的影响

通过建立力竭跑台训练模型,测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和不同组织中NO含量,研究了茜草提取物对大强度耐力训练大鼠血清酶活性和运动能力的影响.结果显示,与安静组比较,运动力竭组大鼠血清ALT、AST、LDH和CK活性显著升高(P<0.01),不同组织NO含量较显著升高(P<0.05);与训练力竭组比较,茜草提取物组大鼠血清ALT、AST和CK活性有较显著下降(P<0.05),不同组织NO含量较显著升高(P<0.05),使大鼠运动能力有了明显提高.     

血清hK2 ELISA方法的建立及在前列腺癌诊断中的应用

目的通过建立血清hK2 ELISA检测方法,探讨血清hK2水平对前列腺癌的诊断意义,为临床鉴别前列腺癌与前列腺增生提供一种特异、敏感、实用的方法.方法利用hK2单克隆抗体建立检测血清hK2水平的ELISA方法,并利用本实验建立的方法对30例前列腺癌患者,26例前列腺增生患者,30例正常对照的血清进行hK2水平的检测.结果 1)血清hK2水平测定值(A450nm)分别为:a.前列腺癌组(0.701±0.113);b.前列腺增生组(0.212±0.145);c.正常对照组(0.198±0.015).前列腺癌组血清hK2水平与前列腺增生、正常对照组相比较有显著差异(P<0.01).2)本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法的敏感度为83.3%,特异度为94.6%,准确度为87.2%.结论 1)前列腺癌患者血清hK2水平与前列腺增生患者及正常人血清hK2水平差异显著,不存在重叠.血清hK2水平能够对前列腺癌、前列腺增生进行鉴别诊断.2)在鉴别前列腺癌和前列腺增生方面,本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法,与临床上应用的病理学诊断方法符合率高,具有临床实用价值.     

颗粒体蛋白前体(GRN)促进前列腺间质细胞活化及雌二醇上调其表达的研究

颗粒体蛋白前体(granulin, GRN)是由多种癌细胞和成纤维细胞分泌的一种生长因子. 本研究通过实时定量RT-PCR 发现,与正常间质细胞(NAF、WPMY-1)相比,前列腺癌相关间质细胞(CAF)中GRN 的表达显著升高;为探究GRN 在前列腺癌间质细胞活化中的作用,在WPMY-1 细胞中过表达GRN 或添加GRN 重组蛋白,发现间质活化相关基因CTGF 等显著上调;另外,雌二醇(estradiol,E2)能够显著上调WPMY-1 和NAF 细胞中GRN 的mRNA 和蛋白水平. 提示,前列腺癌微环境中GRN 能促进正常间质细胞向肿瘤相关成纤维细胞的活化,且是受雌激素调节的靶基因.     

血清PSA指标与经直肠超声造影对前列腺癌的诊断

目的:探讨血清前列腺特异性抗原(PSA)指标,游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、总前列腺特异性抗原(T-PSA),前列腺特异性抗原密度(PSAD)与经直肠前列腺超声造影对前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)的诊断价值.方法:获取59例血清PSA升高的患者的f PSA及T-PSA、前列腺体积的三个径(L、W、H),所有病例均经直肠超声造影检查,并在超声引导下进行前列腺穿刺.结果:前列腺癌组患者的发病年龄要比良性前列腺增生(Benign prostate hyperplasia,BPH)组大,PSAD比BPH组高.前列腺癌组的f/T-PSA比良性前列腺增生组低.前列腺癌组患者的显影时间、达峰时间、加速时间较良性前列腺增生组患者短,绝对增强强度较良性前列腺增生组高.前列腺癌组患者的强度减半时间比良性前列腺增生组患者短.结论:前列腺癌组的前列腺造影结果表现为"快进快出".血清f/T-PSA、PSAD及经直肠超声造影技术对前列腺良恶性病变的鉴别诊断具有一定的临床价值.     

丁苯酞联合应用纤溶酶治疗进展性脑梗死疗效分析

目的观察丁苯酞联合应用纤溶酶治疗进展性脑梗死的临床疗效.方法选择急性进展性脑梗死患者60例,随机分为对照组和治疗组,其中对照组采取常规治疗(营养神经+抗血小板聚集+改善循环+对症治疗),治疗组采取常规治疗基础上加用丁苯酞注射液及纤溶酶静点,治疗10~15 d,对比观察治疗前与治疗后两组患者临床疗效.结果所有患者治疗后病情较治疗前好转,差异具有统计学意义(P0.05);治疗后患者NIHSS评分降低水平、FMA评分升高水平治疗组均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论丁苯酞注射液联合纤溶酶治疗进展性脑梗死安全有效,可显著改善患者生活质量.     

胃癌小鼠模型中T淋巴细胞检测及初步分析

为建立胃癌小鼠模型,检测T淋巴细胞在免疫系统的水平变化,探讨其在胃癌免疫系统中的作用。采用在615近交系小鼠皮下注射MFC胃癌细胞建立胃癌小鼠模型。流式细胞仪检测胃癌小鼠(n=20)及正常小鼠(n=20)脾脏CD4+CD25+Treg及T细胞亚群水平。结果显示,胃癌实验组小鼠脾CD3+T(42.87±4.33)%和CD8+T(36.55±3.15)%细胞较正常组升高(P0.01);CD4+T(55.02±2.64)%细胞及CD4+T/CD8+T(1.48±0.13)细胞比值较正常组降低(P0.01);胃癌实验组小鼠脾CD4+CD25+Treg(2.14±0.91)%细胞较正常组升高(P0.01)。由此可知,胃癌小鼠脾Treg细胞水平升高,CD4+T降低,CD3+T、CD8+T升高,CD4+T/CD8+T比值降低,可能在胃癌细胞免疫逃逸过程中发挥一定作用。     

核干细胞因子在宫颈鳞癌中的表达及意义

采用免疫组织化学方法,分析了57例宫颈鳞癌组织、39例癌旁不典型增生组织及57例正常宫颈黏膜组织中核干细胞因子(Nucleostemin,NS)蛋白的表达.结果显示:NS蛋白在正常宫颈黏膜组织、癌旁不典型增生组织及宫颈鳞癌组织中表达的阳性率依次升高,分别为15.8%、41.0%及71.9%,组间比较有显著性差异(χ2=39.015,P<0.01).此外,NS蛋白的表达与病人年龄和肿瘤直径无关(P>0.05),而与肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤分化具有明显的相关性(P<0.05),提示NS在宫颈鳞癌中的高表达可能与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关,NS蛋白检测有望成为新的诊断和治疗宫颈鳞癌的重要指标.     

外阴硬化性苔藓基底细胞核DNA含量分析

运用图像分析技术,通过Feulgen染色检测外阴硬化性苔藓组织及正常外阴皮肤组织角朊细胞基底细胞核积分光密度、DNA含量.结果显示,与外阴正常皮肤组织比较,硬化性苔藓组织的角朊细胞基底细胞核积分光密度、DNA含量明显降低,差异有显著性(P＜0.05),硬化性苔藓组织的角朊细胞基底细胞核增生能力较正常皮肤低下.     

蛋白激酶CK2β亚基在肝癌中上调表达及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响

蛋白激酶CK2,曾被称为酪蛋白激酶Ⅱ,是一种在真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,高度保守且功能多样,在细胞的生长、增殖、凋亡以及生物节律的调控中均发挥重要的作用.本文主要研究CK2β亚基在肝癌中的表达变化及其与肝癌发生和迁移的关系.用Real-time PCR方法检测了该基因在91对肝癌组织样品中的表达情况,发现其表达在69例肝癌组织中相对其癌旁组织表达上调(占总样本数的75.8%).对75对肝癌与癌旁组织样品的免疫组化分析显示,CK2β亚基在肝癌组织较癌旁组织中显著上调表达,且其表达水平与病人病理分期呈正相关.用siRNA方法瞬时消减CK2β的表达,显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖及克隆形成率,并抑制细胞的迁移.消减CK2β能增强肝癌细胞对喜树碱等多种抗肿瘤药物的敏感性.这些发现提示CK2β亚基在肝癌的生长和迁移中发挥重要作用,可作为抑制肝癌细胞增殖的潜在药物靶点,为开发新的抗肿瘤药物提供线索.     

前列腺癌细胞乳鼠移植瘤动物模型的建立

为构建前列腺癌细胞(PC3)乳鼠移植瘤动物模型,在体外培养PC3细胞,经软琼脂克隆形成实验筛选PC3细胞株中具有克隆形成能力的细胞,常规传代后取对数生长期细胞,接种约2×107 mL-1单细胞悬液0.1mL于出生2d的乳鼠颈部和前肢交界处皮下,建立移植肿瘤动物模型,观察乳鼠肿瘤生长特点,并用病理组织HE染色和免疫组织化学染色鉴定PC3在乳鼠皮下的成瘤情况.结果显示注射后乳鼠未见明显的不良反应.1~6d可见乳鼠皮下肿胀,且能触及到黄豆粒大小的肿物;7~15d肿物变大,肉眼能观察到明显肿物;16~21d时肿物有消退迹象.病理组织HE染色观察显示肿块为肿瘤组织,免疫组织化学染色显示肿物中CD133呈强阳性表达.     

人血管紧张素Ⅱ2型受体AT2R重组细胞系的构建与鉴定

目的:构建人血管紧张素Ⅱ2型受体(hAT2R)过表达稳定细胞系,探讨AT2R激动剂Compound 21等对前列腺癌细胞的作用及机制.方法:构建含hAT2R基因的慢病毒表达载体pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包装成慢病毒.将重组慢病毒载体pLV-CMV-IRES-eGFP-hAT2R感染前列腺癌细胞,并利用流式细胞术筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot方法检测重组细胞系中hAT2R表达水平,使用AT2R激动剂CGP42112检测受体功能.结果:重组慢病毒载体感染PC-3、DU145前列腺癌细胞24 h后均能观察到eGFP表达,用流式细胞术分别筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot检测结果显示目的基因hAT2R在两株重组细胞系中表达显著升高,CGP42112处理24 h后,重组细胞系细胞活力较正常PC-3、DU145细胞显著降低.结论:成功构建hAT2R过表达稳定细胞系.