绿色糖单孢菌麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达

【目的】构建高产麦芽糖α-淀粉酶的工程菌株并实现高效分泌表达。【方法】PCR扩增麦芽糖α-淀粉酶基因sva,再与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型穿梭载体pHCMCO4-Pglv连接,构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并转入枯草芽孢杆菌进行表达,对重组酶进行SDS-PAGE分析,然后对重组菌株的生长及发酵条件进行优化。【结果】成功构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并在枯草芽孢杆菌中实现分泌表达,SDS-PAGE分析发现,在55kDa处得到特异性蛋白条带。单因素试验结果显示,重组菌的最适诱导温度为35℃,最适接种量为4%(V/V),最适装液量为30mL。正交实验结果显示,重组菌的最佳发酵条件组合是诱导温度37℃、接种量5%(V/V)、装液量25mL,在此条件下发酵液粗酶活力达到257.3698U/mL。装液量对重组菌的产酶量影响显著。【结论】成功构建能高效分泌表达麦芽糖α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,经发酵条件优化后,重组酶产量显著提高10倍左右。     

PSB技术治理酒精废醪液的实践

本文以耿马糖厂采用PSB技术治理废醪液及治理末端产物对农业增产增效的实践，证明PSB技术治理废醪液对制糖业实现循环经济、推行清洁生产有一定的促进意义。     

利用枯草芽孢杆菌发酵鱿鱼内脏的工艺探讨

试验探讨了枯草芽孢杆菌对鱿鱼内脏下脚料发酵工艺的效果。利用海产品中的鱿鱼内脏作为试验的主要原料,通过辅助的添加葡萄糖作为碳源,利用枯草芽孢杆菌进行发酵实验。以发酵液中可溶性肽含量为评价指标,通过单因素和正交试验来确定发酵的最适条件。结果显示当接种量为12%,料水比为1:5,碳源添加量为10%的条件下,置于培养箱中发酵1 d,枯草芽孢杆菌能最有效的发酵鱿鱼内脏,发酵液中的可溶性肽含量到20.82 g/L;本研究为今后的微生物发酵海产品下脚料奠定了基础,使下脚料的高值利用有一定的依据,同时也缓解下脚料带来的环境污染,还能带来一定的经济效益。     

不同浓度的秋水仙碱对枯草杆菌产α-淀粉酶的影响

依次使用质量体积分数为0.01%、0.03%和0.05%的秋水仙碱诱变处理枯草芽孢杆菌,结果表明秋水仙碱抑制枯草芽孢杆菌的生长;枯草芽孢杆菌分泌α-淀粉酶的能力与秋水仙碱的浓度呈正相关.最后分析和探讨不同浓度的秋水仙碱对枯草芽孢杆菌分泌α-淀粉酶能力的影响及其作用机理,为选育优良菌株奠定基础.     

驱油枯草芽孢杆菌产芽孢条件优化

试验研究了采油微生物枯草芽孢杆菌的芽孢形成及萌发过程。结果表明,最适产芽孢培养基为(g/L):氯化钠5,牛肉膏5,酵母膏2,可溶性淀粉20。最适中间调控pH为9.0,最适中间调控温度为45℃。活菌总数达到1.6×10~9CFU/mL,芽孢数达到2.2×10~8CFU/mL,芽孢率为13.8%。对枯草芽孢杆菌进行3 L发酵罐研究,确定了芽孢形成的最佳搅拌转速为140 r/min,同时确定了芽孢在低转速下也可以萌发。     

一种枯草芽孢杆菌对副溶血弧菌的颉颃作用研究

通过液态颉颃培养法和琼脂扩散法,研究枯草芽孢杆菌对副溶血弧菌在不同浓度比例和时间维度上的颉颃作用,并确定最适宜的菌种用量。试验结果显示,枯草芽孢杆菌对副溶血弧菌有明显的颉颃作用,且枯草芽孢杆菌浓度越高,颉颃作用越明显。液态培养法中枯草芽孢杆菌与副溶血弧菌比例为100:1时最为明显,4 h抑菌率可达100%;比例为1:1时24 h后抑菌率稳定保持在80%以上。琼脂扩散法结果显示当枯草芽孢杆菌与副溶血弧菌比例大于等于1时会产生明显的抑菌圈,且抑制作用稳定持久。基于对枯草芽孢杆菌添加成本的考虑得出,不同时段枯草芽孢杆菌最适使用浓度不同。4 h内投放枯草芽孢杆菌最适浓度比为50:1;8 h内投放最适浓度比为10:1;8 h后间歇性投放浓度比为1:1的枯草芽孢杆菌。     

黄腐酸高产菌株的培养条件优化研究

对发酵蔗渣产黄腐酸(FA)的高产菌株-枯草芽孢杆菌的培养基配方及培养条件进行优化研究.获得的优化培养基配方为:可溶性淀粉、蛋白胨、磷酸氢二钾和硫酸镁的添加量分别为12.50、12.50、0.25、0.50 g·L~(-1);优化的培养条件为:pH 7.0、温度37℃、装液量20 m L/250 m L、转速130 r·min~(-1)、接种量5%(体积分数).在该优化的培养基及培养条件下,枯草芽孢杆菌培养12 h后的细胞生物量达2.280×10~9cfu·m L~(-1),较优化前提高了77.9倍.采用优化前后的条件培养菌种进行发酵产黄腐酸实验,结果优化后的发酵产品中FA含量为26.36%(质量分数),细胞生物量为1.09×10~9cfu·g~(-1),比优化前分别提高了13.9%和2.3倍.     

枯草芽孢杆菌转化鱿鱼墨制备溶栓型发酵液

利用枯草芽孢杆菌发酵鱿鱼墨制备溶栓型发酵液,在发酵温度37℃和发酵培养基pH 7.2条件下,研究了枯草芽孢杆菌接种量、发酵时间、摇床转速、葡萄糖添加量和装液量对发酵产物的溶栓活性影响.在枯草芽孢杆菌接种量2.0％,发酵时间72 h,摇床转速160 r/min,葡萄糖添加量2.0％,鱿鱼墨发酵培养基装液量50 mL(100 mL锥形瓶)发酵条件下,鱿鱼墨枯草芽孢杆菌发酵液的溶栓活性与50.9 IU/mL尿激酶相当.     

黑苦荞黄酮类化合物的提纯及抑菌活性研究

【目的】研究黑苦荞(Fagopyrum tataricum)乙醇提取物中黄酮类化合物的提纯和抑菌活性。【方法】在体积分数为80%的乙醇溶液作为萃取剂、料液比为1 g∶5 mL的条件下得到粗提物;以三氯化铝比色法测定粗提物中黄酮类化合物含量;用AB-8大孔吸附树脂对粗提物进行纯化;采用打孔法分别测定粗提物和纯化物样品液形成的抑菌圈直径和最小抑菌浓度。【结果】粗提物干膏平均得率为6.26%,黄酮类化合物的平均提取率为2.52%;通过AB-8型大孔吸附树脂纯化,黄酮类化合物的平均吸附率、平均回收率分别为79.37%,42.23%;粗提物对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)均有抑菌活性,对上述细菌的最小抑菌浓度分别为2.5,1.25和2.5 mg·m,对黑曲霉(Aspergillus niger)无抑菌活性;纯化物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为250,500和250 μg·m,对黑曲霉无抑菌活性。【结论】黑苦荞黄酮类化合物的对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌活性,对黑曲霉无抑菌活性。相比粗提物,纯化物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性明显提高。     

O/W型乳化液破乳菌发酵条件优化及破乳研究

以枯草芽孢杆菌全培养液对O/W型乳状液进行破乳效能研究.通过正交试验对枯草芽孢杆菌的发酵条件进行优化,以实现最优破乳效果.结果表明,培养温度25℃、摇床转数140 r/min、培养基pH值7.0、接菌量6%、培养时间24 h,枯草芽胞杆菌培养液中细菌生长量最高.相同培养条件,培养时间20 h,全培养液对模型乳状液的破乳效率最高,室温下48 h排油率100%.该破乳菌培养液具有良好抗酸能力及热稳定性.培养液pH值在中性及酸性范围内,枯草芽胞杆菌培养液排油率在60%以上.碱性增强至pH值为10培养液几乎丧失破乳能力.45~90℃热处理会使破乳剂破乳效率稍有降低,温度增至100℃破乳活性反而增加.100 mLO/W型原油废水中加入5 mL的枯草芽孢杆菌全培养液,30 min后排油量为62.056 mg/L,优于化学破乳剂.     

龙陵紫皮石斛花色苷色素抑菌作用初探

以龙陵紫皮石斛(Dendrobium devonianum)紫茎为试材,研究其色素的抑菌作用。用溶剂法提取花色苷,通过固体和液体培养基的试验方法,研究了龙陵紫皮石斛花色苷对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌作用。3种类型紫皮石斛花色苷对枯草芽孢杆菌抑菌作用较为显著,且抑菌作用与花色苷浓度呈正相关。抑菌作用大小为:枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌。     

枯草芽孢杆菌水剂对西瓜枯萎病的田间防效研究

本试验通过35亿活芽孢／ml枯草芽孢杆菌水剂以浸种、灌根并用的方式防治西瓜枯萎病，田间试验结果表明：枯草芽孢杆菌水剂250倍液、500倍液对西瓜枯萎病具有明显的防治效果，同时对黄瓜秧苗正常生长无任何不良影响。此外，枯草芽孢杆菌水剂还对西瓜植株具有一定的促进生长作用。     

O／W型乳化液破乳茵发酵条件优化及破乳研究

以枯草芽孢杆菌全培养液对O/W型乳状液进行破乳效能研究.通过正交试验对枯草芽孢杆菌的发酵条件进行优化,以实现最优破乳效果.结果表明,培养温度25℃、摇床转数140 r/min、培养基pH值7.0、接菌量6%、培养时间24 h,枯草芽胞杆菌培养液中细菌生长量最高.相同培养条件,培养时间20 h,全培养液对模型乳状液的破乳效率最高,室温下48 h排油率100%.该破乳菌培养液具有良好抗酸能力及热稳定性.培养液pH值在中性及酸性范围内,枯草芽胞杆菌培养液排油率在60%以上.碱性增强至pH值为10培养液几乎丧失破乳能力.45～90℃热处理会使破乳剂破乳效率稍有降低,温度增至100℃破乳活性反而增加.100 mL O/W型原油废水中加入5 mL的枯草芽孢杆菌全培养液,30 min后排油量为62.056 mg/L,优于化学破乳剂.     

抗植物软腐病枯草芽孢杆菌的高密度发酵优化

为提高菌体产量,以益生菌枯草芽孢杆菌Asr作为发酵菌株,采用正交试验法和响应面法,对枯草芽孢杆菌Asr的发酵工艺进行了优化研究。结果表明,影响菌体产量最主要的3个因素为酵母浸粉、MgSO₄和CaCl₂;最佳发酵培养基配方为蔗糖20 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母浸粉8.65 g/L,K₂HPO₄ 3.0 g/L,MgSO₄ 0.27 g/L,CaCl₂ 0.53 g/L;最佳培养条件为温度37 ℃、初始pH值7.0、接种量10%、搅拌转速250 r/min;应用优化配方及工艺,枯草芽孢杆菌Asr的最高产量达到7.30×10⁸ cfu/mL,菌体产量较优化前提高了3.95倍。研究结果可为后续菌体发酵罐的扩大培养提供技术支撑,对其他枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化研究提供借鉴。     

异戊二烯焦磷酸异构酶的表达及其催化功能验证

以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,采用聚合酶链式反应扩增法分别克隆来自大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的异戊二烯焦磷酸异构酶基因,将其在大肠杆菌BL21(DE3)中异源过量表达,验证其催化功能,并考察其对β-胡萝卜素和异戊二烯合成的影响。结果表明,来自枯草芽孢杆菌的异戊二烯焦磷酸异构酶对β-胡萝卜素和异戊二烯的产量有明显的促进作用,该酶的异源表达使β-胡萝卜素的产量由1.08mg/L提高到3.25mg/L,异戊二烯的产量由0.80mg/L提高到2.96mg/L。     

发酵海带对刺参生长和免疫及消化生理的影响

对枯草芽孢杆菌发酵海带的条件进行优化,并以此发酵海带饲养刺参,结果表明,枯草芽孢杆菌发酵海带的优化条件为发酵温度30 ℃、适宜发酵时间96 h、接种剂量12%,发酵后海带的粗蛋白含量为14.65%,相对提高了15.17%。在36 d饲养时间内,实验组在刺参的配合饲料中添加了30%的发酵海带,刺参特定生长率、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、酸性磷酸酶活性、蛋白酶活性和淀粉酶活性皆有显著提高（P<0.05）,但是,刺参体腔液细胞数量、纤维素酶活性皆无显著变化（P>0.05）,此外,刺参摄食发酵海带还导致其消化道异养菌总数减少、弧菌相对数量降低、芽孢杆菌相对数量升高。由此可见,投饲枯草芽孢杆菌发酵海带能够促进刺参生长,提高消化酶活性和免疫力,调节肠道菌群结构。     

中温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合及高效表达

从中温α-淀粉酶生产菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)264中克隆得到中温α-淀粉酶基因(amy L)并构建了重组表达质粒p AX01-amy L。该质粒转化枯草芽孢杆菌264后利用同源重组机制将由木糖操纵子引导的amy L表达盒整合入枯草芽孢杆菌染色体的lac A位点,以增加中温α-淀粉酶基因的拷贝数。经淀粉平板产酶初筛及Southern blot鉴定,成功分离获得了可高效分泌表达中温α-淀粉酶的基因工程菌ZHWY。该菌株在摇瓶发酵75 h后α-淀粉酶酶活可达到730 U/m L,比酶活为156 U/mg总蛋白,与原始菌株264相比提高了70%,且继代过程中表达水平稳定。在5 L发酵罐中,枯草芽孢杆菌ZHWY发酵所产中温α-淀粉酶酶活最高达到1450 U/m L,具有良好的工业应用前景。     

高压二氧化碳对哈密瓜汁中枯草芽孢杆菌杀灭效果研究

为探讨以新鲜哈密瓜汁为原料,研究高压二氧化碳(压力10、20、35 Mpa,温度、45、55℃)对哈密瓜汁中枯草芽孢杆菌的杀菌效果;采用透射电子显微镜观察枯草芽孢杆菌超微结构的变化。结果显示,在一定压力和温度下,枯草芽孢杆菌的死亡率随处理时间的延长而增大,温度越高死亡率也越大;应用R.xiong.建立了不同压力和温度下枯草芽孢杆菌死亡率的拟合模型,得到Af为1.0785,Bf为0.9541,SS为0.1126,RMSE为0.2278,R2为0.9756。由此可知,HPCD对哈密瓜汁中的枯草芽孢杆菌有良好的杀菌效果。     

6328(?)非相干单色光的生物刺激效应

进行了6328A非相干单色光和6328AHe-Ne激光对枯草芽孢杆菌作用的对照实验研究。非相干单色光是由普通白炽灯经过滤光而得到的,半宽度为70A。结果表明,6328A非相干单色光和6328AHe-Ne激光产生的效应定性相同,在照射剂量为3×10~(-2)(焦耳/平方厘米)时,6328A非相干单色光对枯草芽孢杆菌同样有明显的促进繁殖作用。     

不同益生菌优化组合在水产养殖中作用研究

通过优化鱼类饲料中添加枯草芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌组合比例,研究益生菌对水产养殖的作用影响。试验设对照组、枯草芽孢杆菌组(Ⅰ组)、嗜酸乳酸杆菌组(Ⅱ组)、枯草芽孢杆菌+嗜酸乳酸杆菌组(Ⅲ组2.5∶1)4个组,每组3个重复,连续喂食28d后取样。结果表明:饲料中添加益生菌能够显著提高血清溶菌酶活力,补体C3、总蛋白、白蛋白含量,白蛋白/球蛋白比值,血液白细胞数及白细胞吞噬率。益生菌对血液白细胞吞噬指数和血清补体C4含量的影响不显著。益生菌能够提高非特异性免疫能力,最佳配比组合为枯草芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌以2.5∶1的组合形式添加到饵料中。