虎纹捕鸟蛛毒素-IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究

用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ的第27位的赖氨酸的突变体K27A—HWTX—Ⅳ，通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测，摸索出其最佳氧化复性条件为：0．1mol／L Tris—HCl，pH8．0，GSH 1 mmol／L GSSG 0．1mmol／L的复性缓冲液，样品浓度为0．1mg/mL。复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定，相对分子质量为4050．63Da。生物学活性实验小鼠离体膈神经—膈肌标本测活实验表明：10μg/mL天然HWTX—Ⅳ阻断小鼠离体膈神经,膈肌接头传递时间为16min，10μg/mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经．膈肌接头传递时间为120min，残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少，证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ活性相关的残基。     

化学合成虎纹捕鸟蛛毒珠—Ⅱ基因的克隆

报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅱ基因,在克隆载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中的克隆。但ＨＷＴＸ－Ⅱ基因在表达载体ｐＧＥＸ－ＫＴ中几乎无表达,根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ基因的实验结果,对在同一表达系统所构建的ＨＷＴＸ－Ⅰ与ＨＷＴＸ－Ⅱ基因的表达产物进行比较,认为ＨＷＴＸ－Ⅰ与ＨＷＴＸ－Ⅱ在原核表达系统的表达行为上的差异有助于我们进一步探讨ＨＷＴＸ－Ⅱ的活性。     

虎纹捕鸟蛛毒素HWTX -Ⅰ和芋螺毒素MVIIA嵌合体的固相化学合成

采用Fmoc固相合成的方法,将来自芋螺的ω-芋螺毒素(ω-Conotoxin) MVIIA (N-型钙离子通道阻断剂)中已知活性位点及可能的相关序列嵌入虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX -Ⅰ) 的非活性位点区,代替其相应序列,构建同时携带两种活性位点的多肽嵌合体.嵌合体用 MALDI-TOF质谱鉴定.通过RP-HPLC检测其氧化复性过程,摸索出嵌合体的最佳复性条件.经过两次RP-HPLC脱盐纯化.结果表明,设计合成的嵌合体在1×10-5g/mL,利用小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验证明嵌合体显示了27 %的天然HWTX-Ⅰ的神经毒活性.实验结果表明,HWTX -Ⅰ具有蛋白质工程改造前景.     

虎纹捕鸟蛛雌蛛粗毒的毛细管区带电泳分离分析

采用毛细管区带电泳（ＣａｐｉｌａｒｙＺｏｎｅＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称ＣＺＥ）模式,以虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）雌蛛粗毒为样品进行电泳分离分析．对电泳缓冲溶液的ｐＨ、浓度以及有机试剂和两性离子添加剂的加入对粗毒分离的影响作了研究．结果表明,粗毒在ｐＨ１１．５,７５ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液中可以得到最佳的分离．两性离子添加剂（三甲基氨基丙磺酸）能明显改善分离效果;并在实验中确定了虎纹毒素－Ｉ（Ｈｕｗｅｎｔｏｘｉｎ－Ｉ,简称ＨＷＴＸ－Ｉ）和虎纹凝集素－Ｉ（Ｓｅ－ｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａｌｅｃｔｉｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－Ｉ,简称ＳＨＬＰ－Ｉ）在粗毒电泳图谱中的位置．     

虎纹捕鸟蛛（Selenocosimia huwena）粗毒对蟾蜍神经肌肉接头传递的影响

１０－５～１０－４ｇ／ｍｌ虎纹捕鸟蛛粗毒对蟾蜍坐骨神经肌肉标本有阻遏作用，１×１０－４ｇ／ｍｌ粗毒发生阻断的时间为３８ｍｉｎ，但不改变神经干动作电位，不影响肌肉对直接刺激的反应。阻断后肌肉对间接强直刺激仍可发生强直收缩；粗毒对蟾蜍坐骨神经肌肉标本的阻断作用表现为：初期４～５０秒的收缩增强继而转向抑制；粗毒可对抗箭毒的阻断作用；蟾蜍在体坐骨神经肌肉标本可被粗毒阻断，但阻断后可以恢复；粗毒不改变蛙腹直肌对Ａｃｈ的敏感性，粗毒中含有拟胆碱成份。箭毒可以阻止粗毒对蛙腹直肌的拟胆碱效应；该粗毒对蟾蜍坐骨神经肌肉标本的阻遏作用发生在神经肌肉接头，粗毒中含有拟胆碱组份，此组份可能通过后膜去极化阻断神经肌肉接头。     

ω-芋螺毒素 MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω-芋螺毒素MVIIA和纹捕鸟蛛毒素-I的嵌合体HM-1227，经过RP-HPLC纯化和氧化复性，小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有弱的神经毒活性。实验结果表明，ω-CtxMVIIA和HWTX-I的分子框架稳定，部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠，说明该结构模体可以作为蛋白质工程的分子框架。     

亚非马蜂（Polistes olivaceus）粗毒的生物学活性

本文报道一种新的蜂毒采集方法，测定了亚非马蜂（Ｐｏｌｉｓｔｅｓ　ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）粗毒的部分物理性状和生物学活性．该粗毒含有透明质酸酶、胆碱酯酶、蛋白水解酶、ＤＮＡ酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶，并具有很强的溶血活性（其半溶血量ＨＵ_（５０）＝１７μｇ／ｍｌ），但肝素对其溶血作用有一定的抑制作用．其对小鼠ＬＤ_（５０）为５．５４ｍｇ／ｋｇ，对美洲蜚蠊ＬＤ_（５０）为７．４５μｇ／ｇ．药理学实验表明该粗毒对小鼠的膈神经－膈肌接头的神经冲动的传递以及膈肌的收缩都有不可逆的阻断作用．该粗毒能明显抑制蟾蜍离体心肌的收缩，但其抑制作用可被阿托品所解除。     

中国大疣蛛属一新种(蜘蛛目,六疣蛛科)

记述了我国六疣蛛属一新种，命名为版纳大疣蛛（Macrothele bannaensis sp.nov.)，文中量度单位为mm，模式标本保存在湖南省生物研究所，版纳大疣蛛，新种Macrothele bannaensis sp.nov.（图Ⅰ，1-6）正模♀，云南省景洪市西双版纳自然保护区勐仑，1997年11月26日，颜亨梅采；副模4♀♀，采集地点、时间及采集人同上；1♀，采集地点同上，1999年6月26日，徐湘采。正模♀，体长16.00mm，头脑部长5.33mm，宽4.13mm；腹部长8.67mm，宽6.25mm。本新种及触形大疣蛛Macrothele palpator Pocock,1901相似，但有以下不同：1）阴门明显不同（图Ⅰ，6）；2）前者下唇宽约为长的2倍，而后者的下唇宽至多为长的1.5倍，长宽差别不如前者的显著；3）疣突数量不同，前者在下唇及颚叶上的疣突远远少于后者的（图Ⅰ，3)。     

丙氨酸扫描法探究Cn-AMP2肽结构与抗菌活性关系

为研究抗菌肽Cn-AMP2的结构与抗菌活性之间的关系，采用丙氨酸扫描法进行突变，设计一系列抗菌肽Cn-AMP2丙氨酸扫描突变体．应用生物信息学法研究突变体的理化性质参数，测定抗菌肽Cn-AMP2和突变体肽对8种革兰阴性菌和革兰阳性菌的抗菌活性，并以此为基础对抗菌肽Cn-AMP2的构效关系进行深入研究．结果表明，丙氨酸突变后，分子量和净电荷数量无明显变化，但疏水力矩有明显变化．Cn-AMP2和突变体肽抗革兰阴性菌最低抑菌浓度(MIC)为16～354μmol/L，抗革兰阳性菌最低抑菌浓度为26～250μmol/L．圆二色光谱测定表明，Cn-AMP2和突变体肽在222 nm处的摩尔椭圆率分别为-1 362,-401 deg·cm²·dmol^-1.NPN荧光探针实验表明，Cn-AMP2和突变体肽对细菌细胞外膜破坏强度有明显差异．实验结果表明，第3位丝氨酸、第4位酪氨酸、第8位丝氨酸和第11位甲硫氨酸为关键位点．     

3种捕鸟蛛粗毒的HPLC和MALDI-TOF质谱分析

对我国南方3种个体大小形态相似，颜色分别为黑色，棕褐色及金黄色的捕鸟蛛的粗毒进行了反相高效液相色谱（HPLC）及基质辅助激光解吸电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱分析，测定了由反相高效液相色谱分离的每一个肽峰的质量，分析了3种蜘蛛粗毒反相色谱行为的相似与不同之处以及分离肽片段的质量分布范围，讨论了由反相高效液相色谱结合MALDI-TOF质谱进行捕鸟蛛化学分类与种属鉴定的可能性。     

天童森林公园管巢蛛科蜘蛛的初步研究

笔者在天童森林公园采集到管巢蛛科蜘蛛２属１１种，其中红螯蛛属的环带红螯蛛和管巢蛛属的羽斑管巢蛛，双凹管巢蛛为浙江省首次报道。     

两种拟南芥coi1突变体的鉴定与初步分析

COI1(coronatine-insensitive 1)蛋白是茉莉酸信号途径的信号开关,coi1突变体是茉莉酸信号调控机制研究中的重要实验材料。对从拟南芥生物资源中心购买的两种COI1(At2g39940)的T-DNA插入突变体SALK-095916和SALK-045434,通过基因型分析筛选获得了纯合突变体。进一步的基因表达检测和茉莉酸敏感性试验表明,两种纯合突变体中COI1基因的表达量分别约为野生型植株的40%和50%,突变体幼苗对茉莉酸的敏感性显著降低。获得的SALK-095916(命名为coi1-22)和SALK-045434(命名为coi1-23)纯合突变体可以作为实验材料在进一步的茉莉酸信号途径机制研究中使用。     

α-淀粉酶/糖苷酶抑制剂产生菌株PW638的分类地位及其产物的发酵、性质与应用研究(英文)

从土壤中分离得到了一株α-糖苷酶抑制剂产生菌株PW638.通过多相分类学研究将菌株PW638初步确定为白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus).该菌经10 L发酵罐水平发酵,发酵液中可积累一定量的A-糖苷酶抑制剂.它们能够显著地抑制重组人源A-淀粉酶和糖苷酶,并能有效降低小鼠餐后高血糖.因此,对于白浅灰链霉菌PW638的进一步研究有助于新型天然A-糖苷酶抑制剂药物的研发。     

可降解膜水稻控释肥料

湖南省土壤肥料研究所研制出一种可降解膜水稻控释肥料，该成果属农业技术类研究成果，可在我国水稻种植区普遍应用，无副作用。 湖南省土壤肥料研究所利用天然、半天然高分子材料为包膜主成分，采用自行研制的流化态双喷床包膜新工艺，研制成可在30-330天内人为控制肥料养分释放的可降解膜控释肥料，该控释肥料无毒、施入土壤后的2年内完全降解，无残留，能减少肥料对大气、土壤、水体等环境的污染。     

通过紫外线诱变筛选溶磷细菌突变体

为了选育具有优良溶磷性状的溶磷细菌突变体用于磷细菌肥料的生产,使用紫外线作为诱变剂,对溶磷细菌Y2041进行诱变处理.通过平板初筛和摇瓶培养复筛,得到溶磷能力明显提高的突变体Y2041-01,该菌株溶磷圈直径(12.02 mm)与菌落直径(2.48 mm)比值达4.85,比出发菌株Y2041的平板溶磷能力(2.22 mm)提高118.47%.将Y2041-01在含有Ca3(PO4)2的无机磷培养液中培养5 d,有效磷含量达33.85 mg/L,比出发菌株Y2041(28.73 mg/L)的溶磷效果提高17.82%.通过传代培养,磷细菌突变体Y2041-01的溶磷能力可以稳定遗传.     

中国稻田狼蛛亚群落结构及多样性研究

根据对中国稻田狼蛛亚群落结构及多样性的分析，结果表明：全国稻田狼蛛共计有7属30种，中国稻田狼蛛亚群落的主要成分是水狼蛛属（Pirata）和豹蛛属（Pardosa），大多数地区共享的优势种群是拟水狼蛛（P.sub-peraticus）和拟环豹蛛（P.pseudoannulata）。但稻田狼蛛亚群落的结构和多样性特征因各稻作区的地理、气候等环境因子以及亚群落本身的组成成分的不同而异，经系统分析，可将全国各稻作亚区狼蛛亚群落组成特征划分为4大类型：（1）内陆温带型；（2）沿海亚热带型；（3）东北平原型；（4）高原温带型，稻田狼蛛亚群落结构的稳定性和多样性呈现由东南向西北、由低纬度向高纬度依次递减的规律。     

冬虫夏草菌丝体对小鼠体液免疫的影响

本文采用血清溶血素测定新方法,对兰州三爱堂解放军第一医院人工发酵培养的冬虫夏草菌丝体进行实验分析。结果表明,对正常小鼠的体液免疫功能无影响,但对由环磷酰胺引起的体液免疫功能低下有明显的恢复,说明该菌丝体与天然虫草有一致的功能。     

甘肃省踏蛛新纪录（蜘蛛目：跳蛛科）

本文报道省内跳蛛科新纪录２７种，隶于２０属。其中狐拟伊蛛Ｐｓｅｕｔｉｃｉｕｓ ｖｕｌｐｅｓ（Ｇｒｕｂｅ，１８６１），为人们不熟悉的跳蛛，特别是雄蛛触肢器的结构，在文内作了简要描述。     

甘肃天然沸石贫矿及其开发应用的新途径

近年来甘肃山丹、白银等地中生代和晚古生代地层中相继发现较大型天然沸石矿床、沸石种类为高硅型斜发沸石，品位较低，为天然沸石贫矿。经作者研究，该沸石贫矿除在建材、饲料及农田改良中作一般性应用外。其经选矿，可作为合成石油化工上广泛应用的催化剂的优质天然原料。具有巨大的开发前景和经济效益。     

甘肃白水江自然保护区跳蛛区系研究

本文记录１９９２－１９９３年４－１０月甘肃境内白水江自然保护区所辖区内跳蛛科的区系研究，共获标本３００余号，初步鉴定为３４种，隶于２２属。在区系成分上古北界种５种，占总种数１４．７％，东洋界９种，占总种数２６．４％，广布种２０种，占总种数５８．５％。