A novel salicylaldehyde dehydrosenase-NahV involved in catabolism of naphthalene from Pseudomonas putida ND6

A novel salicylaldehyde dehydrogenase involved in catabolism of naphthalene from Pseudomonas putida ND6, NahV, has been identified. NahV exhibited lower identity in amino acid sequence with the classic salicylaldehyde dehydrogenase, NahF, from P. putida ND6. This is the first report of an isofunctional enzyme of bacterial salicylaldehyde dehydrogenase. Comparison of Km and Vmax values of NahV and NahF demonstrated that NahF has a more efficient catalytic reaction than NahV, while NahV has much higher affinity for salicylaldehyde and NAD^＋. Both enzymes exhibited broad substrate specificities and catalyzed the oxidation of salicylaldehyde, 5-chlorosalicylaldehyde, formaldehyde, m-nitrobenzaldehyde, o-nitrobenzaldehyde, o-methoxybenxaldehyde, glutaraldehyde, caprylic aldehyde, and glyoxal. However, the relative rates at which the substituted analogs are transformed differ considerably. NahV activity could be enhanced by Fe^2＋, Cu^2＋ and Zn^2＋; whereas NahF activity could only be stimulated by Fe^2＋, NahF is more stable than NahV at elevated temperatures. Dot-blot hybridization analyses showed that nahF-like genes occurred in all naphthalene-degradation bacteria isolated in this study, whereas nahV-like genes were present in only some naphthalene-degrading bacteria.     

假单胞菌ND6菌株水杨酸羟化酶基因(nahG)的核苷酸序列分析和酶鉴定

水杨酸羟化酶是细菌萘降解途径中的关键酶，它能催化水杨酸脱羟和羟化，生成儿茶酚．假单胞菌(Pseudomonas)DN6菌株的萘降解基因位于102kb的质粒pND6-1上，以pUC18质粒为载体，制备了含有1～3kb pND6-1 DNA随机片段的基因库，通过DNA测序和DNA序列同源性分析，从基因库中筛选出含有水杨酸羟化酶基因nahG的克隆．nahG基因的大小为1305bp，编码的水杨酸羟化酶(NahG)由434个氨基酸组成，与Pseudomonas putida NCIB 9816-4菌株的水杨酸羟化酶基因相比，核苷酸序列的同源性为100％，与其它10种细菌的水杨酸羟化酶基因相比，核苷酸序列的同源性为32％～99％．酶学实验表明，ND6菌株的水杨酸羟化酶具有广泛的底物特异性，它不仅能代谢水杨酸，还能代谢多种水杨酸的衍生物，如乙酰水杨酸、黄基水杨酸、3-甲基水杨酸、5-甲基水杨酸和5-氯水杨酸等．     

Salt tolerance of transgenic rice (Oryza sativa L.) with mtlD gene and gutD gene

Southern blot analysis indicated that mtlD gene (encoding mannitol-1-phosphate dehydrogenase) and gutD gene (encoding glucitol-6-phosphate dehydrogenase) had been integrated into the rice genome mediated by Agrobacterium tumefaciens LBA4404(pBIGM). The expression of the above two genes in transgenic rice plants was demonstrated by Northern blot analysis and enzymatic activity assay. Analysis of sugar alcohol showed that transgenic rice plants could produce and accumulate mannitol and sorbitol. The salt tolerance of transgenic plants was much higher than that of their controls.     

2种水杨醛缩氨基酸及其10种金属配合物的杀菌活性研究

用浓度稀释法测定了2种席夫碱配体水杨醛缩甘氨酸、苯丙氨酸及其10种金属配合物对五种细菌(大肠杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、金黄色葡萄球菌)的杀菌活性。结果表明，水杨醛缩甘氨酸仅对变形杆菌和金黄色葡萄球菌有杀菌活性，而水杨醛缩苯丙氨酸对上述五种菌种均无杀菌活性。铜、锌离子与上述配体结合形成配合物后，杀菌活性明显增强，对上述五种茸种均有较强的杀菌活性。而镍、钴、锰配合物的杀菌活性则较弱或没有杀菌作用。     

Salt tolerance of transgenic rice (Oryza sativa L.) withmtlD gene andgutD gene

Southern blot analysis indicated thatmtlD gene (encoding mannitol-1-phosphate dehydrogenase) andgutD gene (encoding glucitol-6-phosphate dehydrogenase) had been integrated into the rice genome mediated byAgrobacterium tumefaciens LBA4404(pBIGM). The expression of the above two genes in transgenic rice plants was demonstrated by Northern blot analysis and enzymatic activity assay. Analysis of sugar alcohol showed that transgenic rice plants could produce and accumulate mannitol and sorbitol. The salt tolerance of transgenic plants was much higher than that of their controls.     

Bayesian mixed models and divergence time estimation of Chinese cavefishes (Cyprinidae: Sinocyclocheilus)

The genus Sinocyclocheilus is distributed in Yun-Gui Plateau and its surrounding region only, within more than 10 cave species showing different degrees of degeneration of eyes and pigmentation with wonderful adaptations. To present, published morphological and molecular phylogenetic hypotheses of Sinocyclocheilus from prior works are very different and the relationships within the genus are still far from clear. We obtained the sequences of cytochrome b (cyt b) and NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4) of 34 species within Sinocyclocheilus, which represent the most dense taxon sampling to date. We performed Bayesian mixed models analyses with this data set. Under this phylogenetic framework, we estimated the divergence times of recovered clades using different methods under relaxed mo-lecular clock. Our phyloegentic results supported the monophyly of Sinocyclocheilus and showed that this genus could be subdivided into 6 major clades. In addition, an earlier finding demonstrating the polyphyletic of cave species and the most basal position of S. jii was corroborated. Relaxed diver-gence-time estimation suggested that Sinocyclocheilus originated at the late Miocene, about 11 million years ago (Ma), which is older than what have been assumed.     

纤维素酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从城市生活垃圾中分离到一株分解纤维素能力最强,并产生胞外酶的菌株,初步确定为芽孢杆菌,并对该菌所产的纤维素酶的酶学性质进行了初步研究.该纤维素酶反应最佳温度为50℃;最适 pH7.0;酶在40～50℃热稳定性较好; CMCase活力在 pH 6.0～7.0处可保持70%以上, FPA酶活在pH 6.0～7.0处可保持79%以上; Ca2＋和Mg2＋对酶反应表现为明显的促进作用,而Fe3＋和Mn2＋对酶反应有抑制作用, Na＋、Zn2＋和K＋对酶的影响很小.     

层状分子基磁体:{[ML][Fe~ⅡFe~Ⅲ(ox)_3·1.5H_2O]}_∞的合成和波谱表征(M=Co~(2+),Mn~(2+))

合成和表征了两种新的Schiff碱配合物[CoL(ClO4)·3H2O(1)和MnL(ClO4)·3H2O(2),其中L是由摩尔比为1∶1的水杨醛和二乙撑三胺缩合而成的Schiff碱。1(或2)、FeSO4·7H2O和K3[Fe(ox)3]·3H2O进一步反应,生成了层状分子基磁体{[ML][FeⅡFeⅢ(ox)3]·1.5H2O}∞,其中M=Co2+(3)orMn2+(4)。红外光谱和Mo¨ssbauer谱测定结果表明,3和4具有二维层状结构,其阴离子层由[FeⅡFeⅢ(ox)3]-单元构成。     

间隙连接在鸡胚水晶体发育中的作用

初步报道已揭示，单克隆抗体ＮＤ６可影响鸡胚水晶体的发育，使之明显增大．ＮＤ６是一种被认为专一于膜蛋白ＭＰ２６细胞外侧段的单抗．ＭＰ２６已被认为是水晶体纤维细胞间隙连接的成份．因此，ＮＤ６很可能可阻断水晶体纤维细胞间隙连接的形成．本人试图用定量显微镜技术证实ＮＤ６对水晶体发育的影响与间隙连接数量减少之间的相关性。注射ＮＤ６于２０期鸡胚的右眼；同胚未注射的左眼作为对照．培养２４ｈ后周定，然后作下列三种处理：（１）测量整体水晶体的大小；（２）制备水晶体超薄切片，并统计间隙连接数量；（３）制备鸡胚头部的连续石蜡切片，并统计水晶体纤维细胞的数量．实验结果指出，在ＮＤ６处理２４ｈ，水晶体大小及纤维细胞数量均比对照组明显增大（表１，Ｐ＜０．０１或０．００１）；而间隙连接数量则比对照组明显减少（表２），Ｐ＜０．００１）．这表明，水晶体的增大及纤维细胞的增多是由间隙连接的减少所引起．这些结果证实，间隙连接在鸡胚水晶体的发育中起重要作用．     

缬氨酸水杨醛席夫碱3d金属配合物的合成表征和生物活性

合成了缬氨酸水杨醛席夫碱及其与Ｍｎ（Ⅱ），Ｃｏ（Ⅱ），Ｎｉ（Ⅱ），Ｃｕ（Ⅱ）和Ｚｎ（Ⅱ）的配合物，用元素分析，摩尔电导，磁化率测定，红外光谱和电子光谱的研究进行表征，应用ｐＨ法测定了配合物的稳定常数，实验发现，铜、锌配合物的抗菌活性大于配体的抗菌活性。     

铜基铈铁钇复合氧化物的制备及催化性能研究

采用反向滴定共沉淀法制备铈铁钇复合氧化物(Ce1-xFexYzO2-λ)载体,然后用等体积浸渍法负载活性组分Cu,研制铜基铈铁钇复合氧化物(Cuy/Ce1-xFexYzO2-λ)催化剂.实验结果表明:Ce:Fe:Y摩尔比为0.9:0.1:0.05、Cu负载量为3%时,制得的Cu3%/Ce0.9Fe0.1Y0.05O2-λ催化剂对CO、NO和C3H6的转化反应具有良好的催化活性,在该催化剂上CO、NO和C3H6的起燃温度(T50)分别为100℃、234℃和258℃,完全转化温度(T90)分别为183℃、318℃和350℃;由于Fe和Y能与Ce氧化物形成稳定的立方晶固溶体,载体表面不出现Fe、Y或Cu物种晶相聚集的现象,Ce与Fe和Y之间的良好协同效应有利于提高催化活性和热稳定性,因此Cu3%/Ce0.9Fe0.1Y0.05O2-λ催化剂性能良好.     

微波强化铁屑─焦炭处理活性艳红X-3B废水

以活性艳红X-3B为主要对象，在传统的内电解处理法的基础上，利用微波使铁炭床再生，强化处理染料废水，并初步探讨铁炭内电解和微波强化的作用机理。实验结果表明，在铁炭体积比为4：3，铁屑粒径为2-4mm，染液pH为5，反应时间为90min时，处理染料浓度为0．75g／L的染液，CODCr的去除率可达80％以上，脱色率也达99％。在最佳反应条件下研究微波对铁炭床的强化作用，结果显示原始的铁炭床可以重复使用4次以上，当处理效果有明显下降时，利用微波再生铁炭床2min，处理效果恢复，且还可继续使用两次，再次再生，铁炭仍有一定的处理效果。微波不仅加强了铁炭床的处理效果，还延长了铁炭床的使用周期。     

水杨醛谷氨酸Schiff碱配体及其金属配合物的制备与抑菌活性研究

合成出水杨醛谷氨酸（Sal—Glu）Schiff碱配体及其6种金属配合物,采用红外光谱及紫外光谱对其进行了表征,并进行了抑菌实验。结果表明,配体中C=N中的氮原子以及C-O（酚氧）中的氧原子参与了对金属离子的配位作用,配体及配合物均对大肠杆菌具有抑制作用,其中Sal—Glu—Fe对大肠杆菌的抑菌活性最好,抑菌圈直径最大。     

氧化铁纳米颗粒固定化溶藻菌的除藻作用

为了探讨氧化铁纳米颗粒固定化溶藻菌后对铜绿微囊藻的溶藻作用和降解微囊藻毒素LR(MC-LR)的作用,从太湖水体中分离获得一株属于芽孢杆菌属的溶藻菌,将其与氧化铁纳米颗粒固定化后,以普通Fe2O3作为实验对照,测定其溶藻作用和降解MC-LR作用.以激光粒度仪测定氧化铁纳米颗粒与溶藻菌两者单独和同时存在时的粒径大小及粒径分布,以获得氧化铁纳米颗粒固定化溶藻菌的证据.分析结果表明:在太湖水体中分离获得的一株芽孢杆菌具有较强的溶藻和降解MC-LR的作用,作用24 h后的溶藻率和MC-LR降解率分别达到44.3%和20.5%.同时加入氧化铁纳米颗粒后,溶藻率达到53.0%,MC-LR的降解率达到33.0%.激光粒度仪检测发现,氧化铁纳米颗粒与细菌混合后的颗粒物的平均直径增加到氧化铁纳米颗粒的12.3倍,同时氧化铁纳米颗粒和细菌单独存在时的粒径分布峰消失.氧化铁纳米颗粒是一种具有良好性能的生物固定化材料,可能通过其特有的途径有效地固定化溶藻菌,并增强溶藻菌的溶藻和降解藻毒素作用.     

稀土水杨醛缩苯丙氨酸盐邻菲咯啉配合物的合成、表征及抗菌活性

以稀土氯化物、席夫碱水杨醛缩苯丙氨酸和邻菲咯啉为配体，在无水乙醇溶液中反应，制备了一类新型稀土三元配合物，通过元素分析、摩尔电导、红外光谱、紫外光谱和热重一差热分析，确定了该配合物的化学组成：RE（L）（Phen）Cl（H2O）（RE=Pr^3＋，Nd^3＋，Er^3＋；L=席夫碱水杨醛缩苯丙氨酸）．通过抗菌实验对其抑菌效果进行研究，结果表明配合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，抗菌谱广．     

清肺精清热解毒和生津润燥作用的研究

通过对清肺精清热解毒、抑菌、生津润燥作用的实验研究，发现清肺精对大小鼠炎症早期的渗出、肿胀有明显的抑制作用，促进小鼠酚红排泌量，并对呼吸道感染致病菌抑制作用尤为显著．     

肉鸭肝脏脂肪酸合成酶活性及脂肪酸合成途径的研究

利用放射线检测器和分光光度计,对肉鸭肝脏中参与脂肪酸合成的酶类:乙酰辅酶-A羧化酶,脂肪酸合成酶,NADP-苹果酸脱氢酶,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等酶的活性进行了测试分析.结果表明,肉鸭肝脏的各种脂肪酸代谢酶类的活性表现为:42日龄比21日龄的显著增加,显示随着日龄的增加,鸭肝脏合成脂肪的能力也显著增强.鸡的肝脏进行脂肪酸合成所必需的NADPH主要是由NADP-苹果酸脱氢酶参与的丙酮酸-苹果酸途径提供.与此相比,鸭的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性非常高,显示鸭的脂肪酸合成途径与鸡不同,脂肪酸的合成不仅仅有丙酮酸-苹果酸途径参与,戊糖磷酸循环也起到关键性的作用.     

产广谱细菌素乳酸菌的筛选

利用牛津杯双层平板法从70株乳酸菌中筛选得到2株具有较高抑菌活性的乳酸菌LAB30、LAB211。研究这2株乳酸菌的抑菌物质发现：排除酸性产物乳酸、乙酸以及过氧化氢的干扰,LAB211和LAB30仍具有较高的抑菌活性;对其发酵液进行蛋白酶处理,LAB30的发酵液经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抑菌活性均有降低;而LAB211的发酵液经蛋白酶K处理后有所降低,胰蛋白酶处理没有变化,因此可以判定这两株乳酸菌产生的抑菌物质为细菌素。利用特异性引物PCR分析可知,LAB211和LAB30产生的细菌素并非nisin。抑菌谱实验表明,LAB30和LAB211的发酵液不仅抑制革兰氏阳性菌,而且对部分革兰氏阴性菌也有抑制作用。因此LAB211和LAB30产生的是一类广谱细菌素。     

铅对小鼠脏器中微量元素的影响

为探讨铅的毒性机制 ,防治铅中毒 ,分别测定了醋酸铅染毒小鼠各脏器中铅、钙、铁、锌等金属元素含量和各脏器的脂质过氧化物 (LPO)值及血清乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,结果显示染铅后小鼠多数脏器中镉、钙、铁、锌浓度和LPO值及血清LDH活性均明显高于对照组 ,这表明铅对小鼠多数脏器都有毒性 ,脏器中钙、铁、锌等微量元素含量异常可能是铅引起细胞损伤的重要因素之一     

ND3、NF-κB在遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏、肾脏中的表达定位

的 比较正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏和肾脏组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位3(NADH dehydrogenase 3,ND3)和核转录因子κb(nuclear factor κB,NF-κB)蛋白的表达定位差异。方法 选取正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠各6只,分别采集动物的肝脏和肾脏组织,利用免疫组织化学检测ND3、NF-κB在各组织中的定位和表达水平。结果 ND3、NF-κB表达于长爪沙鼠肝脏实质细胞胞质中,与对照动物相比,糖尿病长爪沙鼠肝脏中NF-κB表达显著升高;ND3还表达于长爪沙鼠肾脏肾小管上皮细胞胞质中,且与对照动物相比,糖尿病长爪沙鼠肾脏中ND3表达显著升高。结论 在糖尿病长爪沙鼠中,ND3显著高表达于肾脏肾小管上皮细胞,NF-κB显著高表达于肝实质细胞,提示肾脏中ND3和肝脏中NF-κB的异常升高可能参与长爪沙鼠糖尿病的发生和发展。