传染性支气管炎病毒血凝抗原的制备

目的利用磷脂酶C处理，制备传染性支气管炎病毒（IBV）血凝抗原。方法将IBV接种9日龄SPF鸡胚，48h后收获尿囊液，经过高速离心浓缩，利用胰酶、产气荚膜梭状芽孢杆菌培养液（含磷脂酶C）处理后，进行常规血凝和血凝抑制试验。结果经过胰酶处理的IBV具有非常强的非特异性。而经过磷脂酶C处理的IBV，该凝集作用可被特异的IBV抗血清所抑制，而不能被ILTV、NDV、Adeno-1和Adeno-3，APIV、AIV、IBDV、HP、MS和MG等抗血清所抑制。结论磷脂酶C处理的IBV，可以用于血凝抑制试验。     

肝细胞肝癌与病毒性肝炎：病毒抗原表达免疫组织化学研究

肝细胞性肝癌是临床高度恶性肿瘤，病情进展迅速，治疗方法有限。从全球捍在男性恶性肿瘤中占６．２％，女性恶性肿瘤中占２．６％。其发病率有明显的地理差异：在北欧和美国为每年１／１０００００￣３／１０００００；南撒哈非洲和南亚居民每年达１５０／１０００００。     

我国推出首个白血病病毒血液筛查方法

人类T淋巴细胞白血病病毒(HTL V)已被证实与成人T淋巴细胞白血病和多种神经系统疾病密切相关。目前世界上几乎所有主要国家和地区均已有HTL V感染及相关疾病的报道,在日本南部、加勤比海地区、我国福建省部分地区等均存在地方性流行区,人群中感染率最高可达1 5 %。约有2 %～1 0 %的HTLV感染者经一段潜伏期后会发生致死性白血病或者瘫痪。输血是HTL V的主要传播途径之一,日本、美国、法国及许多发达国家早在2 0世纪80年代就开始对献血员进行HTL V感染筛查。　　我国是1 999年在教育部重点科技计划资助下,由厦门大学生命科学学院、细…     

EB病毒核抗原1羧基端原核表达产物的纯化方法

EB病毒核抗原1羧基端的原核表达产物以包涵体和可溶性两种形式存在,用镍离子亲和柱分别对其进行了纯化.结果显示,可溶性部分以及经2M尿素溶解后的包涵体的最适咪唑洗脱浓度均为150mM.纯化后重组蛋白的纯度在90%以上.     

口蹄疫病毒抗原表位的编码序列在大肠杆菌中表达

为在大肠杆菌和牛分枝杆菌 BCG中表达口蹄疫病毒 ( Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV) O、A、C三种血清型抗原表位的编码序列 ,我们优化筛选了这三种血清型主要抗原表位的序列 ,设计合成了其编码 DNA序列 ,并将此序列克隆到细菌表达载体 p QE4 1中 ,转化大肠杆菌 M1 5 [p REP4 ],经 IPTG诱导 ,在 SDS-PAGE中得到 34 k D的小鼠二氢叶酸还原酶( DHFR)基因与 FMDV的三型抗原表位编码序列的融合表达的蛋白质带 .     

丙肝病毒核心抗原检测临床应用研究

应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。采用湖南康润公司生产的HCV游离核心抗原试剂盒,对来自门诊或手术前筛查的850例临床样本进行了HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实。850例筛查样本HCV-Ab阳性22例,其中HCV-cAg阳性14例,RT-RNA阳性16例;828例HCV-Ab阴性的样本检出HCV-cAg阳性4例,其中RT-RNA阳性3例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为83.33%(15/18)。HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,敏感性高、特异性好、费用低廉。     

天花粉蛋白的二级结构和B细胞抗原表位预测

为预测天花粉蛋白(TCS)的B细胞抗原表位,采用生物信息软件和互联网服务器,预测TCS的二级结构和分析TCS表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性);再计算平均抗原指数(AI),预测TCS的B细胞抗原表位.结果TCS存在多个潜在的抗原表位,24～32序列(LPNERKLY)的AI(0.394)明显高于其他片段,24～32序列是TCS潜在的B细胞优势抗原表位.说明TCS的定点突变及免疫原性的降低提供了理论指导.     

Preliminary Evaluation of a Candidate Multi-Epitope-Vaccine Against the Classical Swine Fever Virus

A multi-epitope-vaccine MEVABc consisting of two linear neutralizing determinants （BCI： aa693-716; A6： aa844-865） located on antigenic unit B/C and unit A of glycoprotein E2 was prepared to evaluate whether a combination strategy is effective in the design of peptide vaccines. After immunization, pig sera collected every one to two weeks were evaluated by enzyme linked immunosorbent assay. C-straininduced anti-sera and hyper-immune sera cannot recognize overlapping peptides that cover the E2 N-terminus, while MEVAgC is able to elicit high levels of peptide-specific antibody response. When compared with previously studied peptide vaccines PV-BC1 and PV-A6, the same dose of either component in the MEMABc increases the BC1- or A6-specific antibodies （to 1/3-1/2 of the levels of the separate vaccines）. However, the synergy between the antibodies may make MEVAgc much more potent. Moreover, anti-C-strain immunity pre-existing in pigs does not disturb the sequent MEVABc vaccination. Thus, MEVABc can be administrated to pigs which already possess anti-classical swine fever virus immunity. MEVAgC is a promising candidate marker vaccine.     

流行性出血热病毒的细胞培养

用灭活的流行性出血热病毒（EHFV）L99株感染传代培养的Vero-E6细胞,第4d50%的Vero-E6细胞浆内可查到对EHFV鼠血清的特异性荧光,第7-10d阳性细胞数达到100%。用感染第3d的细胞培养上清大批量盲种,第7-10d荧光强度均达到 ,电镜下病毒呈圆形或卵圆形,外膜为电子致密层,界面清楚,包绕着比较疏松的内浆,内浆中有若干个颗粒丝状结构。     

慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定

研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。     

新型呼肠病毒S1基因与宿主细胞相互作用的初步研究

摘要 目的 筛选出新型呼肠病毒S1基因和宿主相互作用的关键区段,为后续的宿主受体蛋白筛选工作提供可靠的基础。 方法 将编码全长S1基因,以及N端和C端阅读框分别克隆入真核表达载体pIRSE2-EGFP,转染敏感细胞株鼠成纤维细胞（L929）和人宫颈癌细胞（Hela）后,通过荧光报告基因EGFP的表达分析,筛选出S1基因与宿主细胞相互作用时起决定性影响的区段。 结果 同等量的3种真核表达质粒在单独转染L929时,pGSN质粒转染后荧光表达量最大,pGSC质粒转染后荧光表达量最小。 不同比例混合的pGS与pGSN进行共转染时,pGSN在转染质粒中的比例越高,荧光表达量也越高。 在Hela细胞中的转染结果与L929相同。 结论 新型呼肠病毒R4株的S1基因N端阅读框编码区（62-406bp）在S1基因转染时起关键作用。     

乙肝病毒前S1抗原与HBeAg及HBV-DNA之间的相关分析

目的：探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与HbeAg及HBV-DNA的关系．分析前S1抗原在临床诊断乙型肝炎病毒复制中的作用．方法：采用ELISA法检测前S1抗原,化学发光法检测乙肝五项指标,PCR法检测HBV-DNA．结果：400例HBV—DNA阳性的乙肝患者中,HbeAg阳性率为86．0％,前S1抗原阳性率为75．5％．其中：前S1抗原阳性率在HbeAg阳性患者中为75．6％、在抗-HBe阳性患者中为75．0％．HBV-DNA阳性情况下,Hbe鲰阳性与HbeAg阴性患者的前S1抗原阳性率,两组经χ^2检验,P〉0．05,无统计学差异．结论：前S1抗原是诊断乙肝病毒复制的有价值的一项血清学指标．     

孕妇巨细胞病毒感染的检测方法学研究

人巨细胞病毒（HCMV）的感染在人群中存在较为普遍，尤其是孕妇感染后极易招致胎儿畸形甚至死亡。本文就近年来发展起来的对孕妇HOWV感染的检测方法作一简要综述。     

传染性法氏囊病病毒分子生物学研究的一些进展

对IBDV近年来的分子生物学方面的研究进展进行概况，主要包括IBDv的基因组结构及理化特性、病毒蛋白、不同型IBDV变异的分子基础和分子生物学诊断技术等，以探讨利用病毒重要基因核酸序列的差异进行IBDV分子流行病学研究及病毒各致病型快速鉴别诊断的可能性．     

鼻咽癌治疗前后TSGF与VCA-IgA的检测意义

目的:观察鼻咽癌患者治疗前后恶性肿瘤相关物质群(TSGF)与EB病毒VCA-IgA抗体的水平和疗效的关系。方法:联合检测58例鼻咽癌患者在治疗前后TSGF水平与VCA-IgA抗体滴度的变化。结果:58例鼻咽癌患者治疗后TSGF水平与VCA-IgA抗体滴度比治疗前下降(P<0.05)。结论:动态监测TSGF和VCA-IgA抗体对于评价鼻咽癌患者的治疗效果有重要临床意义。     

禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.     

MDVRispens株B抗的基因的酶切及序列分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株接种原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,待出现８０％以上细胞病变后收获,提取细胞和病毒的总ＤＮＡ,以此为模板,根据Ｂ抗原基因核苷酸序列设计一对引物,通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出一条约２．８５ｋ的特异性条带,双酶消化后克隆至质粒ｐＵＣ１９,酶切分析表明该病毒的Ｂ抗原基因上ＨｉｎｄⅡ、ＥｃｏＲⅤ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ的酶切位点分布与ＲＢ１Ｂ株、ＧＡ株的     

禽流感病毒H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 采用禽流感病毒多克隆抗体及H9亚型特异性单克隆抗体,研究建立H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H9亚型禽流感病毒.优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.通过使用该方法对野外样品进行检测.结果表明该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H9亚型禽流感病毒.     

含FMDV中和表位的重组病毒颗粒的构建及鉴定

针对FMDV的疫苗研究一直是防控口蹄疫的重点,而病毒样颗粒(VLPs)形式的疫苗因其安全性和近似传统灭活疫苗的良好免疫效果,近年来逐渐成为疫苗研究的一个新方向.本实验利用猪圆环病毒PCV2的衣壳蛋白(CAP)作为载体,分别插入FMDV MYA98毒株的抗原表位组合——VP1蛋白上B细胞表位141~160aa(B)与串联的B细胞和T细胞表位141~160aa-21~40aa-141~160aa(BTB),构建对应重组杆状病毒,分别命名为reBAC-CAP-B,reBAC-CAP-BTB.将上述病毒颗粒转入Sf9细胞表达,收获重组杆状病毒并再次感染Sf9细胞扩大病毒滴度,获得目的蛋白CAP-B,CAP-BTB,经过SDS-PAGE,Western blot鉴定正确,透射电镜观察到20~30nm大小的目的颗粒.