| 重组小鼠14-3-3蛋白theta亚型的构建 |
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| 引用本文： | 张雷,王尔孚,倪红霞,张媛,陈立梅. 重组小鼠14-3-3蛋白theta亚型的构建[J]. 北华大学学报(自然科学版), 2009, 10(4): 314-318 |
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| 作者姓名： | 张雷 王尔孚 倪红霞 张媛 陈立梅 |
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| 作者单位： | 北华大学,基础医学院,吉林,吉林,132013;北华大学,基础医学院,吉林,吉林,132013;北华大学,基础医学院,吉林,吉林,132013;北华大学,基础医学院,吉林,吉林,132013;北华大学,基础医学院,吉林,吉林,132013 |
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| 摘 要： | 目的 克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备该蛋白质的基因重组蛋白质.方法 参照小鼠14-3-3蛋白质θ亚型mRNA结构设计引物,以小鼠脑总RNA为模板,RT-PCR法克隆编码14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,插入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)使其表达谷胱甘肽S转移酶(GST)为标签的融合蛋白质,以凝血酶定点分解融合蛋白并采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化目的 蛋白.结果 RT-PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离可见约800 bp条带,序列分析表明重组质粒pGEX-1433theta中的插入子为738 bp,编码245个氨基酸,其核苷酸及氨基酸序列与Pubmed NM-011739展示的结果一致.重组质粒pGEX-1433theta在BL21(DE3)中的表达量随IPTG诱导时间递增,融合蛋白质为可溶性组分.亲和层析纯化的14-3-3theta在SDS-PAGE上表现为单一条带,表观相对分子质量为30 ku.每L培养菌液可收获4mg基因重组型小鼠14-3-3theta.结论 克隆了编码小鼠14-3-3蛋白质θ亚型的cDNA,制备了高纯度基因重组型小鼠14-3-3theta,为进行单克隆抗体的制备奠定了坚实的基础.
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| 关 键 词： | 小鼠脑 14-3-3蛋白质 原核表达载体 基因重组蛋白 |
Construction of Recombinant Mouse 14-3-3 Protein Theta |
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| ZHANG Lei,WANG Er-fu,NI Hong-xia,ZHANG Yuan,CHEN Li-mei. Construction of Recombinant Mouse 14-3-3 Protein Theta[J]. Journal of Beihua University(Natural Science), 2009, 10(4): 314-318 |
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| Authors: | ZHANG Lei WANG Er-fu NI Hong-xia ZHANG Yuan CHEN Li-mei |
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