| 家蚕抗菌肽CM4和人可溶性BAFF融合基因的克隆、表达及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 刘海峰,刘平,李楠楠,张双全.家蚕抗菌肽CM4和人可溶性BAFF融合基因的克隆、表达及活性鉴定[J].南京师大学报,2008,31(2). |
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| 作者姓名： | 刘海峰 刘平 李楠楠 张双全 |
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| 作者单位： | 江苏省分子医学生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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江苏省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 采用PCR法从含有人可溶性BAFF基因的pET30a( )扩增得到人sBAFF基因,通过rPCR将抗菌肽Cecropin CM4基因的2条单核苷酸链进行扩增得到CM4基因,再采用over-lap PCR法通过linker将hsBAFF与Cecropin CM4融合基因相连接.经纯化和鉴定后,定向插入到原核表达载体pET30a( )中,然后转化E.coliBL21(DE3),通过实验确定了表达该融合基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为5 h.温度为30℃,其表达量占全菌蛋白的40%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到相对分子质量约为22 000的重组蛋白并且存在超声裂解后的上清中.重组蛋白经Western blot检测,结果显示重组蛋白可被鼠抗人可溶性BAFF的抗体识别.采用分子筛Sephadex G-75对重组融合蛋白进行纯化,并经SDS-PAGE对其鉴定.通过对其生物学功能的检测得知,纯化后的重组融合蛋白对大肠杆菌K12D31和真菌有明显的抑菌能力.
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| 关 键 词： | 抗菌肽CM4 人的可溶性BAFF 抗菌活性 融合基因 大肠杆菌 表达 |
Cloning Expression and Characterization of a Bi-functional Antibacterial Peptides CM4 and hsBAFF Fusion Protein in Escherichia Coli |
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| Liu Haifeng,Liu Ping,Li Nannan,Zhang Shuangquan.Cloning Expression and Characterization of a Bi-functional Antibacterial Peptides CM4 and hsBAFF Fusion Protein in Escherichia Coli[J].Journal of Nanjing Normal University(Natural Science Edition),2008,31(2). |
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| Authors: | Liu Haifeng Liu Ping Li Nannan Zhang Shuangquan |
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