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| 基于CRISPR/Cas9技术建立敲除Plac9基因的人胚肾细胞株 | |
| 作者单位： | ;1.中南民族大学生命科学学院生物医学研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室 |
| 摘 要： | 目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术和流式细胞术相结合,获得可编辑Plac9基因敲除的人胚肾细胞株(293T).方法:根据Plac9外显子设计了4个sgRNAs(S1,S2,S3,S4),分别将其与PX458载体连接,构建了PX458-S1(S2/S3/S4)载体.通过转染试剂lipo2000将表达载体分别转染至293T细胞中,并以流式细胞术对带绿色荧光蛋白标记的细胞进行单细胞分选,分选后的细胞培养一段时间后,用基因组测序和错配酶酶切进行筛选.从筛选好的细胞中提取蛋白,进行Western Blot检测敲除效率.结果:采用CRISPR/Cas9和流式细胞术结合技术成功构建了Plac9蛋白表达缺失的人胚肾细胞株.结论:该方法简便快捷、效率高,可广泛地用于编辑各种细胞和细胞功能研究. |
| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 基因编辑技术 基因敲除 Plac9 |
Establishment of Plac9 Gene Knockout 293T Cell Line via CRISPR/Cas9 Technique |
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| Abstract: | |
| Keywords: | |
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