胡杨ARGONAUTE1基因克隆与亚细胞定位

以杨树基因组数据库为背景,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,从胡杨中克隆得到了与拟南芥AGO1(At AGO1)基因同源的全长开放阅读框。测序结果表明:该基因开放阅读框为3 180 bp,编码由1 059个氨基酸残基组成的蛋白质。该蛋白质与At AGO1氨基酸相似性为79.51%,命名为Pe AGO1。推导Pe AGO1等电点和分子质量分别为9.45和117 ku,不含信号肽序列,推测Pe AGO1不是分泌蛋白。系统进化分析表明:胡杨Pe AGO1蛋白在进化上与桃(Prunus persica)、葡萄(Vitis vinifera L.)、巨桉(Eucalyptus grandis Hill ex Maiden)等木本植物亲缘关系较近,与单子叶植物玉米(Zea mays L.)、水稻(Oryza sativa)等亲缘关系较远。构建细胞定位检测载体35S∷GFP-Pe AGO1,采用原生质体转化法将其瞬时表达于84K杨树叶片中。激光共聚焦显微镜观察结果表明:Pe AGO1蛋白定位于细胞核中。