耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析 |
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引用本文: | 廖思明,孙靓,王青艳,申乃坤,朱婧,黄桂媛,黄纪民,陈东,黄日波.耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析[J].广西科学,2017,24(1):92-99. |
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作者姓名: | 廖思明 孙靓 王青艳 申乃坤 朱婧 黄桂媛 黄纪民 陈东 黄日波 |
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作者单位: | 1. 广西大学生命科学与技术学院,广西南宁 530004;广西科学院,国家非粮生物质能源工程技术研究中心,非粮生物质酶解国家重点实验室,广西生物炼制重点实验室,广西南宁 530007;2. 广西科学院,国家非粮生物质能源工程技术研究中心,非粮生物质酶解国家重点实验室,广西生物炼制重点实验室,广西南宁 530007 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目,广西自然科学基金项目,广西科学与技术开发计划项目,广西科学院基本科研项目 |
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摘 要: | 【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX。将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】AmyGX基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,V_(max)、K_m值分别为0.19U/mg、3.14mg/mL,热半失活温度T_(50)~(30)值为65.2℃;Zn~(2+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Fe~(3+)、Ba~(2+)对该酶具有明显的抑制作用,Na~+、K~+对该酶有激活作用,Mg~(2+)、Ca~(2+)的影响则不明显。【结论】AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景。
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关 键 词: | Anoxybacillus sp.GXS-3菌株 重组淀粉酶AmyGX 克隆与表达 酶学性质 |
收稿时间: | 2017/2/8 0:00:00 |
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