强MAR的分离及其体内外功能鉴定 |
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作者姓名: | 张可伟 王健美 杨国栋 郭兴启 温孚江 崔德才 郑成超 |
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作者单位: | 山东农业大学生命科学学院,泰安,271018 |
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基金项目: | 本工作为国家转基因植物研究与产业化专项(批准号:J99-A-038),国家自然科学基金(批准号:39970075)资助项目. |
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摘 要: | 将MAR(matrix attachment region)构建到外源基因表达盒两侧可以促进外源基因的表达克服基因沉默。用PCR方法从烟草和拟南芥中分离到4个新的MAR序列(TM2,TM3,AM1和AM2),以水稻悬浮细胞为材料,提取大量细胞核制备核基质,以已发表的MAR(TM1)和对照,对4个新MARs序列进行体外结合实验,结果表明TM2和TM3与核基质的结合能力强于已知MAR序列。将4个新MARs和对照分别顺向构建和表达载体pBI121 gus基因表达盒两侧,用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因植株。对转基因植株体内GUS酶活性检测表明,TM1,TM2,TM3和AM1均能命名外源基因表达增强,其中TM2增强5倍,TM1增强1.5倍,TM2增强效果强于对照TM1。表明分离到一个新的强MAR,可以用于高效表达载体的构建。对5个MARs的序列特征、体外结合能力及外源基因表达影响三者之间的关系进行了分析,并对获得的强MAR在植物基因工程中的应用进行了讨论。
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关 键 词: | 功能鉴定 MAR分离 核基质结合序列 体外结合 β-葡糖醛酸酶 外源基因表达 高效表达载体 植物基因工程 |
收稿时间: | 2002-04-23 |
修稿时间: | 2002-04-23 |
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