| 牛肠激酶催化亚基cDNA的克隆及融合表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 黄鹤 甘一如 张镜宇. 牛肠激酶催化亚基cDNA的克隆及融合表达载体的构建[J]. 天津大学学报(自然科学与工程技术版), 2004, 37(10): 847-851 |
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| 作者姓名： | 黄鹤 甘一如 张镜宇 |
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| 作者单位： | [1]天津大学化工学院,天津300072 [2]天津医科大学内分泌所,天津300070 |
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| 基金项目： | 国家"九五"重点攻关项目(96 C02 01 04). |
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| 摘 要： | 肠激酶(Enterokinase,EK)是目前生物制药领域纯化重组蛋白产品时用于切割融合蛋白的首选工具酶之一．为克隆表达牛肠激酶催化亚基(EKL)编码的基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化,从市售肉牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增其cDNA片段,将此片段克隆于pUCm-T载体中进行全序列分析．结果表明克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致．随后,将目的基因片段插入pET32a融合型表达载体中．经测序证实其重组DNA5’端多克隆位点与重组片段的接口处核苷酸顺序准确无误,所表达重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量为50kD,表达量达38％,为进一步进行Enterokinase催化亚基蛋白表达及活性研究奠定了基础．
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| 关 键 词： | 牛肠激酶催化亚基 cDNA克隆 融合表达载体 |
| 文章编号： | 0493-2137(2004)10-0847-05 |
| 修稿时间： | 2003-03-26 |
Bovine Enterokinase Catalytic Subunit cDNA Cloning and Construction of Fusion Expression Plasmid |
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| HUANG He,GAN Yi-ru,ZHANG Jing-yu. Bovine Enterokinase Catalytic Subunit cDNA Cloning and Construction of Fusion Expression Plasmid[J]. Journal of Tianjin University(Science and Technology), 2004, 37(10): 847-851 |
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| Authors: | HUANG He GAN Yi-ru ZHANG Jing-yu |
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| Affiliation: | HUANG He~1,GAN Yi-ru~1,ZHANG Jing-yu~2 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine Enterokinase catalytic subunit cDNA cloning fusion expression plasmid |
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