基于质谱的蜂王浆蛋白质组学样品前处理方法优化

蜂王浆中高丰度蛋白的存在，导致其蛋白质组学研究存在非常大困难，该文利用超高分辨质谱技术对来自板栗和油菜花源的两种蜂王浆，分别采用4种蛋白样品前处理方法开展蛋白组学研究，包括超滤膜辅助（FASP）酶解方法、溶液内酶解方法、胶内蛋白分级后酶解方法与溶液内酶解后肽段分级方法，以寻找最合适蜂王浆样品的酶解方法。肽段经过液相-超高分辨质谱检测，在FDR<0.01的卡值下，4种方法在板栗蜂王浆中分别鉴定到了154、106、316、213个蛋白质，在油菜蜂王浆中分别鉴定到了124、121、243、198个蛋白质。胶内蛋白分级酶解方法可以有效分离高低丰度的蛋白质从而鉴定到更多的蛋白质和肽段数目；而FASP方法在未分级的情况下鉴定到的蛋白质和肽段数目比较可观，是一种性价比较高的实验方法。不同的方法之间鉴定蛋白质种类存在互补性，4种方法共鉴定到了445个蛋白质，是目前已有报道中鉴定蜂王浆蛋白质数目最多的。研究结果为蜂王浆蛋白质组学研究提供了技术支撑，同时鉴定到的新的蜂王浆蛋白种类可为蜂王浆蛋白功能研究提供参考。