扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉（Pen.expansum）WMC20718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤，其酶纯化了18.5倍，获得了比活性为4200U/mg的纯碱性脂肪酶，提取得率48.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和高效反相色谱（RP-HPLC）检测，分别达到了SDS-PAGE电泳纯和RP-HPLC色谱纯。经SDS-PAGE和Sephadex G-150凝胶过滤色谱，分别测得酶的相对分子质量为27500和28200，表明该酶以单体形式存在。N末端20个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为30℃，在35℃以下稳定，45℃处理30min仅残留30%酶活性；PH稳定范围在6.5-10.5之间，最适PH值为10.0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大，而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内，对脂肪酶的活性影响较小。