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| 哈维氏弧菌vgrG基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | |
| 作者姓名： | 要欣平 周永灿 孙云 曹贞洁 |
| 作者单位： | 1. 海南大学海南省南海海洋资源利用国家重点实验室;2. 海南大学海南省热带水生生物技术重点实验室 |
| 基金项目： | 海南省自然科学基金（320QN212）； |
| 摘 要： | VI型分泌系统(T6SS)是革兰氏阴性菌特有的一种多功能分泌系统，它与致病菌的致病性密切相关；而vgrG则是T6SS系统的结构蛋白之一，它与T6SS的功能直接相关.为了获得哈维氏弧菌vgrG基因的外源重组蛋白及制备其多克隆抗体，本研究以哈维氏弧菌QT520菌株的DNA为模板，在扩增获得vgrG基因后，构建了原核表达载体pET32a-vgrG并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.结果显示，在16℃和1mmol·L-1 IPTG诱导20 h的条件下，可诱导重组蛋白rvgrG大量表达，条带大小与预期的分子量(88 kDa)一致；通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白rvgrG进行纯化，获得了纯度较高的目的蛋白rvgrG；将rvgrG重组蛋白通过腹腔注入小鼠体内后观察其毒性，结果显示rvgrG对小鼠无毒害作用；进一步用纯化蛋白rvgrG制备多克隆抗体，经ELISA检测，vgrG多克隆抗体的效价高达1∶320 000；蛋白免疫印迹(Western blot)检测表明，本实验所制备的vgrG多克隆抗体特异性强，可为后续进行vgrG蛋白的致病性及致... |
| 关 键 词： | 哈维氏弧菌 vgrG 原核表达 多克隆抗体 |