| 重组人瘦素蛋白的原核表达、纯化和生物学活性鉴定 |
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| 作者姓名： | 周向阳 李仲凯 郝腾飞 丁光硕 郑文慧 李文娟 |
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| 作者单位： | 河北大学基础医学院,河北保定 071000;河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室,河北保定071000;河北农业大学生命科学学院,河北保定071001;河北大学公共卫生学院,河北保定071000;河北大学基础医学院,河北保定 071000 |
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| 基金项目： | 河北省自然科学基金资助项目(H2019201084);河北大学医学学科培育项目(2021A01);河北大学大学生创新创业项目(2022309) |
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| 摘 要： | 为解决重组人瘦素蛋白(hLeptin)大规模生产过程中包涵体的形成以及体外重折叠过程中蛋白聚集导致的低产量,探究在大肠杆菌中hLeptin高水平可溶性的表达,并进行生物学活性检测.利用hLeptin成熟肽基因与pET-30a(+)-SUMO系统构建融合表达质粒pET-30a(+)-SUMO-Lep,转化至大肠杆菌BL21(DE3),加入异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行诱导表达,之后经Ni金属亲和层析纯化,并切去SUMO融合标签后获得成熟hLeptin.重组hLeptin表达量高,主要以可溶形式存在.通过KM小鼠减肥实验和CCK8实验证明重组hLeptin具有生物学活性.综上,使用SUMO融合标签,以增强hLeptin在大肠杆菌中的高效可溶性高纯度的表达,为大规模生产hLeptin提供了一种新方法,同时为表达可溶性重组蛋白研究提供了一定的基础.
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| 关 键 词： | 重组hLeptin SUMO 原核表达 生物学活性 |
| 收稿时间： | 2022-03-02 |
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