凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞菌LexA蛋白与其靶位点的特异性结合 |
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作者姓名: | 陈炫 汤绍辉 唐晖 查庆兵 刘芳 |
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作者单位: | 暨南大学附属第一医院临床实验中心,广东广州510630 |
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摘 要: | 目的:分析铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性。结果:构建了pET22bLexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合。结论:推定LexA结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点。
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关 键 词: | 铜绿假单胞菌 SOS反应 阻遏蛋白(LexA) 结合位点 |
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