| 连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性 |
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| 引用本文： | 吴玉姝,吴敏,刘敏.连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的活性[J].聊城大学学报(自然科学版),2018(2):8-14. |
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| 作者姓名： | 吴玉姝 吴敏 刘敏 |
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| 作者单位： | 聊城大学生物制药研究院;聊城市人民医院 |
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| 摘 要： | 目的:灵敏检测尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)活性有利于生物医学研究和疾病预后.这里,构建一种连接酶反应介导的荧光策略用于高效检测UDG活性.方法:在本策略中,两条短寡核苷酸链分别与发夹探针环部序列的一半杂交,形成含缺口的DNA复合物.在UDG作用下,发夹探针环部的单个U碱基被移除,产生无嘌呤/无嘧啶(AP)位点.AP位点能抑制缺口处的连接酶反应,使位于发夹探针末端的立足点和链迁移区域仍彼此邻近,从而引发杂交链式反应(HCR),产生大量G四倍体(G4)结构.最后,G4与N甲基卟啉IX(NMM)结合,产生增强的荧光信号.结果:本策略检测限低至0.000 20U/mL,并能区分UDG与其它DNA糖基化酶.结论:本策略为生物医学研究和疾病预后提供了一种有潜力的工具用于灵敏定量检测UDG活性.
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| 关 键 词： | 连接酶反应 尿嘧啶-DNA糖基化酶 单个尿嘧啶碱基 无嘌呤/无嘧啶位点 碱基错配 |
A Ligase Reaction-mediated Fluorescent Strategy for Highly Efficient Assaying of Uracil-DNA Glycosylase Activity |
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