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| 大肠杆菌cDNA文库的构建与质量分析 | |
| 作者姓名： | 肖业 王婷婷 向双林 |
| 作者单位： | 湖南师范大学生命科学学院 |
| 基金项目： | 国家973计划资助项目(2010CB529900);长沙市科技局资助项目(K1205221-31) |
| 摘 要： | 采用Stratagene公司的cDNA文库构建试剂盒构建大肠杆菌的cDNA文库,从中筛选出与RNaseⅢ有相互作用的蛋白,为研究RNaseⅢ蛋白在原核生物中的作用奠定基础.用Trizol试剂提取大肠杆菌的总RNA,在E.coli poly(A)Polymerase作用下给mRNA特异性地加上poly(A)尾,分离纯化mRNA,利用mRNA作为模板反转录合成双链DNA.经pfx酶补平双链末端,在两端加上EcoRⅠ接头,XhoⅠ酶切消化产生粘性末端.用CHROMA SPIN-400column分级分离纯化cDNA片段,与p TRG XR载体连接后,电击转入XL1-BLUE MRF'菌电转感受态中.得到原始文库,经计算文库的容量达到3×10~6个克隆.用PCR方法测得文库的重组率为100%,插入片段的平均长度基本位于300 bp以上,测定放大文库的滴度为:3.15×1010pfu/m L.说明构建的大肠杆菌cDNA文库质量比较高,适合用于筛选目的基因克隆. |
| 关 键 词： | 大肠杆菌 细菌双杂交 cDNA文库 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |