阳春砂倍半萜合酶AvTPS基因的生物信息学分析和表达纯化 |
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作者姓名: | 张斌 印思颖 付献瑶 沈良华 郑自由 周仁超 王峰 |
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作者单位: | 暨南大学 药学院基因组药物研究所,广东 广州510632;中山大学 生命科学学院/广东省热带亚热带植物资源重点实验室,广东 广州510275 |
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基金项目: | 实验室开放基金;广东省中医药局科研课题;广东省自然科学基金 |
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摘 要: | 目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233, Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1 650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到pMD-18T载体.生物信息分析表明,AvTPS蛋白含549个氨基酸残基,二级结构以α-螺旋为主等信息.通过蛋白的表达和纯化,获得纯度为94.22%的可溶性AvTPS蛋白.结论:从阳春砂中可成功克隆出AvTPS的编码基因,为后续研究其基因在阳春砂中的特异性表达奠定基础.
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关 键 词: | 阳春砂 倍半萜合酶 表达纯化 生物信息学分析 |
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