青稞叶片原生质体制备体系优化

青稞是青藏高原的主要农作物,研究其原生质体制备的最优体系具有重要意义。以甘露醇浓度、酶解时间、离心速度和不同苗龄为主要影响因素,采用正交试验法,对青稞原生质体制备进行优化。结果表明:最优条件为以培养7 d的青稞幼叶为材料,3%纤维素酶+1%果胶酶+0. 5 mol/L甘露醇+0. 1%MES+1 mmol/L CaCl22H2O+0. 1%BSA构成酶解液,25℃,60 r/min,黑暗酶解5 h,900 r/min离心5 min收集细胞,原生质体产量可达3. 2×106个/g,活力为85. 42%。